52.5%抑快凈水分散劑在番茄中的殘留檢測及消解動(dòng)態(tài)研究

王晨晨，王文博，陳子雷，張艷，李慧冬，毛江勝

（山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測技術(shù)研究所/山東省食品質(zhì)量與安全檢測技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/農(nóng)業(yè)農(nóng)村部食品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測試中心（濟(jì)南），山東 濟(jì)南250100）

抑快凈（equation-pro）由美國杜邦公司開發(fā)生產(chǎn)，由霜脲氰（cymoxanil）和惡唑菌酮（famoxadone）混配而成，兼具內(nèi)吸治療和保護(hù)雙重作用，是目前防治黃瓜、番茄等作物霜霉病、疫病的新型高效復(fù)合殺菌劑。惡唑菌酮能發(fā)揮持久的保護(hù)功能，在病菌發(fā)生初始階段特別有效；它與極具內(nèi)吸性和治療性的殺菌劑霜脲氰混合，兩者作用相互補(bǔ)充，大大增強(qiáng)了保護(hù)和治療作用。

抑快凈在番茄、黃瓜、葡萄等水果、蔬菜上具有廣泛應(yīng)用［1-4］。已有惡唑菌酮在柑橘、蘋果中殘留動(dòng)態(tài)研究以及在惡唑菌酮液相中的光化學(xué)降解［5-9］等研究，但是抑快凈作為一種復(fù)配藥劑，霜脲氰和惡唑菌酮共同作用下的殘留動(dòng)態(tài)研究較少。因此，本試驗(yàn)進(jìn)行了52.5%抑快凈水分散粒劑在番茄中的殘留分析及消解動(dòng)態(tài)研究。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

高壓液相色譜儀：Waters公司，Alliance2695泵，二極管陣列檢測（PDA）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器：德國Heidolph laborota 4000；離心機(jī)：北京醫(yī)用離心機(jī)LD5-2A。

試劑：52.5%抑快凈WG，杜邦（中國）有限責(zé)任公司；磷酸（優(yōu)級純）、磷酸二氫鉀（優(yōu)級純）、無水硫酸鈉（分析純），國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；甲醇（色譜純），德國默克公司；乙腈（色譜純），美國天地試劑公司；重蒸水；二氯甲烷（分析純），北京化工集團(tuán)有限公司。

1.2 消解動(dòng)態(tài)及最終殘留試驗(yàn)方法

參照《農(nóng)藥殘留試驗(yàn)準(zhǔn)則》［10］和《農(nóng)藥登記殘留田間試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》［11］，于2018年分別在淄博市臨淄區(qū)、濱州市無棣縣、東營市河口區(qū)三地進(jìn)行了52.5%抑快凈水分散粒劑（22.5%惡唑菌酮+30%霜脲氰）在番茄上的殘留田間試驗(yàn)。小區(qū)面積20 m2，重復(fù)3次，隨機(jī)排列，設(shè)清水空白對照。

消解動(dòng)態(tài)試驗(yàn)666.7m2施藥量為60 g，對水50 kg，采用背負(fù)式噴霧器均勻噴灑葉面。分別于施藥后1 h及1、3、5、7、10 d隨機(jī)多點(diǎn)取樣，每小區(qū)取1～2 kg番茄，對照取3～5 kg。將番茄可食部分用組織攪碎機(jī)攪碎，充分混勻，四分法保留500 g裝瓶，于-20℃冰柜中保存?zhèn)溆谩?/p>

最終殘留試驗(yàn)666.7m2施藥量分別為40 g、60 g，施藥3次，間隔7 d。分別于最后一次施藥后1、2、3、5、7 d采樣，測定藥劑的最終殘留量。

1.3 檢測方法及儀器條件

1.3.1 霜脲氰的檢測分析 稱取樣品15.0 g于80 mL離心管，加入30 mL二氯甲烷勻漿破碎，然后10 000 r/min離心5 min，取上清液于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶中，殘?jiān)偌尤攵燃淄?0 mL，重復(fù)提取，合并兩次上清液，于40℃水浴中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)二氯甲烷至干，加2 mL甲醇溶解，10 000 r/min離心，待HPLC分析。

色譜條件：symmetry C18色譜柱（4.0 mm×250 mm，4μm）；柱溫：40℃；流動(dòng)相：0.005 mol/L KH2PO4-乙腈（75∶25，V∶V，pH=2.65）；流速：1.0 mL/min；等度洗脫；進(jìn)樣體積：10μL；檢測波長：254 nm；保留時(shí)間：13.8 min。

1.3.2 惡唑菌酮的檢測分析 稱取樣品20 g于離心管，加入甲醇35 mL，超聲提取15 min，離心20 min，傾出上清液于圓底燒瓶中；殘?jiān)偌尤爰状?5 mL重復(fù)提取，合并兩次濾液，于40℃水浴中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)甲醇，濃縮液待凈化。

