瞿莉

【摘要】目的 探討化學(xué)發(fā)光微粒子免疫法（CMIA）、甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn) （TRUST） 和梅毒螺旋體明膠凝集試驗(yàn) （TPPA） 在中老年女性梅毒檢測(cè)中的運(yùn)用價(jià)值。方法 選取2021年6月至2022年2月在南京市婦幼保健院進(jìn)行梅毒檢測(cè)的40歲以上女性人群107例為研究對(duì)象，用CMIA作為梅毒篩查方法，對(duì)梅毒陽(yáng)性標(biāo)本用TRUST和TPPA方法進(jìn)一步復(fù)查。結(jié)果 CMIA檢出 105 例梅毒陽(yáng)性標(biāo)本， TPPA確證陽(yáng)性 96 例， 陽(yáng)性符合率為 91.43% （96/105） ；其中31 例TRUST陽(yáng)性， 且TPPA確證試驗(yàn)均為陽(yáng)性； 76 例TRUST陰性， TPPA確證 67 例陽(yáng)性， 9 例為陰性。結(jié)論 CMIA初篩中老年女性梅毒檢測(cè)中存在著一定比例的假陽(yáng)性， CMIA初篩陽(yáng)性標(biāo)本第一步應(yīng)做TRUST驗(yàn)證， 然后再進(jìn)一步用TPPA金標(biāo)準(zhǔn)確證， 以降低梅毒的誤診率和醫(yī)患糾紛。

【關(guān)鍵詞】化學(xué)發(fā)光微粒子免疫法（CMIA）；甲苯胺紅不加熱試驗(yàn)（TRUST）；梅毒螺旋體明膠凝集試驗(yàn)（TPPA）；梅毒

Analysis of syphilis test results in middle-aged and elderly women

QU Li

Maternity Hospital affiliated to Nanjing Medical University （Nanjing Maternal and Child Health Care Hospital）， Nanjing， Jiangsu 210004， China【Abstract】Objective To investigate the application value of CMIA combined with treponema pallidum red unheated serum test （TRUST） and treponema pallidum gelatine agglutination test （TPPA） in the detection of syphilis in middle-aged and elderly women.Methods Selection in June 2021 to February 2022 in nanjing maternity and child health care hospital for syphilis detection of female population aged over 40 107 cases as the research object，CMIA for syphilis screening method，The positive specimens were further examined by TRUST and TPPA.Results CMIA detected 105 syphilis positive specimens， TPPA confirmed positive 96 cases， positive coincidence rate was 91.43% （96/105）. Among them， 31 cases were positive for TRUST and TPPA confirmatory test.TRUST was negative in 76 cases， TPPA confirmed positive in 67 cases and negative in 9 cases.Conclusions CMIA screening of syphilis in the middle-aged and old women syphilis detection there is a certain proportion of false positive results，CMIA positive specimens should be verified by TRUST in the first step， and then confirmed by TPPA gold standard to reduce the misdiagnosis rate of syphilis and doctor-patient disputes.

【Key Words】Syphilis； Chemiluminescence microparticle immunoassay（CMIA）； Toluidine red unheated test （TRUST）； Treponema pallidum gelatin agglutination test （TPPA）

近年來(lái)梅毒在我國(guó)各地飛速增長(zhǎng)，已然成為報(bào)告病例總數(shù)最多的性病。梅毒是人類特有的疾病，絕大部分由性接觸傳播，傳染危險(xiǎn)性極強(qiáng)，危害嚴(yán)重性較重，是傳染病防控的重中之重[5]。隨著社會(huì)理念的改觀和生活水平的改善，梅毒已經(jīng)不是男性朋友的專利，女性感染梅毒的病例比重?cái)?shù)也在日益增加。尤其是在40歲以上的中老年女性當(dāng)中，陽(yáng)性人數(shù)呈現(xiàn)增長(zhǎng)趨勢(shì)。南京市婦幼保健院為本地區(qū)最大的三級(jí)甲等婦幼保健院，肩負(fù)著本區(qū)域70%以上女性健康安全保健工作。本研究統(tǒng)計(jì)分析近半年來(lái)在南京市婦幼保健院就診的40～80歲中老年女性患者的梅毒抗體檢測(cè)結(jié)果，對(duì)比分析目前實(shí)驗(yàn)室最常用的三種梅毒血清學(xué)檢查方法，包括化學(xué)發(fā)光微粒子免疫法（CMIA）、甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn) （TRUST）和梅毒螺旋體明膠凝集試驗(yàn)（TPPA），探求不同梅毒血清學(xué)檢查方法在中老年女性病例中的應(yīng)用分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1.1 一般資料

