Survivin和Ezrin蛋白在乳腺癌組織中表達(dá)及病理意義

林紅霞 韓鷺 劉效伊

(1佳木斯大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，黑龍江 佳木斯 154007；2深圳市龍崗區(qū)婦幼保健院)

乳腺癌的發(fā)生發(fā)展與轉(zhuǎn)移是一個多基因參與、多個步驟完成的復(fù)雜過程，涉及腫瘤細(xì)胞自身生長優(yōu)勢、細(xì)胞間黏附能力的降低、癌細(xì)胞對細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜的降解與破壞、細(xì)胞骨架重構(gòu)引起細(xì)胞運(yùn)動與遷移、細(xì)胞因子誘導(dǎo)的癌細(xì)胞器官特異性定向歸巢及腫瘤血管和淋巴管生成等諸多因素〔1〕。這些因素是互相關(guān)聯(lián)和相互影響的。研究提示與乳腺癌相關(guān)的各種基因及某些蛋白表達(dá)水平的變化對于乳腺癌的診斷均有不同程度的表達(dá)意義〔2〕。本研究通過免疫組化(SP)法檢測乳腺良性病變、乳腺導(dǎo)管內(nèi)癌、乳腺浸潤性導(dǎo)管癌、乳腺小葉原位癌、乳腺浸潤性小葉癌Survivin和Ezrin的蛋白表達(dá)，探討Survivin和Ezrin在乳腺癌組織中的表達(dá)水平及病理意義。

1 材料與方法

1.1材料 收集佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院和佳木斯中心醫(yī)院腫瘤科和病理科2018年5月至2019年3月就診臨床資料完整的乳腺疾病患者活檢組織及選用了部分庫存符合要求的病理石蠟標(biāo)本，其中乳腺良性病變組(乳腺纖維瘤、乳腺增生癥)20例、導(dǎo)管內(nèi)癌組20例、浸潤性導(dǎo)管癌組20例、小葉原位癌組20例、浸潤性小葉癌組20例，且均經(jīng)病理學(xué)證實。按WHO 2012年乳腺腫瘤分類標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行病理學(xué)分級，TNM分期。

1.2方法 兔抗人Survivin多克隆抗體、兔抗人Ezrin多克隆抗體及二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色試劑盒均購自福州近新生物工程有限公司。采用SP，熱抗原修復(fù)，SP色按說明書操作，蘇木素復(fù)染。

1.3結(jié)果判定 福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司提供的陽性對照，以磷酸鹽緩沖液(PBS)分別代替一抗、二抗作為陰性對照，以細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞膜出現(xiàn)黃色和棕黃色為陽性，高倍鏡下選擇組織部位(一般選定5個高倍視野)計數(shù)1 000個細(xì)胞，根據(jù)染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞比例的綜合評分進(jìn)行半定量分析。如：染色強(qiáng)度的判斷(A)無顯色為0，淺黃色或黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；陽性細(xì)胞比例(B)：B<5%為0分，6%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分)。Survivin或Ezrin蛋白表達(dá)水平綜合評價值=A×B。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS23.0軟件進(jìn)行t檢驗及Spearman相關(guān)性分析。

2 結(jié) 果

2.1乳腺良性病變組織和乳腺癌組織中Survivin和Ezrin的表達(dá)水平 乳腺良性病變組Survivin水平(0.80±0.20)均顯著低于導(dǎo)管內(nèi)癌組(4.35±1.23)、浸潤性導(dǎo)管癌組(4.65±1.22)、小葉原位癌組(4.55±1.47)、浸潤性小葉癌組(4.80±1.47，均P<0.05)；導(dǎo)管內(nèi)癌組、浸潤性導(dǎo)管癌組、小葉原位癌組及浸潤性小葉癌組Survivin水平差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(均P>0.05)。乳腺良性病變組Ezrin水平(3.40±1.05)均顯著低于導(dǎo)管內(nèi)癌組(6.10±1.48)、浸潤性導(dǎo)管癌組(11.20±1.48)、小葉原位癌組(6.00±1.30)、浸潤性小葉癌組(11.80±1.32，均P<0.05)；導(dǎo)管內(nèi)癌組Ezrin水平顯著低于浸潤性導(dǎo)管癌組(P<0.05)；小葉原位癌組Ezrin水平顯著低于浸潤性小葉癌組(P<0.05)。見圖1。

圖1 各組Survivin及Ezrin的表達(dá)(DAB，×400)

2.2乳腺癌組織中Survivin和Ezrin表達(dá)水平與患者一般臨床特征的關(guān)系 乳腺癌組織Survivin水平與年齡、腫瘤直徑、TNM分期及月經(jīng)情況均無關(guān)(均P>0.05)，乳腺癌組織Ezrin水平與年齡及月經(jīng)情況均無關(guān)(均P>0.05)，與腫瘤直徑及TNM分期相關(guān)(均P<0.01)。見表1。

