張艷茹 霍云鳳 石紅利 張強(qiáng)

摘要：為發(fā)掘?qū)坦如牭毒哂休^好拮抗能力的細(xì)菌，從小麥植株殘?bào)w中分離篩選得到1株細(xì)菌菌株ZQT-9，根據(jù)形態(tài)學(xué)特征、生理生化特征以及16S rDNA序列分析相結(jié)合的方法進(jìn)行鑒定，并對其抑菌活性進(jìn)行研究。結(jié)果表明，菌株ZQT-9為多黏類芽孢桿菌（Paenibacillus polymyxa），對禾谷鐮刀菌（Fusarium graminearum）的抑菌率為（57.6±0.8）%。菌株ZQT-9無菌發(fā)酵液對禾谷鐮刀菌的孢子萌發(fā)和菌絲生長具有明顯抑制作用，并且當(dāng)無菌發(fā)酵液濃度為50%時(shí)可以完全抑制禾谷鐮刀菌孢子的萌發(fā)。PCR檢測結(jié)果表明，菌株ZQT-9可能具有編碼多黏菌素B、多黏菌素C、水解蛋白酶、β-葡聚糖及殺鐮孢菌素等5種抗菌物質(zhì)的相關(guān)基因。此外，菌株ZQT-9對鏈格孢菌（Alternaria alternata）、尖孢鐮刀菌（F. oxysporum）、凸臍蠕孢（Exserohilum turcicum）、甜櫻間座殼菌（Diaporthe eres）等4種植物病原真菌均具有明顯的抑制作用。綜上所述，多黏類芽孢桿菌ZQT-9具有潛在的生物防治應(yīng)用前景。

關(guān)鍵詞：禾谷鐮刀菌;多黏類芽孢桿菌;生物防治;抑菌活性;菌株鑒定

中圖分類號：S435.121.4+5? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號：1002-1302（2021）18-0111-05

收稿日期：2021-02-15

基金項(xiàng)目：河南科技學(xué)院自然科學(xué)基礎(chǔ)研究計(jì)劃（編號：208010617006）。

作者簡介：張艷茹（1993—），女，河北南皮人，碩士，助教，主要從事植物病害生物防治研究。E-mail：920415575@qq.com。

通信作者：張 強(qiáng)，博士，講師，主要從事禾谷鐮刀菌基因功能及生物防治研究。E-mail：zhangqiang4503@163.com。

由禾谷鐮刀菌（Fusarium graminearum）侵染引起的小麥赤霉病是我國小麥生產(chǎn)上的一種重要病害[1]。2010年以來，我國小麥赤霉病的流行頻率明顯高于20世紀(jì)[2-3]。僅河南省，小麥赤霉病年平均發(fā)生面積為126.17萬hm2，產(chǎn)量年均損失26.72萬t[4]。小麥赤霉病的發(fā)生不僅造成產(chǎn)量損失，而且病原菌還可以分泌多種真菌毒素，進(jìn)而影響人畜健康[5]。除侵染小麥穗部以外，禾谷鐮刀菌還可以導(dǎo)致小麥莖基腐病的發(fā)生[6]。目前，噴施化學(xué)藥劑仍然是防治禾谷鐮刀菌所致病害的重要措施，但隨著化學(xué)藥劑的長期使用，不僅導(dǎo)致耐藥菌株在田間普遍出現(xiàn)，而且還會促進(jìn)病原菌毒素的合成與積累[2，7-8]。

利用微生物或其代謝產(chǎn)物對植物病害進(jìn)行生物防治已成為病害綜合治理中的重要組成部分，并且對我國農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展具有重要意義[9-10]。在禾谷鐮刀菌的眾多生防菌中，芽孢桿菌的研究最為廣泛，如枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）[11]、解淀粉芽孢桿菌（B. amyloliquefacien）[12]、貝萊斯芽孢桿菌（B. velezensis）[13]、多黏類芽孢桿菌（Paenibacillus polymyxa）[14]等對禾谷鐮刀菌都具有較好的抑制能力。本研究從田間小麥植株殘?bào)w上分離到1株對禾谷鐮刀菌具有明顯拮抗作用的生防菌株ZQT-9，通過對該菌株進(jìn)行研究，以期為禾谷鐮刀菌所致病害的生物防治提供微生物資源和理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

