劉澤端 磨立達(dá)

摘要：新型冠狀病毒肺炎（簡(jiǎn)稱(chēng)新冠肺炎）是由新型冠狀病毒 （2019-nCoV） 引起的一類(lèi)新型的急性傳染病。2019-nCoV抗體檢測(cè)作為診斷新冠肺炎的主要依據(jù)，可協(xié)同核酸診斷。本文綜述2019-nCoV抗體檢測(cè)在新冠肺炎診斷中的應(yīng)用進(jìn)展，為臨床應(yīng)用及進(jìn)一步研究提供參考。

關(guān)鍵詞：新型冠狀病毒;抗體檢測(cè);應(yīng)用進(jìn)展

【中圖分類(lèi)號(hào)】R511 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】1673-9026（2022）11--01

截止2022年3月，新型冠狀病毒肺炎波及全球各地，確診的總?cè)藬?shù)超過(guò)4.46億，我國(guó)積極采取了封城、隔離等防疫措施，取得了良好效果。衛(wèi)健委將2019-nCoV感染的肺炎納入傳染病防治法規(guī)定的乙類(lèi)傳染病，命名為“新型冠狀病毒肺炎（簡(jiǎn)稱(chēng)新冠肺炎）”，按甲類(lèi)傳染病管理，世界衛(wèi)生組織（WHO）在2020年3月將新冠肺炎正式命名為“Corona virus Disease 2019， COVID-19”，導(dǎo)致新冠肺炎疫情的病毒被命名為“2019 新型冠狀病毒（2019-nCoV）” [1]。

1.2019-nCoV抗體檢測(cè)的意義

目前，實(shí)驗(yàn)室將核酸檢測(cè)作為新冠肺炎診斷的一項(xiàng)“金標(biāo)準(zhǔn)”，但核酸檢測(cè)受標(biāo)本采集運(yùn)輸、標(biāo)本病毒含量、檢測(cè)試劑質(zhì)量等因素導(dǎo)致漏檢。由衛(wèi)健委發(fā)布《新型冠狀病毒肺炎診療指南（試行第七版）》[2]中，首次推薦將2019-nCoV抗體檢測(cè)作為診斷新冠肺炎的依據(jù)，檢測(cè)結(jié)果可以獲得機(jī)體近期或者以往是否感染過(guò)2019-nCoV。當(dāng)2019-nCoV侵入機(jī)體后，機(jī)體的免疫細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生特異性抗體，IgM抗體在急性感染后產(chǎn)生，親和力較低，持續(xù)的時(shí)間短，可提示是否處于急性感染或者近期感染;IgG抗體產(chǎn)生稍晚，有較強(qiáng)的親和力，維持時(shí)間長(zhǎng)，可提示曾感染2019-nCoV或者當(dāng)前為感染中后期;因兩種抗體產(chǎn)生的時(shí)間與峰值時(shí)間不一致，聯(lián)合檢測(cè)可以監(jiān)測(cè)患者整個(gè)疾病過(guò)程的抗體表達(dá)水平[3]。2019-nCoV核酸檢測(cè)使用樣本多為上呼吸道樣本，采集過(guò)程容易導(dǎo)致醫(yī)護(hù)人員被感染，而2019-nCoV的抗體檢測(cè)采用含病毒量低或不含病毒的血液作為檢測(cè)樣本，采集便捷、運(yùn)輸要求低、依賴(lài)設(shè)備少、樣本更穩(wěn)定、檢測(cè)耗時(shí)短，在保護(hù)醫(yī)護(hù)人員安全的同時(shí)也極大提高了臨床檢測(cè)的效率，是一個(gè)很好的檢測(cè)指標(biāo)[4]。

