孕婦外周血胎兒游離DNA無創(chuàng)產(chǎn)前檢查在診斷胎兒染色體異常中的應(yīng)用價值

花 睿

（中國貴航集團(tuán)三〇二醫(yī)院，貴州 安順 561000）

導(dǎo)致新生兒發(fā)生出生缺陷最主要的原因是其染色體數(shù)目為非整倍體。我國是出生缺陷高發(fā)國家。加強(qiáng)對孕婦進(jìn)行產(chǎn)前胎兒染色體異常篩查對提高母嬰安全及響應(yīng)國家優(yōu)生優(yōu)育政策具有積極的意義[1]。目前，我國對孕婦進(jìn)行產(chǎn)前檢查的主流應(yīng)用技術(shù)為超聲技術(shù)。使用超聲技術(shù)對孕婦進(jìn)行產(chǎn)前檢查具有經(jīng)濟(jì)性高、操作簡便及顯像質(zhì)量高等優(yōu)勢，但對新生兒出生缺陷的檢出率不高，存在一定的誤診率和漏診率。相關(guān)的研究結(jié)果顯示，染色體異常患兒占所有出生缺陷患兒的80%以上[2]。臨床上比較常見的胎兒染色體異常類型包括21-三體異常、18-三體異常及13-三體異常等。對孕婦進(jìn)行羊水穿刺胎兒染色體核型檢查可有效地診斷胎兒染色體異常，但可導(dǎo)致孕婦發(fā)生流產(chǎn)、羊水滲漏及宮內(nèi)感染等并發(fā)癥。因此羊水穿刺胎兒染色體核型檢查未能在臨床上得到推廣。孕婦外周血胎兒游離DNA無創(chuàng)產(chǎn)前篩查（Non-Invasive Prenatal Testing，NIPT）的出現(xiàn)為產(chǎn)前檢查提供了新的措施。本文主要是探討孕婦外周血胎兒游離DNA NIPT在診斷胎兒染色體異常中的應(yīng)用價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本文的研究對象為2019年4月至2020年10月期間在貴航集團(tuán)三〇二醫(yī)院進(jìn)行產(chǎn)前檢查的980例孕婦。研究對象的納入標(biāo)準(zhǔn)為：1）簽署了參與本次研究的知情同意書。2）經(jīng)超聲檢查確認(rèn)為單胎妊娠產(chǎn)婦。3）能配合完成各項(xiàng)檢查。4）具有良好的認(rèn)知功能和溝通能力。5）孕婦及其配偶的染色體正常。5）近30 d內(nèi)未接受過免疫治療。研究對象的排除標(biāo)準(zhǔn)為：1）患有嚴(yán)重的妊娠合并癥。2）未能完成隨訪。3）近1年內(nèi)輸注過異體血制品。4）臨床資料不全。本次研究經(jīng)該醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。這些孕婦的年齡為35～48歲，平均年齡為（38.16±2.15）歲；其孕周為11～22周，平均孕周為（17.48±3.15）周。

1.2 方法

這些孕婦均使用外周血胎兒游離DNA NIPT診斷胎兒染色體異常，方法是：采集這些孕婦10 mL的外周靜脈血。將獲得的血液標(biāo)本放在streckcell-FreeDNA BCT管中保存。在72 h內(nèi)對血液樣本進(jìn)行離心處理。將2 mL的上清血漿放入EP管中，再放入內(nèi)部溫度為-20℃的冰箱中備用。從血漿中游離、提取 DNA，并進(jìn)行測序。使用晶芯無創(chuàng)產(chǎn)前數(shù)據(jù)分析管理軟件獲取21、18、13號染色體及其他染色體的Z值。結(jié)合每個樣品的Z值判定孕婦發(fā)生胎兒染色體異常的情況。對診斷結(jié)果為陽性的孕婦進(jìn)行羊水穿刺胎兒染色體核型檢查，方法是：在B超引導(dǎo)下對孕婦進(jìn)行經(jīng)腹羊水穿刺。使用細(xì)胞培養(yǎng)G顯帶法或高通量測序法鑒定染色體的核型。將這些孕婦進(jìn)行羊水穿刺胎兒染色體核型檢查的結(jié)果作為確診胎兒核型異常的依據(jù)。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察為這些孕婦使用外周血胎兒游離DNA NIPT診斷胎兒染色體異常的結(jié)果，計(jì)算其使用外周血胎兒游離DNA NIPT診斷胎兒染色體異常的靈敏度、特異度、陽性預(yù)測值及陰性預(yù)測值。對檢查結(jié)果為陰性的孕婦進(jìn)行隨訪，觀察胎兒是否發(fā)生染色體異常的情況。觀察不同年齡段孕婦發(fā)生胎兒染色體異常的情況。觀察這些孕婦發(fā)生胎兒染色體異常的核型。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

