天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶的臨床應(yīng)用與比對(duì)研究

王亞男

（中國(guó)人民大學(xué)統(tǒng)計(jì)學(xué)院，北京 100000）

天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶，存在于人體各種組織中，其中以心肌中含量最豐富，其次是在肝臟、骨骼肌和腎臟等組織中。在肝臟內(nèi)，70%到80%存在于肝細(xì)胞線粒體中，20%到30%存在于肝細(xì)胞質(zhì)中，天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶絕對(duì)值超過(guò)谷氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶。天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶以其在細(xì)胞內(nèi)分布的部位不同分為兩種同工酶，即細(xì)胞質(zhì)型天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶和線粒體型天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶。由于線粒體型天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶定位于線粒體內(nèi)，不易釋放進(jìn)入血液中。正常情況下，天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶在血清中的含量很低，但如果有相關(guān)組織器官發(fā)生損傷時(shí)，天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶在血清中的含量會(huì)發(fā)生變化。天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶的測(cè)定有助于了解心肌、肝、腎組織的損傷程度。天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶的增高常見(jiàn)于急、慢性重癥肝炎、肝硬變、心肌炎、心肌梗塞、腎炎、膽管炎、皮肌炎、胰腺炎等病癥。由于心肌含天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶量最高，其次是肝臟，所以心和肝細(xì)胞損傷后血中酶活性能迅速升高。但僅僅測(cè)定總天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶活性不能完全反映心與肝損傷程度和判定預(yù)后。測(cè)定血清線粒體型天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶可間接了解肝細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)損傷及線粒體損害的嚴(yán)重程度。線粒體型天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶不僅能作為心、肝細(xì)胞壞死的指標(biāo)，也能作為對(duì)心與肝臟疾病動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)的指標(biāo)。因此天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶含量的檢測(cè)在臨床診斷中具有非常重要的意義。

鑒于天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶含量檢測(cè)在臨床診斷中的重要意義。體外診斷試劑的領(lǐng)域中，已有多家企業(yè)的產(chǎn)品獲得國(guó)家藥品監(jiān)督管理局上市批件并進(jìn)行銷(xiāo)售。如：天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶測(cè)定試劑盒（速率法）、天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶測(cè)定試劑盒（IFCC速率法）AST (IFCC Method)、天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶檢測(cè)試劑盒（比色法）Aspartate Aminotransferase (ASTL)、天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶測(cè)定試劑盒（煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)法）、天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶測(cè)定試劑盒(天門(mén)冬氨酸底物法)等。其中天門(mén)冬氨酸底物法的檢測(cè)原理是反應(yīng)開(kāi)始由于α-酮戊二酸作為第二種試劑的添加。煙酰胺腺嘌呤二核苷酸的濃度由其在340/410 nm的吸收率測(cè)量，吸光度降低速率與天門(mén)冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶活性成正比。

目前臨床應(yīng)用的產(chǎn)品在生產(chǎn)廠家、檢測(cè)原理等諸多方面的選擇有很多，為了選出更優(yōu)的，更適合臨床應(yīng)用的產(chǎn)品，現(xiàn)對(duì)市面在售的多種產(chǎn)品中隨機(jī)選擇了兩個(gè)產(chǎn)品試劑A和試劑B 進(jìn)行對(duì)同一樣本的檢測(cè)比對(duì)研究，同時(shí)為了進(jìn)一步驗(yàn)證灰區(qū)樣本的檢測(cè)靈敏度，我們還選擇了一個(gè)應(yīng)用最為廣泛的試劑C 作為第三方試劑，對(duì)檢測(cè)不一致的樣本進(jìn)行復(fù)核，同時(shí)結(jié)合臨床診斷進(jìn)一步判定灰區(qū)樣本的檢測(cè)結(jié)果，進(jìn)而判斷兩種試劑的檢測(cè)的靈敏度。

在此次比對(duì)研究的實(shí)驗(yàn)中，我們計(jì)劃選取100 例血清樣本，進(jìn)行檢測(cè)并統(tǒng)計(jì)比較，樣本的檢測(cè)結(jié)果需要涵蓋檢測(cè)水平正常樣本及異常樣本，且樣本測(cè)量值需要覆蓋較大的檢測(cè)范圍。

雖然此次的研究?jī)H僅是為了挑選更加合適的臨床檢測(cè)用試劑，但是對(duì)于樣本的使用需要符合《赫爾辛基》的倫理原則，任何公開(kāi)的文件中不得透漏任何病人的相關(guān)信息，不得對(duì)病人造成隱私的泄露。因?yàn)榇舜螌?shí)驗(yàn)僅僅是使用臨床常規(guī)檢測(cè)的剩余樣本，所以不會(huì)與人體有直接接觸，預(yù)期不會(huì)產(chǎn)生任何不良事件。同時(shí)會(huì)采取最嚴(yán)格的措施來(lái)保護(hù)樣本信息。而且為了更加客觀地檢測(cè)并評(píng)價(jià)分析檢測(cè)結(jié)果，此次實(shí)驗(yàn)我們將采用盲法，即檢測(cè)人員將無(wú)法得知實(shí)驗(yàn)用樣本的任何信息。樣本收集由人員1 來(lái)完成，樣本收集完成后，由人員1 對(duì)樣本進(jìn)行去標(biāo)識(shí)并重新編號(hào)，編號(hào)順序?yàn)?001-1100。人員1 將編號(hào)完成的樣本送至人員2 手中，由人員2 完成所有的檢測(cè)工作，并將數(shù)據(jù)完整的反饋給人員1.最終由人員1 對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)并分析。統(tǒng)計(jì)完成后再由人員1和人員2同時(shí)對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行討論。