選取2021年6月至2022年2月在南京市婦幼保健院進(jìn)行梅毒檢測(cè)的人群107例為研究對(duì)象，其均為40歲以上女性患者，平均年齡為 50.13歲。

1.2儀器和試劑

儀器：ARCHITECT 全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)儀（美國(guó)雅培公司生產(chǎn)）；恒溫箱為新苗三用恒溫水箱，其型號(hào)為H.SWX-600BS；生物安全柜型號(hào)為ESCO-A2型。所用儀器設(shè)備的檢測(cè)性能均能滿足實(shí)驗(yàn)要求。

試劑：CMIA是由美國(guó)雅培原裝進(jìn)口的配套試劑；TRUST是英科新創(chuàng)（廈門）科技有限公司生產(chǎn)的梅毒甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)診斷試劑盒；TPPA是由日本富士瑞必歐株式會(huì)社體外診斷用醫(yī)藥品梅毒螺旋體抗體診斷試劑。上述試劑盒均在有效期內(nèi)。

1.3方法

患者均于清晨采集靜脈血至少2ml，采血前避免劇烈運(yùn)動(dòng)，采集完成進(jìn)行離心后取上清液進(jìn)行檢測(cè)，分別利用化學(xué)發(fā)光微粒子免疫法（CMIA）、甲苯胺紅不加熱試驗(yàn)（TRUST）和梅毒螺旋體明膠凝集試驗(yàn)（TPPA）進(jìn)行檢測(cè)，所有檢測(cè)遵循試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。

1.4觀察指標(biāo)

以TPPA結(jié)果作為金標(biāo)準(zhǔn)，計(jì)算CMIA和TRUST的準(zhǔn)確率、靈敏度并進(jìn)行比較。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS25.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料采用（%）表示，進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料采用（χ±s）表示，進(jìn)行t檢驗(yàn)，P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

研究對(duì)象經(jīng)TPPA檢測(cè)出 98例陽(yáng)性，9例陰性。CMIA檢出 105例陽(yáng)性，2例陰性，陽(yáng)性率為98.13%；TRUST檢測(cè)出陽(yáng)性31例，陰性76例，陽(yáng)性率28.97% 。CMIA檢測(cè)的準(zhǔn)確率89.72%，靈敏度97.96% ；TRUST檢測(cè)的準(zhǔn)確率37.38%，靈敏度31.63%，詳細(xì)數(shù)據(jù)見表1、表2。

