肖新生，張 慎，袁 芳，李佳穎

1.湖南科技學(xué)院化學(xué)與生物工程學(xué)院，湖南省永州市零陵區(qū)楊梓塘路130號(hào) 425199 2.湖南省煙草公司永州市公司，湖南省永州市冷水灘區(qū)珍珠北路69號(hào) 425100

1 煙草中擬除蟲菊酯類農(nóng)藥應(yīng)用與檢測概述

擬除蟲菊酯是文菊花中天然成分除蟲菊酯的合成類似物。擬除蟲菊酯類農(nóng)藥作為一類廣譜的殺蟲劑，1948年由美國農(nóng)業(yè)部實(shí)驗(yàn)室人工合成。新開發(fā)的擬除蟲菊酯類農(nóng)藥具有使用濃度低、觸殺作用強(qiáng)、滅蟲速度快、殘效時(shí)間長及安全系數(shù)高等優(yōu)點(diǎn)，是殺蟲劑農(nóng)藥的一個(gè)新的突破。調(diào)查發(fā)現(xiàn)，我國煙草中害蟲有200余種，病害有68種，嚴(yán)重影響了煙草生產(chǎn)安全［1］。為了保障煙草質(zhì)量，使用化學(xué)農(nóng)藥防治是目前最有效的手段。擬除蟲菊酯類農(nóng)藥對煙草多種害蟲，如桃食心蟲類、尺嫂類、扇舟蛾類、卷葉蛾類等，均有較好的防治效果。盡管過去一直認(rèn)為擬除蟲菊酯類農(nóng)藥在人體內(nèi)易被氧化酶系統(tǒng)降解，無蓄積性，是低毒性的農(nóng)藥［2］。但后續(xù)研究資料表明，如果長期接觸，即便是低濃度的接觸，也會(huì)對人體免疫系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)以及血液循環(huán)系統(tǒng)等產(chǎn)生不利影響［3-4］。

為了保障煙草制品的質(zhì)量安全，國際煙草科學(xué)研究合作中心（CORESTA）于2021年提出了包含10種擬除蟲菊酯類在內(nèi)的117種農(nóng)藥在煙草中的指導(dǎo)性殘留限量（Guidance residue limits，GRLs）（表1）。歐美等國家和地區(qū)也制定了煙草中包含擬除蟲菊酯類在內(nèi)的農(nóng)藥最大殘留限量（Maximum residue limits，MRLs）。由于氯氰菊酯、高效氯氟氰菊酯、氟氯氰菊酯、氰戊菊酯和溴氰菊酯等在煙草生產(chǎn)中的廣泛使用，其殘留也是每年煙草公司質(zhì)量抽檢的必檢項(xiàng)目。因此，開展煙草中擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留分析具有重要的意義。

表1 煙草中擬除蟲菊酯類農(nóng)藥種類及指導(dǎo)性殘留限量①Tab.1 Species and guidance residue levels of pyrethroid pesticides in tobacco

目前，關(guān)于食品或環(huán)境中擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留量分析方法的報(bào)道較多，但由于煙草成分復(fù)雜，干擾成分多，這些方法并不能完全適用于煙草中擬除蟲菊酯類殺蟲劑殘留的分析。盡管已經(jīng)制定了煙草中有機(jī)氯和擬除蟲菊酯類農(nóng)藥檢測的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，但是在實(shí)際使用過程中，還存在干擾因素多、定量不準(zhǔn)、分析時(shí)間長、假陽性多等問題。因此，科研工作者對擬除蟲菊酯類農(nóng)藥分析方法在煙草中的應(yīng)用情況進(jìn)行了持續(xù)深入的研究，為便于廣大相關(guān)科研人員根據(jù)現(xiàn)有條件合理地選擇煙草及其制品中擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留量的分析方法，現(xiàn)將有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道情況進(jìn)行歸納總結(jié)。

