王窕 俸一然 劉晗 晏文娟 陸蕾

摘要：目的 對復(fù)褥方進(jìn)行大鼠皮膚刺激性試驗(yàn)并對大鼠壓瘡創(chuàng)面的局部病理改變進(jìn)行觀察，評估其安全性。方法 （1）將大鼠隨機(jī)分為完整皮膚組和破損皮膚組，分別進(jìn)行一次和多次給藥的皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)，觀察去除藥物后大鼠的皮膚反應(yīng)情況。（2）將大鼠隨機(jī)分為4組，即正常組（A組）、模型組（B組）、紫蓮膏組（C組）、復(fù)褥方組（D組），除正常組外，其余3組制作大鼠壓瘡模型。造模成功后，在常規(guī)處理的基礎(chǔ)上，C組創(chuàng)面再涂紫蓮膏，D組創(chuàng)面再涂復(fù)褥方。每天2次，連續(xù)10 d。分別在給藥后第0、3、7、10 d后測量創(chuàng)面面積。末次給藥后處死大鼠，取創(chuàng)面組織進(jìn)行HE染色。結(jié)果 （1）復(fù)褥方一次給藥對完整皮膚組無刺激，均未出現(xiàn)紅斑、水腫等現(xiàn)象，對破損皮膚組去藥1 h后有輕微刺激，表現(xiàn)為皮膚的輕微水腫，可自行消退，未再出現(xiàn)損傷現(xiàn)象。復(fù)褥方多次給藥對完整皮膚組、破損皮膚組均無刺激等現(xiàn)象。（2）與B組相比較，C組、D組創(chuàng)面面積均顯著縮?。≒<0.01）;C組與D組比較，D組縮小面積優(yōu)于C組（P<0.05）;C組和D組HE染色結(jié)果顯示炎性浸潤程度明顯減輕，新生肉芽組織明顯增多;C組與D組比較，D組炎性浸潤明顯減輕，新生肉芽組織明顯增多。結(jié)論 （1）復(fù)褥方單次使用對大鼠完整皮膚無刺激，對破損皮膚有輕微刺激，24h可自行消退;多次使用對大鼠完整皮膚、破損皮膚均無刺激，有較好的安全性。（2）復(fù)褥方具有促進(jìn)大鼠壓瘡創(chuàng)面愈合和抗炎的作用，這可能是復(fù)褥方治療大鼠壓瘡的機(jī)制之一。

關(guān)鍵詞：復(fù)褥方;大鼠;皮膚刺激性;壓瘡創(chuàng)面;病理改變

中圖分類號：R285.5 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號：1007-2349（2022）04-0054-06

Observation on Local Pathological Changes of Skin Irritation and Pressure Ulcer Woundsin Rats by Compound Decubitus Prescription

WANG Tiao， FENG Yi-ran， LIN Han， YAN Wen-juan， LU Lei

（The First Affiliated Hospital of Kunming Medical University， Kunming 650032， China）

【Abstract】Objective： To make a skin irritation test of Compound Decubitus Prescription in rats and observe the local pathological changes of the pressure ulcer wounds in rats， and to evaluate its safety and efficacy. Methods： （1） The rats were randomly divided into an intact skin group and a damaged skin group. Skin irritation experiments were carried out for one and multiple administration respectively， and the skin reaction of the rats after removing the drug was observed. （2） The rats were randomly divided into 4 groups， namely， normal group （group A）， model group （group B）， purple lotus paste group （group C）， and Compound Decubitus Prescription group （group D）. The other three groups were used to make pressure ulcer models in rats. After successful modeling and on the basis of routine treatment， the wounds of group C were re-applied with purple lotus paste， and the wounds of group D were re-applied with Compound Decubitus Prescription， twice a day for 10 consecutive days. The wound area was measured at the 0， 3rd， 7th and 10th days after administration respectively. The rats were sacrificed after the last administration and their wound tissue was collected for HE staining. Results： （1） The Compound Decubitus Prescription group did not irritate the intact skin at one-time administration and no erythema and edema occurred. In the damaged skin group， there was slight irritation one hour after the drug was removed. No further damage occurred. The repeated administration of Compound Decubitus Prescription did not cause irritation to the intact skin group and the damaged skin group. （2） Compared with that of group B， the wound area of group C and group D was significantly reduced （P<0.01）; compared between group C and group D， the reduced area of group D was better than that of group C （P<0.05）. The results of HE staining in group C and group D showed that the degree of inflammatory infiltration was significantly reduced， and the new granulation tissue was significantly increased; compared with that in group C， the inflammatory infiltration in group D was significantly reduced， and the new granulation tissue was significantly increased. Conclusion： （1） The one-time use of Compound Decubitus Prescription has no irritation to the intact skin of rats， but has a slight irritation to the damaged skin， and it can subside on its own within 24 hours. The repeated use has no irritation to the intact skin and damaged skin of rats， with good effect and safety. （2） Compound Decubitus Prescription has the effect of promoting wound healing and anti-inflammatory effect of pressure ulcers in rats， which may be one of the mechanisms of Compound Decubitus Prescription in treating pressure ulcers in rats.