此次實(shí)驗(yàn)樣本入選的標(biāo)準(zhǔn)為臨床剩余樣本；樣本的采集和處理符合標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室操作以及產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的要求；樣本的相關(guān)信息完整，包括年齡，性別，唯一且可追溯的編號(hào)，臨床診斷等。排除標(biāo)準(zhǔn)為嚴(yán)重溶血、混濁的樣本；不符合樣本采集和處理要求的樣本；樣本收集時(shí)間或病例信息不明確。剔除標(biāo)準(zhǔn)為儀器或人為因素（包括樣本處理、檢測(cè)操作可能出現(xiàn)的干擾或錯(cuò)誤）導(dǎo)致無(wú)法確認(rèn)待評(píng)價(jià)試劑與對(duì)比試劑結(jié)果差異的樣本；測(cè)定結(jié)果缺失待評(píng)價(jià)試劑（或?qū)Ρ仍噭┑臋z測(cè)數(shù)據(jù)的樣本；檢測(cè)結(jié)果超出試劑線性范圍的樣本。在測(cè)定過(guò)程中，對(duì)樣本分別用受試試劑和對(duì)比試劑進(jìn)行測(cè)定，分別記錄測(cè)量值，并對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行如下分析。定量分析：根據(jù)試劑A的測(cè)定結(jié)果與試劑B的測(cè)定結(jié)果，求出線性回歸方程，計(jì)算樣本濃度范圍、相關(guān)系數(shù)（r）及常數(shù)的95%置信區(qū)間。定性分析：根據(jù)試劑A 及試劑B 說(shuō)明書(shū)的各自規(guī)定，檢測(cè)結(jié)果在各自參考值范圍內(nèi)的，判斷為陰性；檢測(cè)結(jié)果在各自參考值范圍外的，判斷為陽(yáng)性。如試劑A和試劑B的定性分析不符，則用試劑C 作為第三方檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行檢測(cè)并判定。以試劑A 檢出結(jié)果作為參照，計(jì)算試劑B的陽(yáng)性符合率、陰性符合率、總體符合率和研究試劑和對(duì)比試劑的一致性kappa 值。陽(yáng)性符合率：受試試劑陽(yáng)性樣本占對(duì)比試劑陽(yáng)性樣本的比例。陰性符合率：受試試劑陰性樣本占對(duì)比試劑陰性樣本的比例?？傮w符合率：檢出結(jié)果一致的樣本占總樣本的比例。kappa 值：受試試劑和對(duì)比試劑的一致性。重點(diǎn)關(guān)注灰區(qū)樣本的檢測(cè)與判讀。

本次入組的樣本臨床診斷多為腎病綜合征；肝功能異常、原發(fā)性膽汁性肝硬變、冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病、IgG4 相關(guān)疾病；自身免疫性胰腺炎、慢性腎功能衰竭等。根據(jù)此次試劑A和試劑B 對(duì)入組的110 例樣本的檢測(cè)，其中1071 號(hào)樣本對(duì)試劑A和試劑B 均超出檢測(cè)下限，所以在最終統(tǒng)計(jì)中需剔除此樣本的檢測(cè)結(jié)果。因此最終對(duì)109例樣本的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行定量及定性的數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。統(tǒng)計(jì)結(jié)果如下。

定量統(tǒng)計(jì)：樣本數(shù)量109 例，Y 截距-2.389，相關(guān)系數(shù)0.999，斜率1.035，樣本濃度范圍10U/L-816U/L。設(shè)試劑B 測(cè)定結(jié)果為X，試劑A 測(cè)定結(jié)果為Y，經(jīng)計(jì)算，N=109 次，r=0.9999，P=0.000（P<0.001），根據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)原理，兩組數(shù)據(jù)高度相關(guān)。一元線性回歸方程為：y=1.035x -2.389，F(xiàn) 值為49351.4763，系數(shù)95%至今區(qū)間為1.0258～1.0442，截距95%置信區(qū)間為-3.9489～-0.8291，p<0.05，線性回歸方程具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明試劑A和試劑B 對(duì)同一樣本的檢測(cè)結(jié)果具有很好的相關(guān)性。