分別用5 mL甲醇、5 mL甲醇-磷酸緩沖液（30∶70，V∶V，pH=3）預(yù)淋洗C18固相萃取小柱，將番茄樣品濃縮液及3 mL甲醇-磷酸緩沖液（30∶70，V∶V，pH=3）沖洗圓底燒瓶的溶液移入小柱中，再用2 mL甲醇-磷酸緩沖液（50∶50，V∶V，pH=3）淋洗小柱，棄去淋出液。最后加入4 mL甲醇-磷酸緩沖液（85∶15，V∶V，pH=3），收集淋出液。

色譜條件：Novapak苯基柱（3.9 mm×150 mm，4μm）；柱溫：40℃；流動(dòng)相：0.01 mol/L磷酸二氫鉀（pH=3）-乙腈（50∶50，V∶V）；流速：1.0 mL/min；等度洗脫；進(jìn)樣體積：10μL；檢測波長：228 nm；保留時(shí)間：8.5 min。

1.4 計(jì)量方法

在被測物的線性范圍內(nèi)，用外標(biāo)法定量。

2 結(jié)果與分析

2.1 線性關(guān)系及方法的檢出限、準(zhǔn)確度和精密度

圖1、圖2顯示，霜脲氰的保留時(shí)間為13.5 min，惡唑菌酮的保留時(shí)間為8.5 min，峰形對稱，出峰良好。

精確稱取霜脲氰和惡唑菌酮標(biāo)準(zhǔn)品（精確至0.1 mg），分別以乙腈溶解定容至10 mL，配成1 000μg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲備液待用。進(jìn)樣時(shí)分別用相應(yīng)的流動(dòng)相將霜脲氰和惡唑菌酮1 000μg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲備液稀釋，以配制的標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線（圖1、圖2）。霜脲氰的回歸方程為：Y=14299.46X+1871.79，r=0.9998，在5～100μg/mL范圍內(nèi)溶液濃度與峰面積線性關(guān)系良好。惡唑菌酮的回歸方程為Y=1.15×104X+5.15×103，r=0.9997。霜脲氰在番茄中的最低檢出濃度為0.01 mg/kg，最小檢出量為2 ng。在空白番茄中加入0.01、0.05、1.0 mg/kg霜脲氰標(biāo)樣，回收率在79.5%～92.8%之間，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.68%～7.36%（圖3）。惡唑菌酮在番茄最低檢出濃度為0.02 mg/kg，最小檢出量為2 ng。在空白番茄中添加惡唑菌酮0.01、0.05、2.0 mg/kg標(biāo)樣，測得的回收率在82.4%～103.9%之間，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.96%～6.25%（圖4）。

圖1 霜脲氰液相色譜圖（左）及標(biāo)準(zhǔn)曲線（右）

圖2 惡唑菌酮液相色譜圖（左）及標(biāo)準(zhǔn)曲線（右）

圖3 霜脲氰番茄空白樣品（左）及添加回收圖譜（右）

圖4 惡唑菌酮番茄空白樣品（左）及添加回收圖譜（右）

2.2 抑快凈在番茄中的消解動(dòng)態(tài)

由表1可見，霜脲氰和惡唑菌酮在番茄中的消解均符合一級動(dòng)力學(xué)特征。在淄博市、濱州市、東營市三地的降解試驗(yàn)中，霜脲氰在番茄中的半衰期分別為1.0、1.8、4.0 d，惡唑菌酮在番茄中的半衰期分別為1.4、2.0、1.4 d。表明在施抑快凈2～4 d后，霜脲氰和惡唑菌酮在番茄中的消解率已近50%，并且惡唑菌酮的降解速率快于霜脲氰。

表1 抑快凈在番茄中的消解動(dòng)力學(xué)參數(shù)

2.3 抑快凈在番茄中的最終殘留

52.5 %抑快凈水分散粒劑666.7m2施藥量為40 g時(shí)，霜脲氰在施藥后3～5 d濃度范圍為0.13～0.17 mg/kg，藥后7 d未檢出；惡唑菌酮在施藥后3～5 d濃度范圍為0.05～0.1 mg/kg，藥后7 d未檢出。施藥量為60 g時(shí)，霜脲氰在施藥后3～5 d濃度范圍為0.17～0.28 mg/kg，藥后7 d未檢出；惡唑菌酮在施藥后3～5 d濃度范圍為0.11～0.14 mg/kg，藥后7 d未檢出。我國規(guī)定霜脲氰、惡唑菌酮在番茄中最高殘留量分別為1、2 mg/kg［12］，本試驗(yàn)收獲期番茄中霜脲氰、惡唑菌酮均低于最高殘留限量。

3 結(jié)論

本研究建立了番茄中抑快凈的高效液相色譜檢測方法，該方法靈敏度高、線性關(guān)系良好，檢出限、回收率、準(zhǔn)確度等各項(xiàng)技術(shù)指標(biāo)均符合農(nóng)藥殘留檢測的基本要求，可用于抑快凈的殘留檢測分析。抑快凈中的兩種有效成分霜脲氰和惡唑菌酮在番茄中的消解均符合一級動(dòng)力學(xué)特征，并且惡唑菌酮的降解速率快于霜脲氰，兩者在番茄中的最終殘留均符合要求。建議52.5%抑快凈WG在番茄上666.7m2施藥量為45 g，施藥3次，間隔7 d，最后一次施藥距采收期14 d。