賀明陽(yáng)，洪 敏*，王日葵，喻最新，朱 莉，周 煉，鄧涂靜

（1.西南大學(xué)/中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院柑桔研究所，重慶 400712；2.中國(guó)科學(xué)院華南植物園植物資源保護(hù)與可持續(xù)利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 510650；3.全國(guó)農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣服務(wù)中心，北京 100125）

柑橘是世界上最重要的水果之一，栽培歷史悠久[1]，因其獨(dú)特的風(fēng)味、口感、香氣和多種保健功效廣受消費(fèi)者喜愛[2]。柑橘果實(shí)浮皮是成熟后期或采后衰老過程中普遍發(fā)生的一種生理性病害，包裹果肉的囊瓣膜（囊衣）與果皮分離后浮起并產(chǎn)生空隙，常伴隨果實(shí)?；涂菟?，果實(shí)糖酸品質(zhì)劣變、風(fēng)味寡淡[3-4]。寬皮柑橘（Citrus reticulataBlanco）是重要的柑橘類水果[5]，產(chǎn)量占中國(guó)柑橘總產(chǎn)量的65%，果實(shí)浮皮現(xiàn)象嚴(yán)重[4]，浮皮的危害程度隨采收期推遲而加劇[6]，是柑橘產(chǎn)業(yè)面臨的重要問題。浮皮的發(fā)生與采前因素（品種、氣候、果園管理、采收期等）和采后因素（貯藏條件等）有關(guān)[3,6]，而浮皮發(fā)生的內(nèi)在機(jī)制尚不明確，還需從更多角度進(jìn)行分析。

研究發(fā)現(xiàn)浮皮與內(nèi)源激素水平變化密切相關(guān)。外源赤霉素的施用對(duì)柑橘果皮發(fā)育具有重要調(diào)控作用[7]，能夠調(diào)節(jié)細(xì)胞膜通透性[8]，延緩果實(shí)著色，增加果實(shí)白皮層的致密性，減少浮皮的發(fā)生[9-10]。Ibanez[11]和Martinelli[12]等發(fā)現(xiàn)赤霉素信號(hào)相關(guān)基因在柑橘浮皮果皮中表達(dá)受到抑制。張?zhí)熘綶13]利用溫州蜜柑‘宮川’及其耐浮皮‘芽變’為材料進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)果實(shí)發(fā)育后期浮皮果白皮層中脫落酸（abscisic acid，ABA）含量高于耐浮皮果。王向陽(yáng)等[14]發(fā)現(xiàn)貯藏期間‘椪柑’枯水果果皮ABA含量始終高于正常果果皮，生長(zhǎng)素含量始終低于正常果果皮。陳昆松等[15]發(fā)現(xiàn)‘本地早’貯藏過程中果肉ABA含量逐漸降低，果皮ABA積累，果皮生長(zhǎng)素水平迅速上升，認(rèn)為果皮組織衰老遲于果肉，且有二次生長(zhǎng)趨勢(shì)。本團(tuán)隊(duì)從貯藏30 d后的柑橘果皮中檢測(cè)了3 種生長(zhǎng)發(fā)育相關(guān)激素，發(fā)現(xiàn)采后果皮大量積累ABA，且浮皮時(shí)ABA含量顯著下調(diào)。目前浮皮時(shí)果皮ABA積累變化尚無(wú)定論，涉及不同品種和貯藏期，且采后貯藏過程中ABA代謝基因在浮皮果實(shí)中的表達(dá)情況尚不清楚，因此探究寬皮柑橘浮皮時(shí)ABA積累變化及其代謝基因表達(dá)特征具有重要意義。

