鄭麗珠，葉圣，宋瑋婷

寧德市婦幼保健院兒童保健科，福建寧德 352100

遺傳代謝?。╥nherited metabolic disorders,IMD）是指由于基因突變使合成的酶、受體或載體等蛋白功能缺陷，導(dǎo)致機(jī)體生化物質(zhì)代謝紊亂，而出現(xiàn)的一系列臨床癥狀[1]。IMD 包含的病種多達(dá)上千種，其中常見病種有500～600 種[2]。在國外IMD 的發(fā)病率約0.1%～0.13%[3-4]。新生兒遺傳代謝病的臨床表現(xiàn)多種多樣，無特異性，各個系統(tǒng)、器官均可受累，且發(fā)病年齡跨度大，任何年齡段均可發(fā)病，病死率、致殘率高，故早期篩查與診斷意義重大。應(yīng)用串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)能在短時間內(nèi)檢測出氨基酸、游離肉堿、?；鈮A相對值，從而實現(xiàn)對40 余種疾病，包括氨基酸、有機(jī)酸、脂肪酸代謝異常疾病的篩查。目前該技術(shù)廣泛應(yīng)用于全國各個地區(qū)的新生兒IMD 篩查，且取得良好效果[5]。寧德市婦幼保健院于2016年9 月開始進(jìn)行新生兒IMD 的篩查工作，為了解閩東地區(qū)新生兒IMD 患病率及疾病譜，現(xiàn)將寧德市2016 年9 月—2020 年12 月出生的135 148 例 新生 兒串聯(lián)質(zhì)譜代謝病篩查情況進(jìn)行回顧性分析，現(xiàn)報道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選取在本院新生兒疾病篩查中心進(jìn)行新生兒遺傳代謝病篩查的135 148 例新生兒為研究對象。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集與遞送 足月出生的健康新生兒在3～7 d 內(nèi)經(jīng)過充分哺乳（≥6 次）后采血；疾病狀態(tài)兒、早產(chǎn)兒、低體重兒或提前出院等情況未采血者，采血時間<20 d，所有樣本均按照《新生兒疾病篩查血片采集技術(shù)規(guī)范》進(jìn)行采集[6]。由接產(chǎn)醫(yī)院采集足跟血，滴于新生兒疾病篩查濾紙卡，要求血斑直徑≥8 mm，雙面滲透良好，在室溫中自然陰干，封存于密封袋，置于2～8℃冰箱保存,并于5 d 內(nèi)通過新篩冷鏈系統(tǒng)，遞送至本中心應(yīng)用串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)進(jìn)行標(biāo)本檢測。

1.2.2 儀器和試劑 Waters 1525 Binary HPLC Pump（1525 高效液相色譜儀）和Waters TQ Detector 串聯(lián)質(zhì)譜儀購自美國Waters 公司。使用非衍生法檢測標(biāo)本中氨基酸、琥珀酰丙酮及肉堿的試劑盒是由芬蘭的PerKin Elmer 公司提供。

1.2.3 檢測方法 取合格的血濾紙卡片用打孔器取出直徑3 mm 圓形樣本，置于96 孔板中，將含有內(nèi)標(biāo)的萃取溶液加入孔中萃取樣本中的氨基酸、酰基肉堿，吸取萃取液置于96 孔V 型板中，覆蓋鋁膜上機(jī)檢測。

1.2.4 篩查結(jié)果的判讀及診斷 根據(jù)新生兒IMD 在串聯(lián)質(zhì)譜檢測結(jié)果中的相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行篩查。結(jié)合本地區(qū)串聯(lián)質(zhì)譜檢測結(jié)果參考值進(jìn)行分析。首次檢測異常者為初篩可疑陽性，需要原血片復(fù)查，若仍是陽性則為初篩陽性。對初篩陽性新生兒及時召回再次采集血標(biāo)本檢測，召回樣本如仍為陽性者，需進(jìn)一步行尿有機(jī)酸分析、血氣分析、生化、乳酸等相關(guān)檢查。可疑患兒行致病基因檢測。結(jié)合基因檢測等結(jié)果可確診新生兒IMD。確診為IMD的患兒將建立檔案由專人進(jìn)行專案管理，跟蹤患兒的治療。