禾谷鐮刀菌（Fusarium graminearum）PH-1菌株，由西北農(nóng)林科技大學(xué)-普渡大學(xué)聯(lián)合研究中心惠贈;鏈格孢菌（Alternaria alternata）、尖孢鐮刀菌（F. oxysporum）、凸臍蠕孢（Exserohilum turcicum）、甜櫻間座殼菌（Diaporthe eres）均為筆者所在研究室保藏菌株;多黏類芽孢桿菌（Paenibacillus polymyxa）ZQT-9菌株，分離于田間小麥植株殘?bào)w。

1.2 培養(yǎng)基

馬鈴薯葡萄糖瓊脂（PDA）培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g、葡萄糖20 g、瓊脂15 g、水1 L。

牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基：牛肉膏3 g、蛋白胨10 g、NaCl 5 g、瓊脂15 g、水1 L，pH值為7.4～7.6。

羧甲基纖維鈉（CMC）培養(yǎng)基：羧甲基纖維素鈉15.0 g、酵母提取物1.0 g、MgSO4·7H2O 0.5 g、NH4NO3 1.0 g、KH2PO4 1.0 g、水1 L。

酵母浸出粉胨葡萄糖（YEPD）培養(yǎng)基：酵母提取物3 g、葡萄糖20 g、蛋白胨10 g、水1 L。

1.3 細(xì)菌分離

于2019年6月在河南科技學(xué)院東區(qū)試驗(yàn)田采集小麥植株殘?bào)w，并于資源與環(huán)境學(xué)院植物病理學(xué)實(shí)驗(yàn)室開展后續(xù)試驗(yàn)。樣品用無菌水沖洗干凈后，置于75%乙醇中浸泡3 min，再用無菌水沖洗3遍。處理后的樣品放于研缽中研碎，然后將研磨液用 80 ℃ 水浴處理30 min，以殺死大多非芽孢細(xì)菌。取100 μL研磨液于牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基平板上涂布，28 ℃培養(yǎng)3 d。最后根據(jù)菌落特征挑取不同單菌落，劃線純化后進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。

1.4 禾谷鐮刀菌拮抗細(xì)菌的篩選

采用皿內(nèi)對峙法，將5 mm直徑大小的禾谷鐮刀菌菌餅接于PDA培養(yǎng)基平板中央，挑取待測細(xì)菌接種4點(diǎn)（距中心25 mm處），25 ℃條件下培養(yǎng)3 d后計(jì)算抑菌率。以不接禾谷鐮刀菌菌餅，只接待測細(xì)菌的處理為對照。抑菌率=（對照組菌落直徑-試驗(yàn)組菌落直徑）/對照菌落直徑×100%。

1.5 菌株ZQT-9分類鑒定

1.5.1 形態(tài)及生理生化鑒定

具體方法參照《常見細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊》進(jìn)行[15]。

1.5.2 16S rDNA PCR擴(kuò)增及系統(tǒng)發(fā)育分析

以基因組DNA為模板，利用通用引物27F（5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′）和1492R（5′-GGTTACCTTGTTACGACTT-3′）對菌株ZQT-9的16S rDNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增。擴(kuò)增產(chǎn)物送至生工生物工程（上海）股份有限公司進(jìn)行純化測序。根據(jù)測序結(jié)果，在GenBank數(shù)據(jù)庫下載相關(guān)菌株的16S rDNA序列，用ClustalX 1.83軟件比對后，利用Mega 7.0軟件采用鄰接法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。

1.6 菌株ZQT-9無菌發(fā)酵液的獲得

挑取菌株ZQT-9單菌落于10 mL牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基中，180 r/min、28 ℃條件下培養(yǎng)24 h，之后按照10%接種量2次搖培3 d，獲得菌株 ZQT-9 發(fā)酵液。將發(fā)酵液置于12 000 r/min條件下離心15 min，再將上清液用0.22 μm微孔濾膜過濾，從而獲得無菌發(fā)酵液。