類胡蘿卜素代謝是ABA生物合成主要途徑[16]。丙酮酸和3-磷酸甘油醛經(jīng)2-C-甲基-D-赤蘚糖醇-4-磷酸途徑，由牻牛兒基牻牛兒基焦磷酸合成酶（geranylgeranyl diphosphate synthase，GGPPS）催化生成牻牛兒基牻牛兒基焦磷酸（geranylgeranyl diphosphate，GGPP）[17]。GGPP經(jīng)八氫番茄紅素合成酶（phytoene synthase，PSY）、八氫番茄紅素脫飽和酶（phytoene desaturase，PDS）、15-順-ζ-胡蘿卜素異構(gòu)酶、ζ-胡蘿卜素脫飽和酶（ζ-carotene desaturase，ZDS）、胡蘿卜素異構(gòu)酶（carotene isomerase，CRTISO）催化合成全反式番茄紅素[18]。番茄紅素經(jīng)ε-和β-環(huán)化（α-分支）、羥基化生成葉黃素，主要有番茄紅素ε環(huán)化酶（lycopeneε-cyclase，LCYE）、番茄紅素β環(huán)化酶（lycopeneβ-cyclase，LCYB）、β-胡蘿卜素羥化酶（β-carotene hydroxylase，BCH）、ε-胡蘿卜素羥化酶參與[19]。番茄紅素經(jīng)β-環(huán)化（β-分支）、羥基化和環(huán)氧反應(yīng)生成β-胡蘿卜素、β-隱黃質(zhì)、玉米黃質(zhì)、花藥黃質(zhì)、紫黃質(zhì)、新黃質(zhì)，主要有LCYB、BCH、玉米黃質(zhì)環(huán)氧酶（zeaxanthin epoxidase，ZEP）、紫黃質(zhì)脫環(huán)氧酶（violaxanthin de-epoxidase，VDE）、新黃質(zhì)合成酶參與[20]。辣椒紅素/辣椒玉紅素合成酶（capsanthin-capsorubin synthase，CCS）可催化花藥黃質(zhì)、紫黃質(zhì)分別生成辣椒紅素和辣椒玉紅素，辣椒紅素經(jīng)ZEP催化生成辣椒玉紅素[17]。β-胡蘿卜素經(jīng)類胡蘿卜素裂解雙加氧酶（carotenoid cleavage dioxygenases，CCD）催化合成獨(dú)腳金內(nèi)酯[21-22]。紫黃質(zhì)和新黃質(zhì)經(jīng)9-順-環(huán)氧類胡蘿卜素雙加氧酶（nine-cis-epoxycarotenoid dioxygenase，NCED）催化合成ABA前體物質(zhì)黃質(zhì)醛[16,23]。ABA分解代謝主要由脫落酸8’-羥化酶（abscisic acid 8’-hydoxylase，AB1）催化[24]。MYB68、ABF3轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控ABA代謝[25-26]。

‘克里曼丁’和‘椪柑’寬皮柑橘類采后易發(fā)生浮皮，因此，本研究以貯藏30 d的兩個(gè)柑橘品種為材料，運(yùn)用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry，HPLC-MS/MS）和實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（quantitative real-time polymerase chain reaction，q-PCR）技術(shù)，解析浮皮與正常果皮ABA、類胡蘿卜素組分含量的差異以及ABA代謝基因表達(dá)特征。研究結(jié)果有助于揭示柑橘浮皮發(fā)生的內(nèi)在機(jī)制，為柑橘采后浮皮防控技術(shù)研發(fā)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

‘克里曼丁’和‘椪柑’果實(shí)于2018年采自國(guó)家柑橘種質(zhì)資源圃（重慶北碚）。采摘大小一致、色澤均勻、無(wú)機(jī)械損傷、無(wú)病蟲害、九成熟的果實(shí)為材料。

多糖多酚植物總RNA提取試劑盒（DP441） 天根生化科技（北京）有限公司；PrimeScript?RT reagent Kit with gDNA Eraser（Perfect Real Time）反轉(zhuǎn)錄試劑盒（RR047A）、SYBR?Premix ExTaq? II（Tli RNaseH Plus）熒光定量試劑盒（RR820A） 寶生物工程（大連）有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

HPLC-MS/MS儀 美國(guó)Waters公司；高效液相色譜儀 美國(guó)安捷倫公司；H1850R臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)長(zhǎng)沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司；YGC-16A全自動(dòng)氮吹濃縮儀 鄭州寶晶電子科技有限公司；CFX96TM實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀 美國(guó)伯樂公司。

1.3 方法

1.3.1 原料處理

用500 mg/L咪鮮胺浸泡果實(shí)30 s，撈出瀝干，用聚乙烯薄膜袋單果包裝。處理后的果實(shí)置于溫度18～20 ℃、相對(duì)濕度85%～90%條件下貯藏。貯藏30 d后選擇浮皮程度一致的果實(shí)為浮皮樣品，正常果實(shí)為對(duì)照組樣品（圖1）。15 個(gè)果實(shí)為一組，設(shè)3 組重復(fù)，分別取1/4果皮用液氮速凍，混合粉碎后于-80 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