定性結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析：根據(jù)試劑A 及試劑B 說(shuō)明書(shū)的各自規(guī)定，試劑A 檢測(cè)結(jié)果15U/L-37 U/L 為陰性，其余檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性。試劑B 檢測(cè)結(jié)果13U/L–40 U/L的為陰性，其余檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性。試劑C 檢測(cè)結(jié)果15U/L-40U/L 為陰性，其余檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性。本次試驗(yàn)共檢測(cè)110 例樣本，對(duì)這110 例有效樣本進(jìn)行定性分析（其中在定量分析時(shí)，剔除的1071 號(hào)樣本（原因：試劑A和試劑B 檢測(cè)結(jié)果均超出線性下限），有定性意義，故在本次定性分析時(shí)無(wú)需剔除）結(jié)果如下。以試劑A 檢出結(jié)果作為參照，計(jì)算試劑B的陽(yáng)性符合率、陰性符合率、總體符合率和試劑A和試劑B的一致性kappa 值。陽(yáng)性符合率＝(2+67)/(4+71)×100%＝92.00%（95%可置信區(qū)間：83.40%～97.01%），陰性符合率＝24/25×100%＝96.00%（95%可置信區(qū)間：79.65%～99.90%），總符合率＝(2+24+67)/100×100%＝93.00%（95%可置信區(qū)間：86.11%～97.14%），Kappa值＝0.8250。

陰陽(yáng)性檢測(cè)結(jié)果不一致的樣本信息如下：樣本1：性別男，年齡49 歲，臨床診斷為末端回腸狹窄，試劑A 檢測(cè)結(jié)果14.60 U/L，試劑B 檢測(cè)結(jié)果14U/L，試劑C 檢測(cè)結(jié)果14.05 U/L；樣本2：性別男，年齡25 歲，臨床診斷為純紅再生障礙性貧血；侵襲性胸腺瘤，試劑A 檢測(cè)結(jié)果39.93U/L，試劑B 檢測(cè)結(jié)果37U/L，試劑C 檢測(cè)結(jié)果34.07 U/L；樣本3：性別女，年齡34 歲，臨床診斷為結(jié)締組織?。环伍g質(zhì)病變，試劑A 檢測(cè)結(jié)果43.21U/L，試劑B 檢測(cè)結(jié)果40U/L，試劑C 檢測(cè)結(jié)果40.05 U/L；樣本4：性別女，年齡44 歲，臨床診斷為骨壞死；重度骨質(zhì)疏松；高脂血癥；血壓；動(dòng)脈硬化，試劑A 檢測(cè)結(jié)果24.09U/L，試劑B 檢測(cè)結(jié)果12U/L，試劑C 檢測(cè)結(jié)果20.03 U/L；樣本5：性別女，年齡55歲，臨床診斷為原發(fā)性膽汁性肝硬化；重度骨質(zhì)疏松，試劑A檢測(cè)結(jié)果38.19U/L，試劑B 檢測(cè)結(jié)果38U/L，試劑C 檢測(cè)結(jié)果39.03 U/L；樣本6：性別女，年齡63 歲，臨床診斷為下肢缺血，試劑A 檢測(cè)結(jié)果14.46U/L，試劑B 檢測(cè)結(jié)果13U/L，試劑C 檢測(cè)結(jié)果14.03 U/L；樣本7：性別女，年齡59 歲，臨床診斷為宮頸惡性腫瘤，試劑A 檢測(cè)結(jié)果40.87U/L，試劑B 檢測(cè)結(jié)果18U/L，試劑C 檢測(cè)結(jié)果40.03 U/L。其中樣本1、2、3、4、5、6的檢測(cè)結(jié)果雖然陰陽(yáng)性判定不一致，但是接測(cè)結(jié)果基本都在參考值附近的灰區(qū)樣本，結(jié)合試劑C的檢測(cè)結(jié)果和臨床診斷，可推斷，檢測(cè)結(jié)果陰陽(yáng)行不符的原因很可能是樣本以及檢測(cè)系統(tǒng)本身的誤差所導(dǎo)致，不影響試劑在臨床中的應(yīng)用。但是樣本7的試劑A和試劑B的檢測(cè)結(jié)果相差很大，但是結(jié)合試劑C的檢測(cè)結(jié)果，可推斷，試劑B 檢測(cè)過(guò)程中出現(xiàn)了錯(cuò)誤，因此此數(shù)據(jù)在此次分析中屬于離群值，在進(jìn)行最終結(jié)果判斷時(shí)建議剔除。

針對(duì)此次實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的分析可發(fā)此次所選的任意三種已上市的試劑，三種試劑對(duì)于同一樣本的測(cè)值有可能會(huì)存在一定差異，但是這種差異對(duì)于臨床診斷的判別影響不大，因?yàn)榕R床醫(yī)生不會(huì)僅僅根據(jù)臨床的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行病人診斷，病人診斷的確定是根據(jù)病人針對(duì)性的檢查與臨床觀察和病人描述等多種因素綜合診斷得出。因此此次實(shí)驗(yàn)無(wú)法判定試劑A和試劑B的優(yōu)劣性。任意一種試劑均可作為臨床診斷的輔助試劑。