【Key words】Compound Decubitus Prescription; Rats; Skin Irritation; Pressure Ulcer Wounds; Pathological Changes

科室自研制劑復(fù)褥方由黃連、紫草、黃柏、生地、當(dāng)歸、血竭、青黛等藥物組成[1-7]，用于臨床壓瘡的治療效果良好[8]。為進(jìn)一步臨床推廣使用，筆者設(shè)計(jì)了復(fù)褥方對大鼠皮膚刺激性及壓瘡創(chuàng)面的實(shí)驗(yàn)研究，觀察其局部給藥后對皮膚的刺激性及壓瘡創(chuàng)面局部的病理改變，為臨床用藥提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和理論依據(jù)?，F(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 藥品 復(fù)褥方，由昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院制劑室提供。

1.2 動物及試劑 SD清潔級大鼠，72只，體重320～350 g，平均體重（300±20）g，雌雄各半，由昆明醫(yī)科大學(xué)動物中心提供，動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（滇）k2015-0002。主要實(shí)驗(yàn)試劑Sigma H3136的蘇木素、Sigma 230251的伊紅。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 皮膚刺激性試驗(yàn) 健康SD清潔級大鼠32只，常規(guī)飼養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為4組，即完整皮膚組與破損皮膚組各2組，每組8只。給藥24h前，將大鼠背部脊柱兩側(cè)皮毛用脫毛劑脫毛，面積每側(cè)約5 cm×5 cm，去毛部位無皮膚損傷[9]。破損皮膚組的制作：大鼠脫毛區(qū)消毒，并用手術(shù)刀作#字狀劃破皮膚，刺傷表皮，不傷真皮，以滲血為度[10]。

1.3.1.1 一次性給藥實(shí)驗(yàn)[11-12] 各取一組完整皮膚與破損皮膚組大鼠，將復(fù)褥方0.5 mL涂于每只大鼠左側(cè)脫毛區(qū)，覆蓋1層蠟紙和2層消毒紗布，用無刺激性紗布、膠布固定，右側(cè)脫毛區(qū)為對照區(qū)域。4h后用棉簽蘸生理鹽水輕柔洗凈藥物，觀察去除藥物后1、24、48、72 h大鼠皮膚刺激情況，參考相關(guān)文獻(xiàn)[13]，使用表1計(jì)算半定量評分，表2評估皮膚刺激程度。

1.3.1.2 多次給藥實(shí)驗(yàn)[14] 給藥步驟與一次給藥相同，更改頻率為每天給藥2次，連續(xù)7 d。同樣觀察及評估去除藥物后1、24、48、72 h大鼠皮膚刺激情況。

1.3.1.3 評分標(biāo)準(zhǔn) 根據(jù)中藥、天然藥物刺激性和溶血性研究的技術(shù)指導(dǎo)原則[15]，以紅斑、水腫等為評價指標(biāo)，如表1。刺激性分值=（紅斑反應(yīng)總分+水腫反應(yīng)總分）/每組動物數(shù)。根據(jù)刺激性分值判斷皮膚刺激性強(qiáng)度，如表2。

1.3.2 壓瘡創(chuàng)面病理改變

1.3.2.1 分組和動物造模 健康SD清潔級大鼠40只，常規(guī)飼養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為4組，即正常組、模型組、紫蓮膏組、復(fù)褥方組，每組10只。除正常組外，其余3組參照Peirce[16]、Wasserman等[17]體內(nèi)埋置鐵片加外用磁鐵加壓的造模方法制作大鼠壓瘡模型，以局部皮膚外觀和病理出現(xiàn)壓瘡病變?yōu)閴函從Ｐ蛷?fù)制成功。壓瘡面積為約2 cm×2 cm。

1.3.2.2 治療方法 模型組、紫蓮膏組、復(fù)褥方組采用2%碘酒及75%乙醇消毒壓瘡創(chuàng)面周圍皮膚，生理鹽水沖洗創(chuàng)面，干紗布塊擦干創(chuàng)面后，紫蓮膏組創(chuàng)面上涂滅菌的紫蓮膏0.5 mL，復(fù)褥方組創(chuàng)面上涂滅菌的復(fù)褥方0.5 mL。每天2次，連續(xù)10 d。分別在給藥后第0、3、7、10 d后測量創(chuàng)面面積。末次給藥后處死大鼠，取創(chuàng)面組織進(jìn)行HE染色觀察壓瘡創(chuàng)面肉芽組織生長及愈合情況。