2.2019-nCoV抗體檢測(cè)方法

目前2019-nCoV抗體采用的技術(shù)主要有化學(xué)發(fā)光（CLIA）、膠體金免疫層析（GICA）、酶聯(lián)免疫分析（ELISA）以及熒光免疫層析（ICA）等檢測(cè)方法，每種方法都具有一定的優(yōu)勢(shì)，但試劑盒間的敏感度、特異度及一致性有一些差異[5]。指南[6]指出存在差異的原因有：①試劑盒選擇S蛋白和/或N蛋白為捕獲抗原，②待檢抗體選擇IgM、IgG、IgA等一種或多種抗體聯(lián)合檢測(cè)，③使用雙抗原夾心法、間接法、捕獲法等不同的檢測(cè)方法，④廠家的生產(chǎn)工藝及質(zhì)量等方面;此外，受自身ASO、補(bǔ)體、RF等內(nèi)源性物質(zhì)以及脂濁、標(biāo)本溶血、免疫交叉反應(yīng)、實(shí)驗(yàn)污染等外源性因素干擾，檢測(cè)結(jié)果會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性，同時(shí)，受抗體表達(dá)窗口期、試劑盒靈敏度、樣本保存、操作不當(dāng)、抗體反應(yīng)弱等導(dǎo)致結(jié)果假陰性。

2.1 CLIA

化學(xué)發(fā)光法目前以磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法較為普遍，是以磁微粒為載體，通過(guò)對(duì)被檢測(cè)物質(zhì)催化底物的發(fā)光強(qiáng)度進(jìn)行檢測(cè)，計(jì)算出濃度。磁性納米顆粒具有表面積大、分離富集能力好、易操控等特點(diǎn)，檢測(cè)敏感性較高。鄭培明等[7]指出：應(yīng)用化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)2019-nCoV中IgM、IgG抗體的敏感性分別為48%、56%，特異性均為100%。胡燕等[8]經(jīng)臨床研究得出：化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)2019-nCoV IgM、IgG抗體的敏感性分別為75.86%、90.52%，特異性分別為99.42%、98.84%，準(zhǔn)確性分別為96.86%、96.75%。CLIA結(jié)果穩(wěn)定、自動(dòng)化檢測(cè)程度高，能夠?qū)贵w進(jìn)行定量檢測(cè)，但需要配套的檢測(cè)設(shè)備，臨床使用受限于設(shè)備的普及程度，基層醫(yī)院少見(jiàn)，常見(jiàn)于需要定量檢測(cè)、監(jiān)測(cè)抗體水平的變化情況的醫(yī)療機(jī)構(gòu)[9]。

2.2 GICA

膠體金免疫層析技術(shù)是特異性抗體與膠體金標(biāo)記的抗原形成免疫復(fù)合物，在檢測(cè)區(qū)被包被的抗體捕獲形成一條肉眼可見(jiàn)的紅色條帶。檢測(cè)使用10uL的全血、血清或血漿樣本，15min便可觀察結(jié)果，如檢測(cè)線（T）與質(zhì)控線（C）出現(xiàn)條帶，結(jié)果為陽(yáng)性，如僅C出現(xiàn)條帶，結(jié)果為陰性 [10]。鄧杰倫等[11]采用GICA檢測(cè)血清內(nèi)的2019-nCoV IgM抗體，靈敏度與特異度分別是50%、90.91%。李暉等[12]采用GICA檢測(cè)血清內(nèi)的2019-nCoV IgM、IgG靈敏度為 78.7%、73.0%，特異度分別為98.2%、99.3%。羅雪蓮等[13]指出：GICA無(wú)需專(zhuān)用儀器、無(wú)需特殊培訓(xùn)、檢測(cè)結(jié)果直觀，具有操作簡(jiǎn)便、快速、經(jīng)濟(jì)、實(shí)用性強(qiáng)等特點(diǎn)，但是檢測(cè)結(jié)果容易受到環(huán)境、標(biāo)本質(zhì)量、視覺(jué)判定、試劑批間差異等因素影響，適合人力資源不足、資金有限、缺乏專(zhuān)業(yè)檢測(cè)儀器的基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)，無(wú)需設(shè)備便可以對(duì)無(wú)癥狀感染或者疑似患者開(kāi)展檢測(cè)。