人體感染梅毒后，會(huì)產(chǎn)生一類特異性抗體和另一類針對(duì)類脂質(zhì)的非特異性抗體。除感染梅毒之外，患另外一些疾病如風(fēng)濕性心臟病、鉤端螺旋體病等，體內(nèi)也可能產(chǎn)生微量抗類脂質(zhì)抗體導(dǎo)致TRUST陽(yáng)性[6]。這些疾病均是中老年患者常見的內(nèi)科疾病，特別是伴有心腦血管疾病的中老年人，CMIA和TRUST同時(shí)出現(xiàn)假陽(yáng)性的情況有一定概率。目前實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)梅毒螺旋體抗體主要以血清學(xué)檢查為主。檢測(cè)特異性抗體常用的方法有TPPA、ECLIA和CMIA， 而TRUST為檢測(cè)非特異性抗體的常用方法。TPPA是在明膠粒子上包被著Nichols 株的精制菌體，然后樣本中的特異性抗體與載體菌株結(jié)合，產(chǎn)生凝集反應(yīng)，從而評(píng)判抗體效價(jià)，檢測(cè)出TP值[1]。雖然TPPA檢測(cè)梅毒具有較高的可靠性和穩(wěn)定性， 但由于檢測(cè)耗費(fèi)較長(zhǎng)時(shí)間，手工操作流程繁瑣，試劑成本較高且在判定兩孔對(duì)比顏色時(shí)受主觀控制，因此不合適大批量的初篩試驗(yàn)。甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)（TRUST）的原理是該甲苯胺紅溶液試劑能與梅毒患者血清或血漿中的反應(yīng)素形成凝集反應(yīng)，試劑操作簡(jiǎn)易，成本較低，結(jié)果容易觀察，此試驗(yàn)可作為梅毒血清學(xué)快速檢測(cè)及臨床療效之參考[4]。TRUST是一種常用的梅毒非特異性抗體的血清學(xué)檢測(cè)方法[2].但是非特異性抗體在臨床上出現(xiàn)類似硬性下疳表征4周后才能檢出，對(duì)神經(jīng)性和潛伏期梅毒極不敏感，假陰性率較高而容易漏診。因此不適合作為梅毒的初篩試驗(yàn)，但在判斷病程和抗體滴度方面有重要應(yīng)用價(jià)值?；瘜W(xué)發(fā)光微粒子免疫法（CMIA）檢測(cè)是樣本與重組梅毒螺旋體抗原（TpN15、TpN17 和 TpN47）包被的微粒子和項(xiàng)目稀釋液結(jié)合，樣本中抗體與微粒子相互結(jié)合，沖洗。再加入標(biāo)記物標(biāo)記形成的抗體復(fù)合物再次沖洗后，最后與預(yù)激發(fā)液和激發(fā)液形成復(fù)合物，測(cè)量其發(fā)光值（RLUs）表示。ARCHITECT 系統(tǒng)根據(jù)各樣本和質(zhì)控品的 RLU 值與 Cutoff RLU 值得比值（S/CO）計(jì)算出ARCHITECT 梅毒螺旋體抗體檢測(cè)結(jié)果。CMIA明顯具有較高的準(zhǔn)確性和重復(fù)性，同時(shí)CMIA具有自動(dòng)化程度高、流程簡(jiǎn)易、時(shí)間較短、高穩(wěn)定性等優(yōu)點(diǎn)，可作為臨床實(shí)驗(yàn)室大批量檢測(cè)梅毒抗體的初篩方法[3]。