1.7 菌株ZQT-9無菌發(fā)酵液對禾谷鐮刀菌的抑制作用

1.7.1 對孢子萌發(fā)的影響

挑取禾谷鐮刀菌1 cm×1 cm大小菌塊于CMC培養(yǎng)基中，150 r/min、25? ℃條件下?lián)u培5 d。培養(yǎng)液用濾布進(jìn)行過濾，3 500 r/min離心10 min后收集孢子，然后用YEPD培養(yǎng)基重懸浮，并調(diào)整孢子濃度為1×106個(gè)/mL。按照10%、20%、50%的終濃度加入菌株ZQT-9無菌發(fā)酵液，搖培12 h后利用顯微鏡觀察禾谷鐮刀菌孢子的萌發(fā)情況。以不加菌株ZQT-9無菌發(fā)酵液為對照。

1.7.2 對菌絲生長的影響

在9 mL YEPD培養(yǎng)基中加入1 mL禾谷鐮刀菌孢子懸浮液，150 r/min、25 ℃ 條件下?lián)u培12 h，以獲得菌絲體。之后按照10%、20%、50%的終濃度加入菌株ZQT-9無菌發(fā)酵液，搖培24 h后對禾谷鐮刀菌的菌絲形態(tài)進(jìn)行顯微觀察。以不加菌株ZQT-9無菌發(fā)酵液為對照。

1.8 菌株ZQT-9抗菌物質(zhì)的PCR檢測

菌株ZQT-9抗菌物質(zhì)的類別利用已報(bào)道的抗菌物質(zhì)合成相關(guān)基因的PCR擴(kuò)增進(jìn)行檢測，引物序列見表1。

1.9 菌株ZQT-9對不同植物病原真菌的拮抗作用

將直徑為5 mm的不同病原真菌菌餅置于PDA培養(yǎng)基平板中央，挑取菌株ZQT-9接種4點(diǎn)（距中心 25 mm 處），25 ℃條件下培養(yǎng)5 d后測量抑菌帶寬度。抑菌帶寬度為細(xì)菌菌落與平板中心方向，細(xì)菌菌落邊緣至真菌菌落邊緣的距離。

2 結(jié)果與分析

2.1 菌株ZQT-9對禾谷鐮刀菌的拮抗效果

將菌株ZQT-9與禾谷鐮刀菌PH-1菌株進(jìn)行皿內(nèi)對峙培養(yǎng)，結(jié)果表明，菌株ZQT-9對禾谷鐮刀菌的菌落生長具有較強(qiáng)的抑制作用，抑菌率為（57.6±0.8）%（圖1）。

2.2 菌株ZQT-9的分類鑒定

2.2.1 形態(tài)特征及生理生化特征

菌株ZQT-9在PDA培養(yǎng)基上的菌落呈乳白色，凸起，表面光滑，邊緣規(guī)則，具有黏性，菌體桿狀，革蘭氏染色陽性。生理生化特征鑒定結(jié)果表明，菌株ZQT-9能夠利用葡萄糖、蔗糖、甘油、甘露醇，不能利用半乳糖，可以水解淀粉和明膠，硝酸鹽還原和V-P試驗(yàn)呈陽性，不產(chǎn)生硫化氫（表2）。

2.2.2 16S rDNA 序列分析及系統(tǒng)進(jìn)化樹的構(gòu)建

以基因組DNA為模板，對菌株ZQT-9的16S rDNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，測序后獲得1 500 bp左右的序列。經(jīng)GenBank數(shù)據(jù)庫比對后發(fā)現(xiàn)，菌株ZQT-9與多黏類芽孢桿菌（P. polymyxa）多個(gè)菌株的16S rDNA序列同源性達(dá)99%以上。采用鄰接法構(gòu)建16S rDNA序列系統(tǒng)發(fā)育樹，結(jié)果表明，菌株ZQT-9與P. polymyxa VNRM51、VNRM47、PY7及1178聚類在一起，形成1個(gè)分支（圖2）。結(jié)合形態(tài)和生理生化特征，將菌株ZQT-9鑒定為多黏類芽孢桿菌。