2 結(jié)果

閩東地區(qū)新生兒IMD 篩查的結(jié)果：本中心共篩查135 148 例新生兒，初篩陽性患兒1 738 例，初篩陽性率1.29%，召回1 625 例，召回率93.5%，召回復(fù)查陽性患兒134 例,召回復(fù)查陽性率8.2%。可疑患者進(jìn)一步進(jìn)行生化、尿有機(jī)酸檢測，并通過基因檢測及父母家系驗證確診，均為純合或復(fù)合雜合突變。最終確診48 例，總體陽性預(yù)測值為2.95%，總體患病率為1/2 816。涉及三大類型（氨基酸、有機(jī)酸、脂肪酸）14 種遺傳代謝病病種，其中氨基酸代謝病4 種（不含苯丙酮尿癥），11 例（1/12 286），有機(jī)酸代謝病5 種，12 例（1/11 262），脂肪酸代謝病5 種，25 例（1/5 406）。見表1。

表1 閩東地區(qū)135 148 例新生兒IMD 篩查情況

3 討論

IMD 臨床表現(xiàn)多種多樣，可累及多器官、多系統(tǒng)，最常見累及神經(jīng)系統(tǒng)，可造成不可逆的神經(jīng)系統(tǒng)損害，同時該病急性期可致患兒猝死。IMD 中大部分疾病通過早期診斷與治療，可使患兒生長發(fā)育與正常同齡兒相同。故早期發(fā)現(xiàn)、診斷與治療具有十分重大的意義。近年來隨著串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)在我國的廣泛應(yīng)用，使既往難以發(fā)現(xiàn)的IMD 得到了早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療。

應(yīng)用串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)篩查閩東地區(qū)新生兒IMD結(jié)果顯示,閩東地區(qū)新生兒IMD 初篩陽性率為1.29%，總體陽性預(yù)測值為2.95%,與我國其他地區(qū)報道的初篩陽性率1.2%～2.21%[7-8]及總體陽性預(yù)測值2.6%～3.38%[9]相似。因本資料中不包含苯丙酮尿癥患兒,故本研究所得初篩陽性率可能較實際低。其次初篩陽性患兒1 738 例，最終確診48 例，由此可見應(yīng)用串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)進(jìn)行新生兒IMD 篩查的假陽性率較高,可能與串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)具有高靈敏度,同時該技術(shù)為篩查試驗而非確診試驗有關(guān)，目前國內(nèi)其他地區(qū)亦存在此問題。因此，對假陽性結(jié)果進(jìn)行大數(shù)據(jù)分析、比對，不斷優(yōu)化篩查標(biāo)準(zhǔn)，降低假陽性，提高篩查率是今后工作的重點。

資料中135 148 例新生兒中檢出48 例IMD 患兒，在不含苯丙酮尿癥患兒情況下總體患病率已達(dá)到1/2 816。高于浙江省的患病率1/4 937[10-12]，低于河北省石家莊市的患病率1/1 259[13]，而與河南省的患病率1/2 805[14]相似。提示了新生兒IMD 在不同地區(qū)的患病率不同，具有地域差異性。這可能與不同地區(qū)人群種族不同以及實驗過程中標(biāo)本采集、遞送方式不同和對異常指標(biāo)的把控不同等都有一定相關(guān)性。需要更多數(shù)據(jù)分析確認(rèn)。

48 例患兒，包含14 種疾病，其中前5 位病種順位分別為原發(fā)性肉堿缺乏癥、2-甲基丁酰輔酶A 脫氫酶缺乏癥、希特林缺乏癥、戊二酸血癥1 型、多種?；o酶A 脫氫酶缺乏癥，在本地區(qū)患病率較高的2-甲基丁酰輔酶A 脫氫酶缺乏癥、戊二酸血癥1型，與鐘錦平等[15]報道一致，提示可能是福建地區(qū)的高發(fā)病種。這些疾病的發(fā)現(xiàn)，擴(kuò)大了閩東地區(qū)新生兒IMD 的疾病譜，同時對本地區(qū)相關(guān)臨床醫(yī)師積累更多的診療經(jīng)驗具有重要意義。

本研究分析了閩東地區(qū)新生兒IMD 的總體患病率及疾病譜情況。因IMD 除了少數(shù)為性染色體遺傳，大部分為常染色體隱性遺傳。已生育過IMD 的家庭，仍有較大可能性再次生育出IMD 的患兒。早期篩查出新生兒IMD 還可以指導(dǎo)此類家庭在再次妊娠期間利用胎盤絨毛膜細(xì)胞及羊水細(xì)胞進(jìn)行基因突變情況分析，做好出生缺陷二級預(yù)防。故串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)應(yīng)用于新生兒IMD 篩查意義重大，值得推廣。