圖1 柑橘貯藏30 d后正常和浮皮果實(shí)的縱切面圖Fig.1 Longitudinal section of normal mandarins and those with peel puffing after 30 d storage

1.3.2 果實(shí)浮皮指數(shù)及果皮水分質(zhì)量分?jǐn)?shù)的測(cè)定

100 個(gè)果實(shí)為一組，設(shè)3 組重復(fù)，進(jìn)行果實(shí)浮皮指數(shù)和果皮水分質(zhì)量分?jǐn)?shù)測(cè)定。果實(shí)浮皮指數(shù)測(cè)定參考石學(xué)根等[27]的方法。用1 cm直徑的打孔器在每個(gè)果實(shí)的果皮對(duì)角線上各打一個(gè)孔，采用直接干燥法測(cè)定果皮水分質(zhì)量分?jǐn)?shù)。

1.3.3 果皮脫落酸含量的測(cè)定

脫落酸含量測(cè)定參考Pan Xianqing等[28]的方法。選用外標(biāo)法進(jìn)行定量分析。稱取50 mg研磨成粉末的樣品，加入0.5 mL提取液（異丙醇、去離子水、濃鹽酸體積比為2∶1∶0.002），低溫超聲30 min，然后加入1 mL二氯甲烷，低溫超聲30 min。4 ℃、13 000×g離心5 min，吸取底層溶液在氮吹儀中濃縮。最后取0.1 mL甲醇溶解濃縮樣品，用直徑0.22 μm濾膜過濾后進(jìn)行HPLC-MS/MS檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3 次。

HPLC條件：C18柱（150 mm×2.0 mm，5 μm）；柱溫40 ℃；流動(dòng)相A（體積分?jǐn)?shù)0.1%甲酸溶液）、流動(dòng)相B（0.1%甲酸-甲醇溶液）；進(jìn)樣量為5 μL；流速為0.3 mL/min。MS條件：離子噴霧電壓-4 500 V、離子源溫度500 ℃、氣簾氣壓強(qiáng)40 psi、霧化氣壓強(qiáng)45 psi、輔助氣壓強(qiáng)30 psi。

1.3.4 類胡蘿卜素組分及含量的測(cè)定

類胡蘿卜素提取、皂化參考陳細(xì)羽等[29]的方法，用直徑0.22 μm濾膜過濾后上機(jī)。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3 次。色譜條件：YMC類胡蘿卜素C30柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；柱溫25 ℃；流動(dòng)相為甲醇-甲基叔丁基醚（體積比70∶30）；進(jìn)樣量為20 μL；流速為1 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為450 nm。

1.3.5 ABA代謝基因相對(duì)表達(dá)量的測(cè)定

參照多糖多酚植物總RNA提取試劑盒操作說(shuō)明書提取柑橘果皮總RNA，然后利用反轉(zhuǎn)錄試劑盒反轉(zhuǎn)錄成cDNA，-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

柑橘ABA代謝基因引物序列參考Zhu Feng[25]、Rodrigo[30]、Wang Lu[31]等的設(shè)計(jì)。采用SYBR染料法測(cè)定基因表達(dá)水平，參照SYBR?Premix ExTaq? I（Tli RNaseH Plus）熒光定量試劑盒的說(shuō)明操作，利用qPCR儀進(jìn)行測(cè)定。反應(yīng)體系如下：10 μL SYBR Green I mix、0.8 μL正向引物、0.8 μL反向引物、1.5 μL cDNA模板、6.9 μL ddH2O。兩步法PCR反應(yīng)程序如下：95 ℃、30 s；95 ℃、5 s，58 ℃、30 s，40 個(gè)循環(huán)。融解曲線繪制：95 ℃、10 s，降溫到65 ℃后開始以0.5 ℃每步升溫，并維持5 s采集熒光信號(hào)，反應(yīng)至95 ℃結(jié)束。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3 次。采用2-ΔΔCt法進(jìn)行相對(duì)定量分析。

1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

數(shù)據(jù)利用Microsoft Excel 2007軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，選用SPSS 20軟件執(zhí)行Duncan法進(jìn)行顯著性分析（P＜0.05）和Pearson相關(guān)性分析（P＜0.05），采用Origin 8軟件繪圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 貯藏期間柑橘果實(shí)浮皮指數(shù)和果皮水分質(zhì)量分?jǐn)?shù)的變化