2 煙草中擬除蟲菊酯類農(nóng)藥分析方法研究現(xiàn)狀

目前，擬除蟲菊酯的分析方法主要有氣相色譜-電子捕獲檢測器法（Gas chromatography-Electron capture detector，GC-ECD）、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（Gas chromatography-Mass spectrometry，GC-MS）、氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（Gas chromatography-Tandem mass spectrometry，GC-MS/MS）、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（Liquid chromatography-Tandem mass spectrometry，LC-MS/MS）、高效液相色譜法（High performance liquid chromatography，HPLC）等。有關(guān)擬除蟲菊酯分析檢測的綜述已有較多報(bào)道［5-11］，而有關(guān)煙草中農(nóng)藥殘留分析檢測的綜述也有少量報(bào)道［1，12］，但有關(guān)煙草中擬除蟲菊酯檢測方法的綜述鮮見報(bào)道。以下對煙草中擬除蟲菊酯殘留幾種主要的分析方法進(jìn)行歸納，對比各分析方法的特點(diǎn)。

2.1 GC-ECD法

目前，分析煙草中擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留量最主要的方法是GC法，并采用電子捕獲檢測器（ECD）。由于GC-ECD法對含電負(fù)性基團(tuán)的分子具有較高的靈敏度，在有機(jī)氯、擬除蟲菊酯和其他含電負(fù)性原子的農(nóng)藥殘留分析中應(yīng)用廣泛。煙草中擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留檢測和農(nóng)藥降解規(guī)律研究的論文也大多選擇該方法。煙草中擬除蟲菊酯農(nóng)藥殘留量測定的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)（YC/T 405.2—2011［13］）也采用GC-ECD方法。通過對相關(guān)文獻(xiàn)的對比分析發(fā)現(xiàn)，研究對象既有鮮煙葉［14-19］，也有干煙葉和成品煙［13,20-29］；有多種農(nóng)藥的殘留分析［13,15,21-24,27-31］，也有單種農(nóng)藥的殘留分析［14,16-20,25,32］。不同文獻(xiàn)中檢測方法的差異主要表現(xiàn)在前處理方面；其次在色譜條件的優(yōu)化方面也有所不同，特別是色譜柱的選擇。

GC-ECD法檢測煙草中擬除蟲菊酯類農(nóng)藥的前處理對測定結(jié)果影響非常大，不恰當(dāng)?shù)那疤幚韺?dǎo)致雜質(zhì)干擾目標(biāo)農(nóng)藥的定性定量分析。前處理一般均需經(jīng)過提取和凈化兩個(gè)步驟。在提取步驟中，主要涉及的關(guān)鍵點(diǎn)為提取方法和提取溶劑的選擇。目前，文獻(xiàn)所涉及的主要提取方法及特點(diǎn)如表2所示。對于鮮煙葉中擬除蟲菊酯的提取，大多文獻(xiàn)中采用了組織搗碎勻漿法［15-16,18-19］。對于干煙葉中擬除蟲菊酯的提取，早期文獻(xiàn)中報(bào)道的是索氏提取法［18-19］，其后逐漸發(fā)展了機(jī)械攪拌提?。?1,33］、渦旋振蕩提?。?1,34］、超聲波輔助提?。?3,20,23,25-27,29］和Quick-Easy-Cheap-Effective-Rugged-Safe（QuEChERS）提?。?2］等方法。

表2 GC-ECD法檢測煙草中擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留提取方法比較Tab.2 Extraction methods of pyrethroid pesticide residues in tobacco by GC-ECD method

提取溶劑是另一個(gè)關(guān)注的熱點(diǎn)問題，常采用的提取溶劑有丙酮［17-19,25,28-29,33-34］、丙酮-水［15,27,31］、乙腈-水［16,32］、石油醚［18-19,22］、環(huán)己烷［24,26］、石油醚-丙酮［14,20,25］、乙酸乙酯-正己烷［13,21,23］。早期的文獻(xiàn)中也有用丙酮提取后，接著采用石油醚對煙葉再次進(jìn)行提取的報(bào)道［17,28-29,33］；用乙腈提取后再用正己烷萃取乙腈提取液的方法也有報(bào)道［30］。喻學(xué)文［22］對QuEChERS方法中的提取溶劑乙腈和石油醚進(jìn)行了比較，而石杰等［26］比較了環(huán)己烷、二氯甲烷、環(huán)己烷-乙酸乙酯等不同極性的有機(jī)溶劑或混合溶劑作為提取溶劑的提取效果，結(jié)果如表3所示。從表3的對比結(jié)果可以看出，采用非極性溶劑，提取效率較高。

表3 GC-ECD法檢測煙草中擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留提取溶劑比較Tab.3 Extraction solvents of pyrethroid pesticide residues in tobacco by GC-ECD method