對本次研究中的數(shù)據(jù)均采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，兩個獨(dú)立樣本采用t檢驗(yàn)，多個樣本采用F檢驗(yàn)，采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用百分比（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 這些孕婦使用外周血胎兒游離DNANIPT診斷胎兒染色體異常的結(jié)果

在這些孕婦中，有65例（6.63%）孕婦使用外周血胎兒游離DNA NIPT診斷胎兒染色體異常的結(jié)果為陽性。其中21-三體異常、18-三體異常、13-三體異常、性染色體異常及其他染色體異常的孕婦各有21例（2.14%）、10例（1.02%）、5例（0.51%）、4例（0.41%）及25例（2.55%）。對其余孕婦進(jìn)行隨訪的結(jié)果證實(shí)，為980例孕婦使用外周血胎兒游離DNA NIPT診斷胎兒染色體異常均未發(fā)生假陰性的情況。為這些孕婦使用外周血胎兒游離DNA NIPT診斷21-三體及18-三體異常的靈敏度、特異度、陽性預(yù)測值及陰性預(yù)測值均較高。為這些孕婦使用外周血胎兒游離DNA NIPT診斷13-三體異常的靈敏度、特異度及陰性預(yù)測值均較高，但陽性預(yù)測值較低。詳見表1。

表1 這些孕婦使用外周血胎兒游離DNA NIPT診斷胎兒染色體異常的結(jié)果

2.2 不同年齡段孕婦發(fā)生胎兒染色體異常的情況

在這些孕婦中，年齡為26～30歲的孕婦發(fā)生胎兒染色體異常的幾率最低，為4.01%；年齡＞45歲的孕婦發(fā)生胎兒染色體異常的幾率最高，為30.77%。詳見表2。

表2 不同年齡段孕婦發(fā)生胎兒染色體異常的情況[例（%）]

2.3 這些孕婦發(fā)生胎兒染色體異常的核型

這些孕婦發(fā)生胎兒染色體異常的核型為“47，XN，+21”、“47，XXX”及“47，XN，+ 18”。詳見表3。

表3 這些孕婦發(fā)生胎兒染色體異常的核型

3 討論

染色體異常是導(dǎo)致新生兒發(fā)生出生缺陷的重要因素。染色體是基因的載體。若胎兒的染色體發(fā)生異常，則說明胎兒存在發(fā)育異常的情況。目前臨床上對染色體異常發(fā)生的機(jī)制尚不明確[3]。據(jù)統(tǒng)計(jì)，染色體異常新生兒約占所有新生兒的0.6%。染色體為非整倍體是臨床上最常見的染色體異常類型。在孕婦妊娠的早期對其進(jìn)行胎兒DNA篩查可及時地發(fā)現(xiàn)胎兒染色體異常的情況，避免為其家庭造成精神和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，達(dá)到優(yōu)生優(yōu)育的目的[4]。

NIPT技術(shù)是一項(xiàng)新興的產(chǎn)前篩查技術(shù)。利用NIPT技術(shù)對孕婦外周血中游離的胎兒DNA進(jìn)行深度測序可獲得胎兒染色體的信息，比較準(zhǔn)確地判斷胎兒染色體異常的情況。為孕婦使用外周血胎兒游離DNA NIPT診斷胎兒染色體異常不會對其造成創(chuàng)傷，操作簡單，檢查時間短，費(fèi)用較低[5]。本次研究的結(jié)果顯示，在這980例孕婦中，胎兒染色體異常發(fā)生率最高的是年齡＞45歲的孕婦；其次是年齡為41～45歲的孕婦。由此推測，孕婦年齡超過40歲可能是導(dǎo)致胎兒染色體異常的危險因素[6]。

本次研究的結(jié)果證實(shí)，使用外周血胎兒游離DNA NIPT診斷胎兒染色體異常的靈敏度、特異度及陰性預(yù)測值均較高，值得在臨床上推廣應(yīng)用。