2.3 菌株ZQT-9無菌發(fā)酵液對禾谷鐮刀菌孢子萌發(fā)和菌絲生長的抑菌作用

在YEPD中培養(yǎng)12 h后，對照組中的禾谷鐮刀菌孢子能夠正常萌發(fā)，并形成粗細(xì)均勻的菌絲。當(dāng)溶液中分別含有10%、20%濃度的菌株ZQT-9無菌發(fā)酵液時(shí)，禾谷鐮刀菌的孢子可以正常萌發(fā)，但是部分芽管生長出現(xiàn)畸形，頂端囊泡化。當(dāng)菌株ZQT-9無菌發(fā)酵液濃度達(dá)到50%時(shí)，孢子結(jié)構(gòu)出現(xiàn)明顯變化，局部膨大變形，并且喪失萌發(fā)能力（圖3）。分別用10%、20%、50%終濃度的菌株ZQT-9無菌發(fā)酵液處理禾谷鐮刀菌的菌絲24 h后，不同濃度下禾谷鐮刀菌的菌絲生長都出現(xiàn)畸形，頂端囊泡化。而對照組的菌絲能夠正常生長（圖4）。結(jié)果表明，菌株ZQT-9不同濃度的無菌發(fā)酵液都可以影響禾谷鐮刀菌的孢子萌發(fā)及菌絲生長，并且高濃度的無菌發(fā)酵液還能夠完全抑制孢子的萌發(fā)。

2.4 菌株ZQT-9拮抗物質(zhì)基因的鑒定

利用5對拮抗物質(zhì)基因的引物對菌株ZQT-9的基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，電泳結(jié)果顯示，5種基因都被成功擴(kuò)增（圖5）。由此推測，菌株ZQT-9基因組中可能存在水解蛋白酶、β-葡聚糖、多黏菌素B、 多黏菌素C及殺鐮孢菌素代謝合成操縱子序列，并產(chǎn)生相應(yīng)的抗菌物質(zhì)。

2.5 菌株ZQT-9對不同植物病原真菌的抑制效果

皿內(nèi)對峙結(jié)果表明，菌株ZQT-9對4種植物病原真菌都具有明顯的抑制作用，其中對鏈格孢菌的抑制作用最強(qiáng)，抑菌帶寬度為7.6 mm左右。對尖孢鐮刀菌、凸臍蠕孢及甜櫻間座殼菌的抑菌帶寬度均在 4～5 mm之間（表3）。表明菌株ZQT-9具有一定的抑菌譜。

3 結(jié)論與討論

由于缺乏優(yōu)質(zhì)抗病品種、揚(yáng)花期天氣高溫高濕、秸稈還田及病原菌抗藥性的普遍出現(xiàn)，導(dǎo)致近年來我國小麥赤霉病的發(fā)生危害日益嚴(yán)重，從而給小麥安全生產(chǎn)帶來巨大威脅[3]。另外，小麥莖基腐病的發(fā)生也逐漸出現(xiàn)加重的趨勢[16]。利用有益微生物對禾谷鐮刀菌所致病害進(jìn)行防治，不僅能夠有效減少化學(xué)農(nóng)藥的使用，而且符合綠色農(nóng)業(yè)的發(fā)展要求。本研究從小麥植株殘?bào)w上分離得到1株對禾谷鐮刀菌具有明顯抑制作用的拮抗菌株ZQT-9，綜合培養(yǎng)特征、生理生化特性及系統(tǒng)進(jìn)化分析，將其鑒定為多黏類芽孢桿菌。該菌株的不同濃度無菌發(fā)酵液都能夠影響禾谷鐮刀菌的孢子萌發(fā)過程，并且該菌株高濃度的無菌發(fā)酵液可以完全抑制禾谷鐮刀菌的孢子萌發(fā)。另外，該菌株無菌發(fā)酵液對禾谷鐮刀菌的菌絲生長也具有明顯的抑制作用，可以導(dǎo)致菌絲出現(xiàn)畸形。此外，菌株ZQT-9對尖孢鐮刀菌等4種植物病原真菌均有較好的抑制效果，說明該菌株具有防治多種病害的潛力。