如表1所示，貯藏30 d后‘克里曼丁’和‘椪柑’果實(shí)浮皮指數(shù)顯著增加，分別提高了177%和186%；果皮水分質(zhì)量分?jǐn)?shù)也顯著上升，分別提高了5.9%和14.4%。

表1 ‘克里曼丁’和‘椪柑’貯藏前后果實(shí)浮皮指數(shù)和果皮水分質(zhì)量分?jǐn)?shù)的變化Table 1 Changes in peel puffing indexes and peel water contents in‘Clementine’ and ‘Ponkan’ fruits after storage

2.2 浮皮對(duì)柑橘果實(shí)果皮ABA含量的影響

柑橘果實(shí)采后貯藏過程是一個(gè)自身消耗引起的衰老過程，受ABA調(diào)控[32]。如圖2所示，‘克里曼丁’和‘椪柑’果實(shí)正常果皮的ABA含量分別為1 659.2、464.6 ng/g，浮皮果實(shí)果皮ABA含量分別顯著下降至795.1、230.5 ng/g，為正常果皮的47.9%、49.6%。‘克里曼丁’正常與浮皮果實(shí)的果皮ABA含量均高于‘椪柑’，其中正常果皮ABA含量為‘椪柑’正常果皮的3.57 倍，浮皮果實(shí)果皮ABA含量為‘椪柑’浮皮果實(shí)果皮的3.45 倍。

圖2 ‘克里曼丁’和‘椪柑’浮皮時(shí)果皮ABA含量的變化Fig.2 Changes in abscisic acid contents in ‘Clementine’ and ‘Ponkan’fruits after peel puffing

2.3 浮皮對(duì)柑橘果實(shí)果皮類胡蘿卜素組分含量的影響

如圖3所示，‘克里曼丁’和‘椪柑’果皮中主要積累β-隱黃質(zhì)。對(duì)于‘克里曼丁’柑橘，正常果皮和浮皮果實(shí)果皮中總類胡蘿卜素含量分別為378.8、295.9 μg/g，浮皮果實(shí)果皮總類胡蘿卜素含量顯著降低，為正常果皮的78.1%；浮皮果實(shí)果皮β-胡蘿卜素、β-隱黃質(zhì)、葉黃素、辣椒紅素含量顯著降低，分別為8.7、248.8、3.8、14.5 μg/g，分別為正常果皮的85.2%、76.6%、70.1%、68.1%；浮皮果實(shí)果皮紫黃質(zhì)、新黃質(zhì)含量顯著增加，分別為9.6、5.9 μg/g，為正常果皮的127.9%、138.4%。玉米黃質(zhì)含量為4.6 μg/g，與正常果皮無(wú)顯著差異。

圖3 ‘克里曼丁’和‘椪柑’浮皮時(shí)果皮類胡蘿卜素及其組分含量的變化Fig.3 Changes in contents of total and individual carotenoids in‘Clementine’ and ‘Ponkan’ fruits after peel puffing

對(duì)于‘椪柑’，正常果皮和浮皮果實(shí)果皮中總類胡蘿卜素含量分別為809.9、859.6 μg/g，浮皮時(shí)總類胡蘿卜素含量雖有增加，但與正常果皮無(wú)顯著差異；浮皮果實(shí)果皮β-胡蘿卜素、辣椒紅素含量顯著降低，分別為22.1、42.6 μg/g，分別為正常果皮的80.8%、79.0%；浮皮果實(shí)果皮β-隱黃質(zhì)、玉米黃質(zhì)、紫黃質(zhì)、新黃質(zhì)含量顯著增加，分別為754.3、11.8、7.4、3.1 μg/g，分別為正常果皮的109.0%、118.1%、117.6%、133.2%；浮皮果實(shí)果皮葉黃素含量為18.1 μg/g，與正常果皮無(wú)顯著差異。

Pearson相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，兩個(gè)柑橘品種浮皮時(shí)果皮ABA含量與β-胡蘿卜素、辣椒紅素含量呈顯著正相關(guān)（P＜0.05），與新黃質(zhì)、紫黃質(zhì)含量呈顯著負(fù)相關(guān)（P＜0.05）。