GC-ECD法檢測煙草中擬除蟲菊酯類農(nóng)藥的前處理凈化步驟中，主要采用的方法有填充玻璃凈化柱分離、固相萃取小柱（Solid phase extraction，SPE）分離及凝膠色譜分離。采用填充玻璃凈化柱凈化時(shí)，一般在玻璃凈化柱子兩端各裝2 g左右的無水硫酸鈉，在中間裝入15 g左右的弗羅里硅土或硅酸鎂

吸附劑，洗脫劑可以采用不同比例的丙酮-正己烷或乙酸乙酯-石油醚混合溶劑。該方法操作相對繁瑣，現(xiàn)逐漸被SPE技術(shù)所取代。目前，SPE有弗羅里硅土（Florisil）固相萃取小柱［13,22-23,26,31］、C18固相萃取小柱［14,25］、硅膠固相萃取小柱［20］、二元石墨化碳-氨基復(fù)合固相萃取小柱（PestiCarb-NH2，PC-NH2）和三元茶葉專用固相萃取小柱（Triple phase SPE for tea，TPT）［21］等。弗羅里硅土主要成分為硅酸鎂，是具有弱堿性的硅酸鹽吸附劑，主要吸附去除有機(jī)酸和強(qiáng)極性干擾物。氨基與弗羅里硅土類似，可以去除有機(jī)酸和部分色素等極性干擾物。C18可以去除脂類，而石墨化碳可以去除色素和部分芳香物質(zhì)。Dattilo等［31］采用Florisil固相萃取小柱對煙草提取物進(jìn)行凈化，使用GC-ECD同時(shí)測定了煙草中8種擬除蟲菊酯類農(nóng)藥。李櫻等［30］對比了Florisil固相萃取小柱和大型Florisil硅土柱，石杰等［26］采用V環(huán)己烷∶V二氯甲烷=80∶20的混合溶劑為洗脫劑對比了硅膠柱和Florisil柱兩種正相柱的凈化效果，宋春滿等［21］比較了Florisil單一填料、PC-NH2二元復(fù)合填料和TPT三元復(fù)合填料3種固相萃取小柱對煙草樣品的凈化效果，結(jié)果如表4所示。

表4 GC-ECD法檢測煙草中擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留的凈化柱效果比較Tab.4 Purification column effects of GC-ECD method for determination of pyrethroid pesticide residues in tobacco

凝膠滲透色譜（Gel permeation chromatography，GPC）是利用不同體積的分子在多孔性凝膠中運(yùn)動(dòng)的路徑長短不一，大分子（例如油脂、色素、生物堿、聚合物等）由于不能進(jìn)入細(xì)微結(jié)構(gòu)，先被淋洗出來，而農(nóng)藥等小分子的運(yùn)動(dòng)路徑長，在凝膠柱中停留的時(shí)間長，后被淋洗出來。GPC在動(dòng)物性食品復(fù)雜樣品分析的前處理中應(yīng)用廣泛，因此也可應(yīng)用于煙草等復(fù)雜基質(zhì)中農(nóng)藥殘留分析的凈化。方敦煌等［15］采用GPC對煙草提取物進(jìn)行凈化，探討了煙草中7種擬除蟲菊酯農(nóng)藥在GPC柱上的流出規(guī)律。由于GPC價(jià)格比較昂貴，劉躍華等［27］采用普通的聚苯乙烯凝膠柱對其進(jìn)行替代后，應(yīng)用于煙草提取物中溴氰菊酯、高效氯氰菊酯、氟氯氰菊酯和S-氰戊菊酯的凈化處理，在GC-ECD檢測中取得了與GPC近似的凈化效果。

凝結(jié)法通過將煙葉組織中提取出來的各種復(fù)雜干擾物轉(zhuǎn)化為沉淀物，也應(yīng)用在煙草擬除蟲菊酯類農(nóng)藥GC-ECD檢測前處理中。呂靜等［33］、張雪燕等［34］分別將煙葉樣品用丙酮提取后，再用石油醚萃取，然后用H3PO4-NH4Cl溶液凝結(jié)，最后分別采用填充弗羅里硅土和硅膠的玻璃柱進(jìn)行層析凈化，分別建立了煙草中6種擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留量的檢測技術(shù)。喻學(xué)文［22］研究發(fā)現(xiàn)，QuEChERS前處理步驟中，在加入硫酸鎂和N-丙基乙二胺吸附劑（N-Propyl ethylenediamine adsorbent,PSA）凈化之前，對溶解了農(nóng)藥的煙葉樣品提取液進(jìn)行15～20 min冷卻處理，可使GC-ECD檢測中擬除蟲菊酯類農(nóng)藥色譜峰的分離度更高。