多黏類芽孢桿菌在自然界分布廣泛，不僅可以能夠固氮，而且可以產(chǎn)生多種抗菌物質(zhì)和植物生長素，從而對植物具有很好的防病促生作用[17-19]。研究表明，多黏類芽孢桿菌對大豆疫霉病菌[20]、油菜菌核病病菌[21]、辣椒炭疽病菌[22]、蘋果樹腐爛病菌[23]、海棠銹病[24]及南方根結(jié)線蟲[25]等多種病原物都具有拮抗能力。李峰等發(fā)現(xiàn)，多黏類芽孢桿菌HB022無菌發(fā)酵液可以使禾谷鐮刀菌的菌絲出現(xiàn)畸形、斷裂等現(xiàn)象;另外，無菌發(fā)酵液濃度越高，對禾谷鐮刀菌孢子萌發(fā)的抑制能力越強(qiáng)，當(dāng)濃度為20%時(shí)就可以完全抑制孢子的萌發(fā)[26]。本研究結(jié)果表明，多黏類芽孢桿菌ZQT-9無菌發(fā)酵液也能夠使禾谷鐮刀菌的菌絲出畸形，但是只有當(dāng)ZQT-9無菌發(fā)酵液終濃度為50%時(shí)才能夠完全抑制禾谷鐮刀菌孢子的萌發(fā)能力。推測造成這一試驗(yàn)結(jié)果不同的原因，可能與菌株來源或培養(yǎng)條件不同，從而產(chǎn)生的抑菌物質(zhì)不同有關(guān)。

多黏類芽孢桿菌能夠產(chǎn)生植物激素、胞外多糖等多種活性物質(zhì)，如菌株A26的胞外多糖，尤其是糖醛酸鹽的含量在對禾谷鐮刀菌的拮抗中起到重要作用[27]。多黏類芽孢桿菌合成脂肽類抗生素是發(fā)揮其生防功能的重要原因之一[28]。本研究利用PCR檢測發(fā)現(xiàn)，菌株ZQT-9具有水解蛋白酶、β-葡聚糖、多黏菌素B、多黏菌素C及殺鐮孢菌素代謝合成相關(guān)基因，由此推測該菌株可能產(chǎn)生上述幾種抗菌物質(zhì)。

參考文獻(xiàn)：

[1]程順和，張 勇，別同德，等. 中國小麥赤霉病的危害及抗性遺傳改良[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2012，28（5）：938-942.

[2]陳 云，王建強(qiáng)，楊榮明，等. 小麥赤霉病發(fā)生危害形勢及防控對策[J]. 植物保護(hù)，2017，43（5）：11-17.

[3]黃 沖，姜玉英，吳佳文，等. 2018年我國小麥赤霉病重發(fā)特點(diǎn)及原因分析[J]. 植物保護(hù)，2019，45（2）：160-163.

[4]于思勤，馬忠華，張 猛，等. 河南省小麥赤霉病發(fā)生規(guī)律與綜合防治關(guān)鍵技術(shù)[J]. 中國植保導(dǎo)刊，2019，39（2）：53-60.

[5]Audenaert K，Vanheule A，Hfte M，et al. Deoxynivalenol：a major player in the multifaceted response of Fusarium to its environment[J]. Toxins，2013，6（1）：1-19.

[6]張向向，孫海燕，李 偉，等. 我國冬小麥主產(chǎn)省小麥莖基腐鐮孢菌的組成及其致病力[J]. 麥類作物學(xué)報(bào)，2014，34（2）：272-278.

[7]黃婷婷. 多菌靈、氰烯菌酯對禾谷鐮孢菌DON毒素合成的影響[D]. 南京：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)，2012：27-59.

[8]張 升，張 偉，王 麗，等. 氨基酸態(tài)氮對禾谷鐮刀菌生長及DON毒素產(chǎn)生的影響[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2020，36（6）：1403-1410.

[9]邱德文. 我國植物病害生物防治的現(xiàn)狀及發(fā)展策略[J]. 植物保護(hù)，2010，36（4）：15-18，35.