2.4 浮皮對(duì)柑橘果實(shí)果皮ABA生物合成基因表達(dá)水平的影響

如圖4所示，在ABA生物合成途徑中共檢測(cè)了15 個(gè)基因的相對(duì)表達(dá)量。對(duì)于‘克里曼丁’柑橘，浮皮果實(shí)果皮GGPPS、LCYB1、NCED2、NCED5相對(duì)表達(dá)量顯著降低，分別為正常果皮的87.6%、92.3%、83.8%、92.8%；PSY、PDS、ZDS、LCYE、LCYB2、ZEP、CCD4、CCS相對(duì)表達(dá)量顯著增加，分別為正常果皮的103.7%、107.4%、109.2%、120.3%、118.6%、128.0%、176.7%、129.2%；CRTISO、BCH2、VDE相對(duì)表達(dá)量與正常果皮無(wú)顯著差異。

圖4 ‘克里曼丁’和‘椪柑’浮皮時(shí)果皮ABA生物合成基因表達(dá)水平的變化Fig.4 Changes in expression patterns of genes involved in ABA biosynthesis in ‘Clementine’ and ‘Ponkan’ fruits after peel puffing

對(duì)于‘椪柑’，浮皮果實(shí)果皮PSY、LCYB1、BCH2、VDE、CCD4相對(duì)表達(dá)量顯著降低，分別為正常果皮的84.4%、70.4%、70.1%、79.4%、52.7%；PDS、LCYE、LCYB2、ZEP、CCS相對(duì)表達(dá)量顯著增加，分別為正常果皮的111.3%、108.2%、134.7%、145.4%、143.5%；GGPPS、ZDS、CRTISO、NCED2、NCED5相對(duì)表達(dá)量與正常果皮無(wú)顯著差異。

Pearson相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，兩個(gè)柑橘品種浮皮時(shí)果皮ABA含量與LCYB1相對(duì)表達(dá)量呈顯著正相關(guān)（P＜0.05），與LCYE、LCYB2、ZEP、CCS相對(duì)表達(dá)量呈顯著負(fù)相關(guān)（P＜0.05）。

2.5 浮皮對(duì)柑橘果實(shí)果皮ABA分解相關(guān)基因表達(dá)水平的影響

如圖5所示，‘克里曼丁’和‘椪柑’浮皮果實(shí)果皮AB1表達(dá)水平顯著上調(diào)，分別為正常果皮的156.3%、128.3%；MYB68表達(dá)水平顯著下調(diào)，分別為正常果皮的12.4%、44.9%；ABF3表達(dá)水平與正常果皮無(wú)顯著差異。Pearson相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，兩個(gè)柑橘品種浮皮時(shí)果皮ABA含量與MYB68表達(dá)量呈顯著正相關(guān)（P＜0.05），與AB1表達(dá)量呈顯著負(fù)相關(guān)（P＜0.05）。

圖5 ‘克里曼丁’和‘椪柑’浮皮時(shí)果皮ABA分解及相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)水平的變化Fig.5 Changes in expression patterns of genes involved in ABA decomposition and related transcriptional factors in ‘Clementine’ and‘Ponkan’ fruits after peel puffing

3 討 論

寬皮柑橘采后貯藏過程中浮皮現(xiàn)象嚴(yán)重，隨著貯藏期延長(zhǎng)，浮皮癥狀加重。本研究以‘克里曼丁’和‘椪柑’為試材，發(fā)現(xiàn)貯藏過程中浮皮指數(shù)顯著增加，浮皮程度加劇，鄭小華等[33]也發(fā)現(xiàn)類似結(jié)果。寬皮柑橘果皮和果肉之間有空隙且有發(fā)達(dá)的橘絡(luò)（維管束），而緊皮柑橘白皮層和囊衣緊密貼合[32]。貯藏過程中‘克里曼丁’和‘椪柑’果皮水分質(zhì)量分?jǐn)?shù)顯著上升，可能是貯藏過程中果皮響應(yīng)外界逆境需消耗能量，果肉通過發(fā)達(dá)的維管束系統(tǒng)將大量水分運(yùn)輸至果皮，以此維持生理穩(wěn)定[32]。