1.3.2.3 觀察指標(biāo) 大鼠創(chuàng)面組織HE染色后病理切片鏡下觀察：

（1）創(chuàng)面修復(fù)面積。（2）成纖維細(xì)胞、白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞浸潤情況。（3）血管微結(jié)構(gòu)：血管內(nèi)膜增生、血管充血、血管周圍水腫。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用spss19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析處理。數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示;多個樣本均數(shù)之間比較采用單因素方差分析，不同時間點(diǎn)的比較采用重復(fù)測量方差分析，相關(guān)樣本先后比較采用t檢驗(yàn)。認(rèn)為P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 皮膚刺激實(shí)驗(yàn)

2.1.1 復(fù)褥方一次性給藥的刺激性實(shí)驗(yàn)結(jié)果 實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表3、圖1-2所示，復(fù)褥方一次性給藥對完整皮膚無紅斑、水腫等刺激表現(xiàn)，對去藥1 h后的破損皮膚表現(xiàn)為輕微刺激，部分皮膚可見輕微水腫，24 h自行消退。

2.1.2 復(fù)褥方多次給藥對大鼠皮膚的刺激性實(shí)驗(yàn)結(jié)果 實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表4、圖3-4所示，復(fù)褥方多次給藥對完整皮膚、破損皮膚均無紅斑、水腫等刺激。

2.2 壓瘡創(chuàng)面病理改變

2.2.1 復(fù)褥方對大鼠壓瘡創(chuàng)面面積的影響 實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表5、圖5所示，復(fù)褥方組在給藥后第3 d開始壓瘡創(chuàng)面面積顯著減少（P<0.01）;紫蓮膏組在第7 d開始創(chuàng)面面積顯著減少（P<0.05）。10 d后，復(fù)褥方組創(chuàng)面皮膚完整，皮膚顏色與實(shí)驗(yàn)前比較無顯著差別，紫蓮膏組創(chuàng)面仍有少量皮損，但與模型組相比創(chuàng)面明顯減小。

2.2.2 復(fù)褥方對大鼠壓瘡創(chuàng)面組織病理變化的影響 HE染色結(jié)果見表6～8及圖6，正常組表皮結(jié)構(gòu)完整，真皮層內(nèi)可見正常附屬器，結(jié)締組織間可見少量炎細(xì)胞浸潤。模型組鏡下顯示創(chuàng)面皮膚全層（表皮及真皮）壞死伴鈣化，未見肉芽組織。復(fù)褥方組鏡下顯示出現(xiàn)大量新生肉芽組織，炎性浸潤程度明顯減輕;紫蓮膏組鏡下顯示亦出現(xiàn)新生肉芽組織，炎性浸潤亦減輕，但與復(fù)褥方組相比，肉芽組織減少，炎細(xì)胞浸潤加重。

3 討論

壓瘡又稱壓力性潰瘍，由于身體局部長期受壓，組織持續(xù)性缺氧缺血，營養(yǎng)缺乏，皮膚失去正常功能，最終導(dǎo)致組織破損和壞死等一系列病變[18]。它在臨床上較為常見，常遷延難愈，不僅給患者造成痛苦，也會增加感染的風(fēng)險，并給護(hù)理工作帶來了困難。

在復(fù)褥方的方藥組成中黃連、黃柏具有清熱燥濕、瀉火解毒功效[19-20]。紫草具有為清熱涼血、解毒透疹之功效[21]。當(dāng)歸生肌斂瘡、排膿解毒[22]，青黛清熱瀉火、涼血解毒[23]，血竭活血化瘀、斂瘡生肌[24]。生地清營涼血[25]，諸藥合用，共奏清熱涼血，化瘀生新的功效，臨床上用于壓瘡等的治療，可促進(jìn)皮膚創(chuàng)面愈合，在我院臨床推廣使用后反饋良好[8]。

皮膚刺激性是外用制劑最常見的不良反應(yīng)，是皮膚接觸某些特定制劑后產(chǎn)生的局部可逆性損傷，皮膚刺激性試驗(yàn)是外用人類健康相關(guān)制劑評價的項(xiàng)目之一[26]。

本研究通過皮膚刺激性試驗(yàn)評價復(fù)褥方外用的安全性，通過復(fù)制大鼠壓瘡模型評價復(fù)褥方對大鼠壓瘡創(chuàng)面的修復(fù)效果，評價指標(biāo)主要為創(chuàng)面修復(fù)的面積和病理學(xué)變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，復(fù)褥方單次使用可能對皮膚有輕微刺激，但24h可自行消退，而復(fù)褥方的長期使用對皮膚無刺激。對于大鼠壓瘡創(chuàng)面，復(fù)褥方組壓瘡創(chuàng)面面積顯著減少，炎性浸潤程度明顯減輕，新生肉芽組織明顯增多。因此復(fù)褥方制劑皮膚給藥具有較好的安全性，同時具有促進(jìn)大鼠壓瘡創(chuàng)面愈合及抗炎的作用，這可能是復(fù)褥方治療大鼠壓瘡的機(jī)制之一，具體的機(jī)制需在今后的研究中進(jìn)行進(jìn)一步的觀察及評價。

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（收稿日期：2021-10-14）