[10]Chen Y，Wang J，Yang N，et al. Wheat microbiome bacteria can reduce virulence of a plant pathogenic fungus by altering histone acetylation[J]. Nature Communications，2018，9（1）：3429.

[11]鄭小亮，董 超，牛瑞艷，等. 枯草芽孢桿菌Zl-2抗菌蛋白特性及對小麥赤霉病菌的抑制作用[J]. 黑龍江大學(xué)自然科學(xué)學(xué)報(bào)，2018，35（2）：206-211.

[12]曹 坤，管 明，陳 康，等. 一株拮抗禾谷鐮刀菌和降解嘔吐毒素解淀粉芽孢桿菌的篩選及在飼料貯存中的應(yīng)用[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2019，47（8）：179-183，190.

[13]Palazzini J，Roncallo P，Cantoro R，et al. Biocontrol of Fusarium graminearum sensu stricto，reduction of deoxynivalenol accumulation and phytohormone induction by two selected antagonists[J]. Toxins，2018，10（2）：88.

[14]何 露. 小麥赤霉病菌拮抗細(xì)菌的篩選及拮抗機(jī)理初探[D]. 雅安：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)，2019：9-44.

[15]東秀珠，蔡妙英. 常見細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊[M]. 北京：科學(xué)出版社，2001.

[16]周海峰，楊 云，牛亞娟，等. 小麥莖基腐病的發(fā)生動態(tài)與防治技術(shù)[J]. 河南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014，43（5）：114-117.

[17]Grady E N，Macdonald J，Liu L，et al. Current knowledge and perspectives of Paenibacillus：a review[J]. Microbial Cell Factories，2016，15（1）：203.

[18]Hao T Y，Chen S F. Colonization of wheat，maize and cucumber by Paenibacillus polymyxa WLY78[J]. PLoS One，2017，12（1）：e0169980.

[19]汪城墻，戴 莉，劉 凱，等. 多黏類芽孢桿菌脂肽類抗生素合成與分泌機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 山東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2018，50（9）：157-163.

[20]王 波，周澗楠，黃忠勤，等. 多黏類芽孢桿菌XZ-2的生物學(xué)特性及其對3種大豆病原菌的拮抗作用研究[J]. 西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2018，31（6）：1197-1202.

[21]祝久香，黎繼烈，申愛榮，等. 油菜菌核病病菌拮抗菌的篩選及其生防效果[J]. 中國植保導(dǎo)刊，2019，39（9）：11-20.

[22]申順善，張 濤，王 娟，等. 多黏類芽孢桿菌HK18-8對辣椒炭疽病菌的抑制作用及其定殖能力[J]. 園藝學(xué)報(bào)，2019，46（3）：499-507.

[23]李恩琛，張樹武，徐秉良，等. 3株生防細(xì)菌間親和性測定及其對蘋果樹腐爛病菌的抑制作用[J]. 甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2020，55（5）：94-100.

[24]杜 賓，閆 釗. 生防菌株KC24鑒定及發(fā)酵液防治海棠銹病效果[J]. 北方園藝，2020（11）：19-24.

[25]楊景艷，程萬里，曾 立，等. 抗植物病原線蟲的多黏類芽胞桿菌KM2501-1發(fā)酵培養(yǎng)基和發(fā)酵條件優(yōu)化[J]. 化學(xué)與生物工程，2018，35（6）：57-63.

[26]李 峰，徐大勇，王光利，等. 一株拮抗赤霉病的小麥內(nèi)生細(xì)菌的篩選和抑菌活性[J]. 生態(tài)學(xué)雜志，2011，30（8）：1738-1743.

[27]Timmusk S，Copolovici D，Copolovici L，et al. Paenibacillus polymyxa biofilm polysaccharides antagonise Fusarium graminearum[J]. Scientific Reports，2019，9（1）：662.

[28]Raza W，Shen Y R. Paenibacillus polymyxa：antibiotics，hydrolytic enzymes and hazard assessment[J]. Journal of Plant Pathology，2008，90（3）：419-430.