2.3 ELISA

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)指的是選用包被于聚苯乙烯等固相載體上的可溶性的抗原或抗體，將其與待測(cè)抗體及酶標(biāo)記的抗體/抗原特異性結(jié)合形成三元復(fù)合物，根據(jù)酶催化底物產(chǎn)生吸光度變化得到結(jié)果[14]。李德昌等[15]研究?jī)煞NELISA試劑盒靈敏度和特異度分別為87.7%，70.1%和特異度分別為83.9%，89.2%。吳重陽(yáng)等[16]研究ELISA檢測(cè)2019-nCoV IgM和IgG抗體的靈敏度分別為55.26%、60.53%，特異度均為97.67%。ELISA對(duì)實(shí)驗(yàn)室操作、儀器配置要求相對(duì)較低，能夠同時(shí)用于多個(gè)樣品檢測(cè)，但是檢測(cè)速度慢，步驟繁瑣、干擾因素較多，目前大型醫(yī)療機(jī)構(gòu)使用較少，常見(jiàn)于基層醫(yī)院[17]。

2.4 ICA

熒光免疫層析技術(shù)具有敏感度高、穩(wěn)定性好、受自然熒光干擾低等優(yōu)點(diǎn)。徐云云等[18]采用ICA檢測(cè)2019-nCoV IgM 抗體的靈敏度為88.75%，特異度為96%。薛雄燕等[19]檢測(cè)2019-nCoV總抗體的陽(yáng)性樣本符合率為90.9%，陰性標(biāo)本符合率為100%。熒光免疫層析技術(shù)不僅有效的延續(xù)了傳統(tǒng)膠體金免疫層析技術(shù)無(wú)需對(duì)樣本進(jìn)行特殊處理的優(yōu)點(diǎn)，因此檢測(cè)過(guò)程中所需的樣本數(shù)量較少，同時(shí)還結(jié)合了熒光檢測(cè)技術(shù)具備的敏感度高的優(yōu)點(diǎn)，可見(jiàn)該技術(shù)在一定程度解決了膠體金免疫層析技術(shù)存在的弊端。免疫熒光層析法使用小型檢測(cè)設(shè)備，可實(shí)現(xiàn)床旁每日檢測(cè)，該法重復(fù)性、靈敏度優(yōu)于膠體金法，低于化學(xué)發(fā)光法，性能介于膠體金法和化學(xué)發(fā)光法之間。

3. 結(jié)語(yǔ)

綜上所述，2019-nCoV抗體檢測(cè)作為新冠肺炎診治的一個(gè)重要補(bǔ)充或協(xié)同檢測(cè)手段，較核酸檢測(cè)優(yōu)勢(shì)明顯，其打破了核酸檢測(cè)技術(shù)對(duì)場(chǎng)地和操作人員方面的限制，還有效降低醫(yī)護(hù)人員感染的風(fēng)險(xiǎn)。2019-nCoV抗體的檢測(cè)方法各有優(yōu)缺點(diǎn)，各級(jí)醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)可根據(jù)自身?xiàng)l件采購(gòu)相應(yīng)試劑，實(shí)現(xiàn)疑似患者快速準(zhǔn)確篩檢和確診的前移和下移，為疾病防控、疾病篩查及臨床診斷提供有利依據(jù)，有效減輕經(jīng)濟(jì)及社會(huì)負(fù)擔(dān)。此外，抗體檢測(cè)會(huì)受到各種因素干擾，提倡多技術(shù)相結(jié)合，加強(qiáng)科研攻關(guān)，取長(zhǎng)補(bǔ)短，增強(qiáng)實(shí)用性，提高疾病的快速明確診斷和鑒別診斷的能力。

參考文獻(xiàn)：

[1] 吳安華，黃勛，李春輝，等. 醫(yī)療機(jī)構(gòu)新型冠狀病毒肺炎防控中的若干問(wèn)題[J]. 中國(guó)感染控制雜志，2020，19（2）：99-104.

[2]中國(guó)國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì).新型冠狀病毒肺炎診療指南（試行第七版）[EB/OL].（2020-03-03）.