本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，研究對(duì)象經(jīng)TPPA檢測(cè)出 98例陽(yáng)性，9例陰性。CMIA檢出 105例陽(yáng)性，2例陰性，陽(yáng)性率為98.13%；TRUST檢測(cè)出陽(yáng)性31例，陰性76例，陽(yáng)性率28.97%。CMIA檢測(cè)的準(zhǔn)確率89.72% ，靈敏度97.96% ；TRUST檢測(cè)的準(zhǔn)確率37.38% ，靈敏度 31.63%。由此說(shuō)明，CMIA在中老年女性患者梅毒檢測(cè)中的準(zhǔn)確率和靈敏度遠(yuǎn)高于TRUST，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。說(shuō)明CMIA具有較高的梅毒螺旋體感染診斷應(yīng)用價(jià)值，適用于臨床檢測(cè)標(biāo)本的大規(guī)模篩查。但需注意的是，該檢測(cè)方法存在著一定比并例的假陽(yáng)性結(jié)果，比例多少主要取決于試劑盒的特異性、樣本完整性和篩查當(dāng)?shù)厝巳旱奶卣?，所以在ARCHITECT梅毒螺旋體抗體項(xiàng)目的檢測(cè)結(jié)果與臨床癥狀不符時(shí)，需要通過(guò)TRUST和TPPA來(lái)復(fù)查驗(yàn)證檢測(cè)結(jié)果，以降低假陽(yáng)性率。CMIA與TRUST、TPPA相比自動(dòng)化程度較高， 檢測(cè)流程簡(jiǎn)便 ，時(shí)間短并且手工環(huán)節(jié)更少，人工干擾因素較少，數(shù)據(jù)的重復(fù)性和一致性較高，結(jié)果數(shù)值具穩(wěn)定性，適用于基層大規(guī)模的標(biāo)本篩查，同時(shí)檢測(cè)結(jié)果也更易于留存。且實(shí)驗(yàn)過(guò)程中可將標(biāo)本處理對(duì)結(jié)果的影響降到最低[7]。標(biāo)本量比較少時(shí)推薦用TPPA法檢測(cè)，若為急診手術(shù)患者或用于大規(guī)模篩查的實(shí)驗(yàn)室，推薦用CMIA法檢測(cè)以確保檢驗(yàn)結(jié)果的及時(shí)性和可靠性。但CMIA作為初篩試驗(yàn)存在有一定的假陽(yáng)性，若對(duì)這些假陽(yáng)性結(jié)果不加以修正就隨意發(fā)出報(bào)告，容易導(dǎo)致醫(yī)患矛盾，并對(duì)患者和家屬也易造成無(wú)法挽回的傷害[8]。當(dāng)ARCHITECT梅毒螺旋體抗體項(xiàng)目的檢測(cè)結(jié)果與臨床癥狀不符時(shí)，為了指導(dǎo)臨床醫(yī)生正確判讀患者感染的真實(shí)情況，實(shí)驗(yàn)室需制訂CMIA檢查需要通過(guò)附加其他血清學(xué)檢測(cè)來(lái)驗(yàn)證檢測(cè)結(jié)果。對(duì)于我院這107例病例主要針對(duì)近半年來(lái)40歲以上女性研究對(duì)象，樣本總數(shù)較少且性別單一等方面限制了本次試驗(yàn)的完整性，這些不足之處會(huì)在以后的研究中加以改善及補(bǔ)充。需注意的是，不管何種檢測(cè)方法均無(wú)法百分之百確保樣本中包含的低量梅毒抗體，因此在梅毒感染初期或者潛伏期，如果已被懷疑為感染時(shí)，即使本試劑的判定結(jié)果為陰性，也要經(jīng)過(guò)一段時(shí)間再進(jìn)行檢查并與其他的檢查結(jié)果和臨床癥狀結(jié)合起來(lái)加以綜合判斷。因此任何時(shí)候取得的陰性結(jié)果都不能排除梅毒感染的可能性，需要結(jié)合其他信息進(jìn)行診斷。對(duì)于我院這107例病例，主要針對(duì)在我院門診、體檢和住院的婦女，地區(qū)篩查特征性不足之處會(huì)在以后的研究中加以改善及補(bǔ)充。

綜上所述，梅毒是越早發(fā)現(xiàn)越好。凡有過(guò)高危性接觸者應(yīng)及早去醫(yī)院就診抽血檢查，為了獲得最佳治療診斷，最好重復(fù)進(jìn)行多次梅毒血清學(xué)檢查。在三種梅毒血清學(xué)檢查中，從試劑成本， 操作流程，結(jié)果判讀，數(shù)據(jù)保存，以及檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，靈敏度等方面綜合考慮，CMIA可作為大批量梅毒標(biāo)本篩查的理想檢測(cè)手段，用于梅毒螺旋體特異性抗體篩查試驗(yàn)有助于提高準(zhǔn)確性與陽(yáng)性檢出率，但允許一定的假陽(yáng)性率。在臨床試驗(yàn)中，為了提高檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確率， 必須輔以TPPA法對(duì)可疑標(biāo)本進(jìn)行二次確證復(fù)查[9]。CMIA初篩中老年女性梅毒檢測(cè)中存在著一定比例的假陽(yáng)性，CMIA初篩陽(yáng)性標(biāo)本第一步應(yīng)做TRUST驗(yàn)證，TRUST有相對(duì)較高特異性，可以指導(dǎo)臨床根據(jù)滴度對(duì)梅毒的治療效果進(jìn)行評(píng)價(jià)，然后再進(jìn)一步用TPPA金標(biāo)準(zhǔn)確證，以降低梅毒的誤診率和醫(yī)患糾紛。

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