在GC-ECD分析檢測步驟中，主要涉及色譜柱的選擇和分析條件的優(yōu)化等。色譜柱選擇上，早期采用填充柱，如呂靜等［33］采用填充3%（質(zhì)量百分比，下同）的OV-101（3%聚二甲基硅氧烷-101）+3%APIEZON L（阿皮松L）+94%Gas chrom Q（硅藻土型色譜載體Q）固定相的玻璃柱，實(shí)現(xiàn)煙草中6種擬除蟲菊酯類農(nóng)藥的分離。近年來，填充柱逐漸被毛細(xì)管柱所取代，毛細(xì)管柱內(nèi)壁通過化學(xué)鍵鍵合的固定相主要有（5%苯基）甲基聚硅氧烷（對應(yīng)色譜柱型號(hào)：DB-5［26］、HP-5［20］）、（14%氰丙基苯基）甲基聚硅氧烷（對應(yīng)色譜柱型號(hào)：DB-1701［30］）等。ECD檢測器對于載氣的純度要求較高，一般采用高純氮?dú)庾鳛檩d氣，要求純度＞99.999%。也有文獻(xiàn)報(bào)道采用高純氫氣［28］或高純氦氣［21,26］作為載氣的。對于擬除蟲菊酯類農(nóng)藥的分析，GC-ECD的檢測限?？傻椭?.001～0.014 mg/kg［13］，靈敏度比GC-MS法高出10倍以上；而其不足之處為定性能力較差，導(dǎo)致假陽性比較嚴(yán)重，需要用另一根不同極性的色譜柱或者采用GC-MS進(jìn)行驗(yàn)證。

2.2 GC-MS法

GC-MS法具有色譜的高效分離和質(zhì)譜的準(zhǔn)確定性定量能力，在擬除蟲菊酯類農(nóng)藥檢測中應(yīng)用廣泛［35-40］。同時(shí)，GC-MS法在煙草中農(nóng)藥殘留檢測、風(fēng)味成分的檢測、活性成分的檢測等方面也有廣泛應(yīng)用［41-46］。而有關(guān)GC-MS法在煙草中擬除蟲菊酯農(nóng)藥分析中的應(yīng)用也有文獻(xiàn)報(bào)道。

從現(xiàn)有文獻(xiàn)看，既有單種農(nóng)藥殘留的分析［47］，也有多種農(nóng)藥殘留的分析［48-53］。在前處理過程中，陳雪等［47］采用填充了弗洛里硅土的玻璃柱進(jìn)行凈化，洪蓮等［48］采用氣流式微注射器萃取技術(shù)（Gas purge microsyringe extraction，GP-MSE）對煙草中6種擬除蟲菊酯類農(nóng)藥進(jìn)行萃取、濃縮和凈化。Gao等［49］采用改進(jìn)的QuEChERS方法，以乙腈-飽和鹽水兩相體系作為萃取劑，PSA作為凈化劑，無需經(jīng)過固相萃取柱，可以直接上機(jī)分析。牟定榮等［50］以超聲波輔助乙腈萃取煙草中的擬除蟲菊酯類農(nóng)藥，然后采用C18固相萃取小柱凈化。曹建敏等［51］建立了包含6種常用擬除蟲菊酯在內(nèi)的煙草中40種農(nóng)藥的固相萃取GC-MS分析法。煙草樣品用乙腈提取后，經(jīng)TPT固相萃取小柱凈化，然后采用GC-MS進(jìn)行分析。Hou等［52］在前處理過程中采用攪拌棒吸附萃取技術(shù)（Stir bar sorptive extraction，SBSE）提取煙草中的5種擬除蟲菊酯，然后采用熱脫附系統(tǒng)將提取的物質(zhì)熱脫附后進(jìn)行分析。Shen等［53］以水作為萃取劑，采用超聲波輔助固相微萃?。⊿olid phase microextraction，SPME）進(jìn)行前處理，以涂有聚二甲基硅氧烷的纖維膜作為固相萃取膜，整個(gè)前處理過程僅包含超聲波輔助提取和固相微萃取步驟，所需總時(shí)間＜15 min。