表1 乳腺癌組織中Survivin和Ezrin表達(dá)水平與患者臨床特征的關(guān)系

2.3乳腺癌組織中Survivin和Ezrin的表達(dá)水平的相關(guān)性分析 導(dǎo)管內(nèi)癌組和小葉原位癌組乳腺癌組織中Survivin和Ezrin表達(dá)水平均無相關(guān)性(r=0.298，r=0.366，均P>0.05)；浸潤性導(dǎo)管癌組和浸潤性小葉癌組乳腺癌組織中Survivin和Ezrin表達(dá)水平呈正相關(guān)(r=0.489，0.495，均P<0.05)。

3 討 論

Survivin是迄今為止克隆出的最小凋亡抑制因子(IAP)，也是目前發(fā)現(xiàn)凋亡抑制作用最強(qiáng)的因子，能特異性的與作為細(xì)胞凋亡的核心機(jī)制末端效應(yīng)細(xì)胞半胱氨酸蛋白酶(caspase)-3和caspase-7結(jié)合，通過在細(xì)胞內(nèi)與微管的聚合和解聚，抑制其過表達(dá)引起細(xì)胞凋亡，使一些轉(zhuǎn)化細(xì)胞逃避機(jī)體免疫系統(tǒng)的監(jiān)視而無法清除，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖和擴(kuò)散〔3，4〕。Survivin主要在胚胎和發(fā)育階段的胎兒組織中表達(dá)，但是在正常成人組織中并沒有表達(dá)，這也說明Survivin的組織分布有特異性〔5〕。

研究提示Survivin是判斷惡性腫瘤預(yù)后的重要因素之一，在細(xì)胞轉(zhuǎn)化的早期Survivin就有表達(dá)，并且參與了細(xì)胞的惡變過程，與惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有密切關(guān)系〔6，7〕。本研究提示Survivin的異常遺傳學(xué)改變參與了乳腺上皮細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化過程，Survivin的異常高表達(dá)，可能使細(xì)胞的正常凋亡機(jī)制受損，從而導(dǎo)致有惡變潛能的細(xì)胞不斷的積累，從而導(dǎo)致乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展，與乳腺癌的進(jìn)展密切相關(guān)。

Ezrin為膜細(xì)胞骨架連接蛋白，屬于ERM家族成員之一，ERM蛋白的C末端與細(xì)胞骨架的actin相連，N末端通過與細(xì)胞表面的黏附分子Cadherin、CD44等相連接，調(diào)節(jié)細(xì)胞與細(xì)胞，細(xì)胞與間質(zhì)黏附性而影響惡性腫瘤細(xì)胞侵襲性等生物學(xué)行為〔8〕。Ezrin主要集中在富含肌動蛋白的細(xì)胞微絨毛和細(xì)胞膜的皺襞中，并參與上皮細(xì)胞的膜動力學(xué)。在生理狀態(tài)下，Ezrin參與細(xì)胞表面結(jié)構(gòu)，例如偽足、微絨毛等的形成，并參與細(xì)胞間、細(xì)胞與基質(zhì)之間的黏附、信號傳導(dǎo)、細(xì)胞運(yùn)動〔9〕。微絨毛能增加細(xì)胞的表面積，參與細(xì)胞與細(xì)胞的結(jié)合，它給予細(xì)胞游走能力和捕獲能力，細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi)Ezrin蛋白通過自己作為支架分子來集中信號分子，并通過羧基末端區(qū)和肌動蛋白結(jié)合，共同聚集在細(xì)胞胞質(zhì)膜的內(nèi)面，通過氨基末端與細(xì)胞的胞質(zhì)膜受體的胞質(zhì)尾區(qū)相互作用，優(yōu)先作用于細(xì)胞表面突出(如微絨毛、絲足、微小突起、局部的黏附物和膜皺褶)。本研究提示Ezrin可能在正常組織中定位于細(xì)胞表面，而在癌變組織中存在于胞質(zhì)和胞漿中，Ezrin參與細(xì)胞與細(xì)胞間及細(xì)胞與基質(zhì)之間的黏附、信號傳導(dǎo)、細(xì)胞運(yùn)動，從而導(dǎo)致乳腺癌的發(fā)生和發(fā)展和轉(zhuǎn)移。

PI3K和Ezrin蛋白在結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展、侵襲、轉(zhuǎn)移中起著重要作用〔10〕。在腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和浸潤過程中Survivin和Ezrin都有一個共同的信號通路——磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)和Akt途徑，該信號通路可活化Ezrin促進(jìn)腫瘤的轉(zhuǎn)移和浸潤，且參與Survivin的調(diào)控，促進(jìn)細(xì)胞進(jìn)入分裂周期，抑制細(xì)胞凋亡〔11〕。