高效液相法測定注射用鹽酸吉西他濱中游離硫的含量

鄭雙雙，劉貞，鐘振華，夏紅英，程奇珍

江西省藥品檢驗檢測研究院，國家藥品監(jiān)督管理局中成藥質量評價重點實驗室，江西省藥品與醫(yī)療器械質量工程技術研究中心，江西 南昌 330029

吉西他濱是嘧啶類抗代謝藥物，是細胞周期特異性抗代謝藥物［1］，與其他藥物聯(lián)合應用治療非小細胞肺癌（NSCLC）、上皮性卵巢癌宮頸癌、晚期胰腺癌、乳腺癌等［2-5］。注射用吉西他濱為注射用粉針劑，在分裝、貯存過程中，藥用鹵化丁基膠塞用于制劑密封，直接長時間與藥品接觸［6］，而在膠塞生產(chǎn)過程中，需要加入多種添加劑，以此來延長藥用膠塞的使用時間，其中還需要進行硫化處理，在該過程中不可避免的殘留一些未降解的有害物質如游離硫［7］，根據(jù)國家食品藥品監(jiān)督管理局發(fā)布的《化學藥品注射劑與塑料包裝材料相容性研究技術指導原則（試行）》［8］，指出包裝系統(tǒng)應與藥品具有良好的相容性，引入的浸出物產(chǎn)生的風險應在控制安全范圍內，本研究參考文獻［9-11］，采用高效液相色譜法測定藥品中游離硫的含量，經(jīng)方法學驗證該方法方便、準確，可用于注射用鹽酸吉西他濱中游離硫的測定。

1 儀器與試劑

1.1 儀器

Waters Alliance 2695 型高效液相色譜儀，METTLER TOLEDO MS105 型電子天平，METTLER TOLEDO ML204 型電子天平，Hpp749 恒溫恒濕試驗箱、SYNERGY UV 超純水機。

1.2 試劑、試藥

硫（批號：20190610，CAS 號：7704-34-9，生產(chǎn)廠家：國藥集團化學試劑有限公司，含量≥99.999%）。無水乙醇［批號：Lot.No.20161012，CAS 號：64-17-5，生產(chǎn)廠家：永華化學科技（江蘇）有限公司，色譜純］。甲醇（批號：Lot#WXBC8664V，CAS 號：67-56-1，生產(chǎn)廠家：SIGMA，色譜純）。

2 試驗方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Inertsil ODS-3 C18（250 mm×4.6 mm×5 μm）；柱溫：35 ℃；流動相：甲醇-水（95∶5）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：264 nm；進樣量：20 μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品貯備液 精密稱取硫25.58 mg，置100 mL 容量瓶中，加無水乙醇適量超聲使硫溶解，用無水乙醇定容至刻度，搖勻，即得濃度為0.255 8 mg/mL對照品貯備液。

2.2.2 供試品溶液 取樣品2 瓶（規(guī)格0.2 g）、1 瓶（規(guī)格1.0 g）分別加水3 mL（規(guī)格0.2 g）、15 mL（規(guī)格1.0 g）使內容物溶解并轉移至同一10 mL（規(guī)格0.2 g）、25 mL（規(guī)格1.0 g）量瓶中，用無水乙醇定容至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 空白溶液 量取3 mL 水置10 mL 量瓶中，用無水乙醇定容至刻度，搖勻，即得。

2.3 線性關系試驗

精密量取上述“2.2.1”項下對照品貯備液1 mL 分別置10、20、50 mL 量瓶中，用無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為⑦25.580 0 μg/mL、⑥12.790 0 μg/mL、⑤5.116 0 μg/mL 的對照品溶液，精密量取對照品溶液⑦1 mL 置10 mL 量瓶中，用無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為④2.558 0 μg/mL 的對照品溶液，精密量取對照品溶液⑥1 mL分別置10、20 mL 量瓶中，用無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為③1.279 0 μg/mL、②0.639 5 μg/mL 的對照品溶液，精密量取對照品溶液④1 mL置10 mL 量瓶中，用無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為①0.255 8 μg/mL 的對照品溶液。精密量取上述系列線性關系對照品溶液各20 μL，按照“2.1”項下色譜條件測定，記錄峰面積。以硫濃度（x，μg/ mL）為橫坐標、峰面積（y）為縱坐標進行線性回歸，結果詳見圖1。

圖1 硫線性關系圖

2.4 精密度試驗

精密量取“2.3”項下對照品溶液⑤5.116 0 μg/mL 20 μL，連續(xù)進樣6 次，記錄測定結果。結果：硫的峰面積的RSD 為1.0%（n=6），表明儀器精密度較好。

2.5 回收率試驗

取陰性樣品（A 公司生產(chǎn)，批號：190119）兩瓶，分別加水3 mL 溶解后，轉移至10 mL 量瓶中，精密量取“2.2.1”對照品貯備液0.1、0.2、0.3 mL 置上述量瓶中，用無水乙醇定容至刻度，搖勻，濾過，按照“2.1”項下色譜條件測定，記錄峰面積，按線性項下的回歸方程計算，結果見表1。

表1 回收率試驗

2.6 穩(wěn)定性試驗

取注射用吉西他濱供試品1 批（A 公司生產(chǎn)，批號：190119）2 瓶，分別加水3 mL 溶解后，轉移至10 mL 量瓶中，精密量取“2.2.1”對照品貯備液0.2 mL 置上述量瓶中，用無水乙醇定容至刻度，搖勻，濾過，于0、2、4、6、8、12、16、20、24 h 按“2.1”項下色譜條件測定，記錄峰面積。結果：硫的峰面積24 h 內基本不變，RSD%為1.2%，滿足測定要求。

2.7 重復性試驗

取注射用吉西他濱供試品1 批（A 公司生產(chǎn)，批號：190119）2 瓶，分別加水3 mL 溶解后，轉移至10 mL 量瓶中，精密量取對照品貯備液Sa（精密稱取硫12.99 mg，置50 mL 容量瓶中，加無水乙醇適量超聲使硫溶解，用無水乙醇定容至刻度，搖勻，即得）0.2 mL 置上述量瓶中，用無水乙醇定容至刻度，搖勻，濾過；按上述方法平行制備6 份供試品溶液，按照“2.1”項下色譜條件測定，記錄峰面積，按標準曲線法計算硫的含量，結果測得硫平均含量為52.59 μg，RSD 為1.0%，表明重復性良好。

2.8 定量限與檢測限

分別精密量取對照品儲備液Sa 適量，用無水乙醇稀釋數(shù)倍，按照“2.1”項下色譜條件測定，記錄峰面積，按信噪比為10∶1、3∶1 計算定量限、檢測限。結果定量限為0.519 6 μg/瓶、檢測限為0.259 8 μg/瓶。

3 樣品測定結果與討論

采用新建方法對8 家企業(yè)58 批次市售注射用吉西他濱進行測定，結果均未檢出硫；采用新建方法對12 批次注射用吉西他濱0 月、3 月加速正置、倒置進行硫的測定，結果均未檢出硫。由于0 月、3 月加速樣品中均未檢出硫，考慮硫從藥品包材遷移的可能性不大，藥品被污染的可能性較小，本品使用時硫所引發(fā)安全風險較低。

本方法采用高效液相色譜法測定游離硫的含量，該方法快速簡單、準確、重復性好，適用于注射用鹽酸吉西他濱中硫的含量分析。