GC-MS分析煙草中農(nóng)藥殘留時(shí)，全掃描模式因靈敏度和選擇性差沒有被采用。選擇離子掃描模式（Selective ion monitoring，SIM）在GC-MS檢測煙草中擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留的靈敏度和選擇性可以滿足要求，例如牟定榮等［50］、曹建敏等［51］、Hou等［52］和Shen等［53］均報(bào)道了相應(yīng)方法。馮義志等［54］比較了GC-ECD、GC-EI-MS和GC-NCI-MS 3種不同檢測方法測定煙草中氟氯氰菊酯的靈敏度，發(fā)現(xiàn)GC-ECD法的響應(yīng)值高，選擇性差，對凈化要求高；GC-EI-MS法的響應(yīng)值一般，但選擇性強(qiáng)，基本無雜質(zhì)干擾；GC-NCI-MS的響應(yīng)值較高，選擇性強(qiáng)，基本無雜質(zhì)干擾。

采用GC-MS法分析煙草中農(nóng)藥殘留時(shí)，方法的最低檢測限、加標(biāo)回收率和RSD數(shù)據(jù)如表5所示?？梢钥闯?，大部分文獻(xiàn)報(bào)道的檢測限、加標(biāo)回收率和RSD均能夠滿足農(nóng)藥殘留檢測的要求。曹建敏等［51］采用GC-MS法對煙草中6種常用擬除蟲菊酯農(nóng)藥進(jìn)行分析時(shí)還發(fā)現(xiàn)，基質(zhì)效應(yīng)特別明顯。

表5 GC-MS法檢測煙草中擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留的檢測限、加標(biāo)回收率及RSDTab.5 Limits of detection,spiked recoveries and RSDs of pyrethroid pesticide residues in tobacco by GC-MS method

2.3 GC-MS/MS法

因?yàn)镚C-MS法單級(jí)質(zhì)譜定量檢測的靈敏度相對較低，同時(shí)在定性過程中容易出現(xiàn)假陽性，所以具有更高靈敏度和選擇性的GC-MS/MS技術(shù)逐漸受到重視，成為農(nóng)藥殘留分析的主流方法之一。GC-MS/MS法在擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留分析方面的應(yīng)用有不少文獻(xiàn)報(bào)道［55-62］，我國也制定了GC-MS/MS測定擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。近年來，將GC-MS/MS法應(yīng)用到煙草中擬除蟲菊酯類多種農(nóng)藥殘留檢測也有文獻(xiàn)報(bào)道。Haib等［63］建立了一種以丙酮作萃取劑，利用加壓溶液萃取技術(shù)提取農(nóng)藥，采用GC-MS/MS法分析煙草中擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留的新方法；同時(shí)還對比了三重四極桿EI離子源GC-MS/MS、負(fù)化學(xué)電離源GC-MS與帶熒光檢測器的HPLC法檢測農(nóng)藥的靈敏度和選擇性。Lee等［64］也采用GC-MS/MS技術(shù)分析了包含氟氯氰菊酯、氯菊酯、氟氰戊菊酯、溴氰菊酯在內(nèi)的煙草中49種農(nóng)藥殘留，發(fā)現(xiàn)采用選擇反應(yīng)監(jiān)控模式，氣相色譜的分離效果對檢測結(jié)果分析影響不大，農(nóng)藥殘留的最低檢測限在0.004～0.039μg/mL之間；該研究中還比較了前處理方法中所采用的PSA、C18柱、石墨化碳3種吸附材料，結(jié)果表明，采用QuEChERS法，以PSA為吸附劑，結(jié)合基質(zhì)配標(biāo)，測定結(jié)果的回收率和重復(fù)性最好。Cochran［65］將二維氣相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜（GC×GC-TOF-MS）法用于煙草中有機(jī)氯、有機(jī)磷和擬除蟲菊酯類農(nóng)藥的殘留分析，效果也較好。陳曉水等［66］采用GC-MS/MS法測定煙草中包含擬除蟲菊酯的132種農(nóng)藥殘留，所測農(nóng)藥的定量限均低于0.02 mg/kg，平均回收率為68.10%～123.15%，RSD為1.79%～19.88%。陳黎等［67］采用GC-MS/MS測定高效氯氟氰菊酯和氰戊菊酯的方法，系統(tǒng)研究了煙草農(nóng)藥殘留在大田生長期及加工過程中的變化規(guī)律。樓小華等［58］建立了煙草中包含擬除蟲菊酯類在內(nèi)的113種農(nóng)藥殘留的GC-MS/MS分析方法，通過色譜柱的選擇、分析參數(shù)的優(yōu)化，實(shí)現(xiàn)了快速準(zhǔn)確的分析。將與GC串聯(lián)的ECD、MS、MS/MS 3種檢測器在煙草中擬除蟲菊酯殘留測定的應(yīng)用情況進(jìn)行對比，結(jié)果如表6所示。