[3] 張園，周澤奇，王志賢，等. 新型冠狀病毒核酸、抗原和抗體聯(lián)合檢測(cè)的臨床價(jià)值討論[J]. 現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2020，35（5）：99-102，109.

[4] 袁夢(mèng)嬌，王蓓麗，潘柏申，等. 新型冠狀病毒抗體檢測(cè)及中和性抗體免疫治療研究進(jìn)展[J]. 中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2021，44（3）：265-269.

[5] Carter LJ， Garner LV， Smoot JW， et al. Assay Techniques and Test Development for COVID-19 Diagnosis. ACS Central Science. 2020 May;6（5）：591-605.

[6]中國(guó)醫(yī)院協(xié)會(huì)臨床微生物實(shí)驗(yàn)室專(zhuān)業(yè)委員會(huì)，徐英春，胡繼紅. 新型冠狀病毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)專(zhuān)家共識(shí)[J]. 協(xié)和醫(yī)學(xué)雜志，2021，12（1）：18-26.

[7]鄭培明，崔發(fā)財(cái)，張福明，等.新型冠狀病毒 Ig M 和 Ig G 抗體不同檢測(cè)方法在新型冠狀病毒感染中的臨床應(yīng)用評(píng)價(jià)[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2020，35（04）：291-294.

[8]胡燕，申鴿，李瓊，等. 2種SARS-CoV-2抗體檢測(cè)方法在COVID-19診斷中的價(jià)值[J]. 檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2020，35（12）：1294-1297.

[9]高原，陳川，王晶.2019 新型冠狀病毒抗原抗體檢測(cè)[J].計(jì)量學(xué)報(bào)，2020，41 （05）：513-517.

[10]Li X， Yin Y， Pang L， et al. Colloidal gold immunochromatographic assay （GICA） is an effective screening method for identifying detectable anti-SARS-CoV-2 neutralizing antibodies. Int J Infect Dis. 2021;108：483-486.

[11]鄧杰倫，王遠(yuǎn)芳，王婷婷，等.膠體金免疫層析法檢測(cè) 2019-nCoV 血清抗體的臨床價(jià)值探討[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2020，41（08）：964-966+970.

[12]李暉，李詠茵，張志高， 等.2019 新型冠狀病毒抗體膠體金檢測(cè)方法的建立與臨床性能評(píng)價(jià)[J].中華傳染病雜志，2020，38（3）：139-144.

[13]羅雪蓮，閆梅英，吳媛，等.新型冠狀病毒血清學(xué)抗體檢測(cè)試劑盒現(xiàn)狀分析[J/OL].疾病監(jiān)測(cè)：1-11[2021-01-21].

[14]李家俊，鄭瀟，盛杰，等.新型冠狀病毒及其臨床檢測(cè)方法研究進(jìn)展[J/OL].生物技術(shù)通報(bào)：1-10[2021-01-15].

[15]李德昌，張明霞，林大川，等. 新型冠狀病毒ELISA試劑盒靈敏度和特異度評(píng)價(jià)[J]. 深圳大學(xué)學(xué)報(bào)（理工版），2020，37（3）：224-226.

[16]吳重陽(yáng)，敖科萍，王遠(yuǎn)芳，等. 膠體金法與ELISA檢測(cè)新型冠狀病毒IgM和IgG抗體的臨床診斷價(jià)值比較[J]. 國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2021，42（7）：824-827.

[17]邱峰，王慧君，張子康，等. 新型冠狀病毒SARS-CoV-2的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)[J]. 南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2020，40（2）：164-167.

[18]徐云云，李宗光，劉海燕，等.兩種方法檢測(cè)新型冠狀病毒肺炎特異性 Ig M 抗體比較分析[J].重慶醫(yī)學(xué)，2020，49（17）：2798-2801.

[19]薛雄燕，朱嫦琳，黃少珍，等. 血液樣本滅活處理對(duì)三種SARS-CoV-2抗體檢測(cè)方法結(jié)果的影響[J]. 南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2020，40（3）：316-320.

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