目前對(duì)于浮皮發(fā)生的機(jī)理存在分歧，除了推測(cè)浮皮的發(fā)生是因?yàn)楣ぴ缢ネ鈁34]，也有推測(cè)是果肉與果皮衰老不一致及果皮相對(duì)二次生長(zhǎng)所致[15]，其他推測(cè)還包括果肉營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)向果皮轉(zhuǎn)移[32,35]。研究發(fā)現(xiàn)‘克里曼丁’和‘椪柑’浮皮時(shí)果皮ABA含量顯著降低，表明浮皮的發(fā)生可能是由果皮衰老相對(duì)延遲所致。ABA生物合成主要通過類胡蘿卜素代謝途徑[16]。經(jīng)Pearson相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，兩個(gè)柑橘品種浮皮時(shí)果皮ABA含量與β-胡蘿卜素、辣椒紅素、紫黃質(zhì)、新黃質(zhì)含量及LCYE、LCYB1、LCYB2、ZEP、CCS、MYB68、AB1表達(dá)量顯著相關(guān)。浮皮時(shí)，β-胡蘿卜素含量顯著降低，抑制了ABA合成，其中LCYB1表達(dá)量顯著降低，LCYB2表達(dá)量顯著增加，說(shuō)明浮皮時(shí)ABA合成主要受LCYB1調(diào)控。浮皮時(shí)LCYE表達(dá)量顯著增加，可能促進(jìn)了α-分支類胡蘿卜素積累，相對(duì)抑制了β-胡蘿卜素積累，從而引起ABA含量下降。前人研究發(fā)現(xiàn)沉默LCYE基因后，早實(shí)枳葉片中α-胡蘿卜素含量下降，β-胡蘿卜素含量增加[36]。浮皮時(shí)，CCS表達(dá)量增加而辣椒紅素積累減少，可能與ZEP表達(dá)量上升致使辣椒紅素環(huán)氧化生成辣椒玉紅素有關(guān)[17]。浮皮時(shí)，ZEP表達(dá)量上升也促進(jìn)了紫黃質(zhì)合成。王寧[37]發(fā)現(xiàn)過量表達(dá)ZEP的番茄葉片玉米黃質(zhì)、花藥黃質(zhì)含量降低，而紫黃質(zhì)含量增加。紫黃質(zhì)和新黃質(zhì)經(jīng)NCED酶催化生成ABA前體物質(zhì)黃質(zhì)醛，該過程是ABA生物合成的關(guān)鍵步驟[23]。浮皮時(shí)，紫黃質(zhì)、新黃質(zhì)含量顯著增加，而ABA積累顯著降低，原因可能是NCED活力低或AB1表達(dá)量顯著上升加快了ABA分解。在擬南芥和大麥吸脹種子中發(fā)現(xiàn)AB1表達(dá)量上調(diào)伴隨著ABA含量減少[38]。MYB68通過負(fù)調(diào)控BCH2和NCED5的表達(dá)，來(lái)負(fù)調(diào)節(jié)類胡蘿卜素轉(zhuǎn)化和ABA生物合成[25]。但本研究中兩個(gè)柑橘品種浮皮時(shí)MYB68表達(dá)量與ABA含量均顯著下調(diào)，與Zhu Feng等[25]的研究結(jié)果不一致，故基因MYB68的功能還需進(jìn)一步研究。

ABA積累由其生物合成和分解代謝決定[38]。綜合分析認(rèn)為，兩個(gè)柑橘品種浮皮時(shí)ABA生物合成途徑中β-胡蘿卜素含量下降及ABA分解加快共同導(dǎo)致ABA含量降低，其中LCYB1、LCYE、AB1發(fā)揮重要作用。本研究基于前期研究結(jié)果，探究寬皮柑橘浮皮發(fā)生過程中ABA積累變化機(jī)制及其代謝基因表達(dá)特征，而柑橘浮皮是個(gè)復(fù)雜的過程，還需從多品種、全基因組水平進(jìn)行系統(tǒng)分析。

4 結(jié) 論

本研究發(fā)現(xiàn)‘克里曼丁’和‘椪柑’果實(shí)在貯藏過程中浮皮指數(shù)和果皮水分質(zhì)量分?jǐn)?shù)均顯著增加，表明采后果實(shí)浮皮程度加劇，且存在水分轉(zhuǎn)移至果皮的現(xiàn)象。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，與正常果皮相比，兩個(gè)柑橘品種浮皮時(shí)果皮ABA含量顯著降低，ABA積累下調(diào)與β-胡蘿卜素合成降低及ABA分解加快有關(guān)，主要有LCYB1、LCYE、AB1協(xié)同作用。本研究揭示了柑橘果實(shí)浮皮的發(fā)生可能是由果皮衰老相對(duì)延遲所致，闡明了浮皮時(shí)ABA積累變化及其代謝基因表達(dá)特征。本研究結(jié)果有助于揭示浮皮發(fā)生的內(nèi)在機(jī)制，為柑橘采后浮皮防控技術(shù)研發(fā)提供理論依據(jù)。