表6 GC-ECD、GC-MS、GC-MS/MS法測定煙草中擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留的特點(diǎn)Tab.6 Characteristics of GC-ECD,GC-MSand GC-MS/MSmethods in determination of pyrethroid pesticide residues in tobacco

2.4 HPLC法

HPLC法具有高效的分離能力，廣泛應(yīng)用于檢測分子量大、沸點(diǎn)高、受熱不穩(wěn)定的化合物。郭衛(wèi)蕓等［68］采用配備了二極管陣列檢測器（Photo-diode array，PDA）的超高效液相色譜儀，實(shí)現(xiàn)了煙草中溴氰菊酯和氣相色譜法不能檢測的四溴菊酯的同時(shí)分析，結(jié)果表明，在6.5 min內(nèi)可以完成對四溴菊酯和溴氰菊酯殘留量的分析，定量限分別為0.33和0.23 mg/kg。雖然HPLC法已在煙草農(nóng)藥殘留檢測中有應(yīng)用，但是常用檢測器（如紫外分光光度計(jì)、折光儀、蒸發(fā)激光光散射儀等）對擬除蟲菊酯類農(nóng)藥檢測的靈敏度還有待進(jìn)一步提高。靈敏度較高的熒光檢測器要求樣品必須帶有熒光基團(tuán)，而擬除蟲菊酯等大多數(shù)農(nóng)藥分子中沒有發(fā)光團(tuán)，不能直接用HPLC法檢測，因此，能采用HPLC檢測的農(nóng)藥種類相對較少。

2.5 LC-MS/MS法

采用LC-MS/MS法進(jìn)行樣品分析時(shí)，樣品混合物需先經(jīng)高效液相色譜進(jìn)行分離，然后進(jìn)入質(zhì)譜儀，在多反應(yīng)監(jiān)測（Multiple reaction monitoring，MRM）模式下進(jìn)行定性定量分析。該方法具有較強(qiáng)的選擇性和靈敏度，可對極性相對較大的農(nóng)藥分子進(jìn)行有效分離和定性定量分析，且對柱分離效果要求不高，在農(nóng)藥殘留分析中應(yīng)用廣泛。GB/T 20769—2008［69］中，采用LC-MS/MS法同時(shí)測定水果和蔬菜中450種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品，其中只包含胺菊酯、生物丙烯菊酯和生物芐呋菊酯3種極性相對較大的擬除蟲菊酯類農(nóng)藥。YC/T 405.1—2011［70］中規(guī)定了73種農(nóng)藥的HPLC-MS/MS分析方法，但不包含擬除蟲菊酯類農(nóng)藥。穆小麗等［71］探索了采用LC-MS/MS法測定煙草樣品中擬除蟲菊酯農(nóng)藥殘留量的方法，通過對分析條件的優(yōu)化，發(fā)現(xiàn)流動(dòng)相體系對分析檢測的靈敏度影響非常大；采用LC-MS/MS法最常用的乙腈-水流動(dòng)相體系，氯菊酯和溴氰菊酯的靈敏度低，甲氰菊酯、氯氰菊酯和氟胺氰菊酯未檢出；而采用V甲醇∶V水∶V乙酸銨=98∶2∶0.1混合液作流動(dòng)相時(shí)，氯菊酯、甲氰菊酯、氯氰菊酯、氟胺氰菊酯和溴氰菊酯的檢出限可低至0.000 5～0.005 0 mg/kg，色譜峰形好，平均加標(biāo)回收率、RSD等符合大量樣品快速檢測的要求。廖雅樺等［72］采用凝膠滲透色譜-高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定了煙草中包含氟胺氰菊酯、溴氰菊酯、氯菊酯、甲氰菊酯、氯氰菊酯5種擬除蟲菊酯在內(nèi)的50種農(nóng)藥殘留量；HPLC分析的流動(dòng)相為V甲醇∶V水∶V乙酸=98∶2∶0.002，擬除蟲菊酯類農(nóng)藥的檢測限為0.007～0.010 mg/kg，加標(biāo)回收率為85%～108.5%，RSD為2.5%～10%。周曉峰［73］采用高效液相色譜-線性離子阱-靜電場軌道阱組合式高分辨質(zhì)譜測定了包含高效氯氟氰菊酯在內(nèi)的6種農(nóng)藥在煙草中的殘留量，高效氯氟氰菊酯的檢測限為0.002 mg/kg，加標(biāo)回收率為76.4%～95.1%，RSD為7.6%～9.0%。從現(xiàn)有文獻(xiàn)報(bào)道看，LC-MS/MS法檢測的煙草中擬除蟲菊酯的種類不足以包含煙草中需要檢測的種類，因此該方法的推廣應(yīng)用受到制約。

2.6 煙草中擬除蟲菊酯的其他分析方法

除了上述分析檢測方法外，對煙草中擬除蟲菊酯農(nóng)藥殘留的分析還有免疫分析法［74］、生物測定法［75］、電化學(xué)傳感器法［76］、薄層色譜法［77］等。如劉媛等［74］研究了酶聯(lián)免疫吸附分析法（Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）在煙草中高效氯氟氰菊酯殘留分析中的應(yīng)用情況，建立了加標(biāo)基質(zhì)液的ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)曲線，對50個(gè)施藥后的烤煙煙草樣品同時(shí)采用ELISA法和氣相色譜法（具體為GC-ECD）進(jìn)行對比分析，結(jié)果表明，ELISA法檢測樣本陽性檢出率為34%，而GC-ECD法的檢出率為22%。與GC法相比，盡管ELISA法的假陽性率為12%，但是其假陰性率為0，所以該方法常應(yīng)用于進(jìn)行大量煙草樣本中氯氟氰菊酯殘留量的快速篩查。Apostolou等［76］采用電化學(xué)生物傳感器檢測煙草樣品中擬除蟲菊酯，發(fā)現(xiàn)該生物傳感器能夠不受煙堿和煙葉其他生物堿的影響，煙草中低至1.5 mg/kg的氯氰菊酯均可檢出。

3 展望

綜上所述，對煙草中擬除蟲菊酯類農(nóng)藥的檢測已經(jīng)發(fā)展了較多的方法和技術(shù)，其中以GC-ECD法應(yīng)用最為廣泛，GC-MS/MS和GC-MS法的應(yīng)用也有一定量的文獻(xiàn)報(bào)道，HPLC和LC-MS/MS法的文獻(xiàn)報(bào)道較少。整體上，HPLC和LC-MS/MS法的檢測靈敏度不高，影響了其應(yīng)用范圍。盡管GC-MS/MS法的靈敏度較好，但儀器價(jià)格相對較高，限制了其推廣應(yīng)用。免疫分析法、生物測定法、電化學(xué)傳感器法、高效毛細(xì)管電泳法等一些新興的檢測方法，體現(xiàn)了較好的開發(fā)前景，但還需要進(jìn)一步優(yōu)化。

結(jié)合目前煙草中擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留量檢測的現(xiàn)狀，提出今后研究的方向：一是開發(fā)新的擬除蟲菊酯類農(nóng)藥的檢測方法。為適應(yīng)煙草病蟲害防治情況的變化，一些新型的擬除蟲菊酯類農(nóng)藥也不斷開發(fā)出來，因此對于新型農(nóng)藥檢測方法的研究仍需要持續(xù)進(jìn)行；二是目前廣泛采用的GC-ECD法中，仍然存在樣品分析時(shí)間長、干擾因素多等問題，持續(xù)不斷地對樣品前處理技術(shù)進(jìn)行優(yōu)化，尚有很大的挖掘空間；三是針對LC-MS/MS法中擬除蟲菊酯類農(nóng)藥靈敏度低的問題，進(jìn)一步提高儀器性能并優(yōu)化分析參數(shù)，從而實(shí)現(xiàn)包含擬除蟲菊酯在內(nèi)的煙草中多種農(nóng)藥的同時(shí)分析；四是加大對免疫分析、傳感器技術(shù)、芯片技術(shù)以及分子印跡技術(shù)等一批新型技術(shù)的開發(fā)力度，實(shí)現(xiàn)煙草中痕量農(nóng)藥的高通量快速檢測。