TAZ蛋白在非小細胞肺癌中的表達及意義

周建宏　　張艷麗　　張利斌

[摘要] 目的 探討TAZ蛋白在非小細胞肺癌組織中的表達及意義。 方法 收集2010年6月～2013年1月在云南省第一人民醫(yī)院胸心外科手術切除且經病理確診的62例非小細胞肺癌組織為試驗組，以癌旁組織（距腫瘤緣>5 cm）和21例肺良性腫瘤組織為對照組，采用蛋白質印跡法（westem blot，WB）檢測TAZ蛋白表達情況并分析。 結果 蛋白質印跡法檢測到TAZ蛋白在非小細胞肺癌組織中的表達量高于癌旁及肺良性腫瘤組織，差異有統(tǒng)計學意義（P=0.000，0.008，P<0.05）。非小細胞肺癌患者TAZ蛋白表達在腫瘤大小及分化程度分組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P=0.036，0.011，P<0.05）。 結論 TAZ可能與非小細胞肺癌的發(fā)生、發(fā)展相關;TAZ可能成為預測肺癌預后的指標及治療靶點。

[關鍵詞] 轉錄共激活因子;蛋白質;非小細胞肺癌;蛋白質印跡法

[中圖分類號] R734? ? ? ? ? [文獻標識碼] B? ? ? ? ? [文章編號] 1673-9701（2022）17-0091-03

Expression and significance of TAZ protein in non-small cell lung cancer

ZHOU Jianhong1? ZHANG Yanli2? ?ZHANG Libin3

1.Department of Cardiothoracic Surgery， The People′s Hospital of Chuxiong Yi Autonomous Prefecture， Chuxiong 675000， China;2.Department of Anesthesiology， The People′s Hospital of Chuxiong Yi Autonomous Prefecture， Chuxiong 675000， China;3.Department of Thoracic Surgery， The First People′s Hospital of Yunnan Province， Kunming 650032， China

[Abstract] Objective To investigate the expression and significance of tafazzin （TAZ） protein in non-small cell lung cancer tissues. Methods A total of 62 cases of pathologically confirmed non-small cell lung cancer tissues were collected from June? 2010 to January， 2013 in the Department of cardiothoracic surgery of the first people′s Hospital of Yunnan Premoved in the thoracic and cardiac surgery were used as the experimental group， and the adjacent tissues （more than 5 cm away from the tumor edge） and 21 cases of benign lung tumor tissues were used as the control group. The expression of TAZ protein was detected and analyzed by western blotting （WB）. Results WB showed that the expression levels of TAZ protein in non-small cell lung cancer tissues were higher than those in adjacent tissues and benign lung tumor tissues（P=0.000/0.008， P<0.05），with statistically significant differences. There were statistically significant differences in the expression of TAZ protein for patients with non-small cell lung cancer among groups with varied tumor size or differentiation degree（P=0.036/0.011， P<0.05）. Conclusion TAZ may be related to the occurrence and development of non-small cell lung cancer; TAZ may be an index for predicting the prognosis of lung cancer and therapeutic target.

[Key words] Transcriptional coactivator; Protein; Non-small cell lung cancer; Western blotting

肺癌已成為全世界發(fā)病率和病死率最高的腫瘤，非小細胞肺癌占約85%[1，2]，盡管手術、放化療、基因靶向治療、免疫治療有了很大的進步，但非小細胞肺癌仍是最具侵襲性的惡性腫瘤之一，5年生存率仍很低，因此發(fā)現(xiàn)新的肺癌分子標志物及治療靶點成為目前研究的一個熱點。TAZ是有PDZ結合域的轉錄輔激活物，作為Hippo信號通路下游的核心組件，在多種實體瘤中高表達，以致癌因子在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中起重要作用[3]。TAZ在肺癌、乳腺癌等多種癌癥中表達上調或過度激活，較高的TAZ水平或活性與較差的預后和較短的生存期相關[4-6]。本研究以62例經病理確診的NSCLC組織為試驗組，對照組采用距腫瘤邊緣>5 cm的癌旁組織及21例肺良性腫瘤（病變）組織，采用蛋白質印跡法（westem blot，WB）檢測TAZ蛋白表達并探討其臨床意義，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2010年6月～2013年1月在云南省第一人民醫(yī)院胸心外科接受手術切除的62例NSCLC患者臨床及病理資料，對照組采用距腫瘤邊緣>5 cm的癌旁組織及21例肺良性腫瘤（病變）組織。納入標準：①所有組織均經病理證實為NSCLC;②所有組織標本均在離體2 min內在液氮及-70 ℃冷藏;③術前未行放、化療、靶向藥物等抗腫瘤治療者;④臨床資料完整者。排除標準：①伴其他惡性腫瘤者;②伴心、肝、腎等重要臟器嚴重損害者[7]。其中，男43例，女19例;平均年齡（58±10）歲;TNM分期采用第8版UICC（國際癌癥控制聯(lián)盟）肺癌階段分類[8]。本研究所用標本均得到患者的知情同意。

1.2 主要試劑

哺乳動物組織蛋白抽提掖（武漢博士德），預染Marker（fermentas），兔抗人β-actin抗體（abmart）、兔抗人TAZ抗體（cellsignaling technology），HRP標記驢抗兔IgG抗體、化學發(fā)光底物試劑盒（GE healthcare）。

1.3 方法

組織蛋白抽提掖提取組織總蛋白加入蛋白酶抑制劑，使終濃度至1 mmol/L，求得標準曲線并計算組織總蛋白濃度。蛋白變性后取總蛋白20 μg上樣，SDS-PAGE電泳90 min（5% 壓縮膠90伏電泳30 min，12%分離膠120 伏電泳 60 min），250毫安恒流濕轉1 h，NC膜用麗春紅染膜液染色，5%BSA液封閉90 min，0.1%TBST液漂洗5次每次4 min，5%BSA液（含0.1%TBST）稀釋兔抗人TAZ抗體（1∶1000）或兔抗人β-actin抗體（1：5000），4 ℃過夜后再次漂洗，5%BSA液（含0.1%TBST）稀釋HRP標記驢抗兔IgG抗體（1：8000），膜室溫溫育40 min后漂洗，化學發(fā)光底物試劑盒發(fā)光，暗盒曝光5～10 min后顯影及定影。利用Gel-Pro analyzer灰度分析軟件對泳道條帶膠片進行灰度分析（各樣本IOD值=各組織TAZ IOD值/相應組織β-actin IOD值）。

1.4 觀察指標

觀察TAZ蛋白在NSCLC、癌旁組織及肺良性腫瘤（病變）組織中的表達情況，并分析TAZ蛋白表達與NSCLC患者臨床病理因素（性別、年齡、吸煙史、病理類型、腫瘤大小、分化程度、p-TNM分期、淋巴結轉移）的關系。

1.5 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 20.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)處理，計量資料用[M（Q1，Q3）]表示，成組兩樣本比較采用Wilcoxon Mann-Whitney秩和檢驗，成組多樣本采用Kruskal-Wallis秩和檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 Western blot檢測TAZ蛋白表達水平

Western blot檢測到NSCLC患者癌組織中TAZ蛋白表達高于癌旁組織、肺良性腫瘤組織。見圖1。

2.2 Western blot檢測TAZ蛋白表達水平灰度分析

NSCLC患者癌組織、癌旁組織中TAZ蛋白IOD值為0.81（0.47，1.19）和0.41（0.21，0.71），癌組織TAZ蛋白表達量高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計學意義（P=0.000）;癌組織、肺良性腫瘤組織TAZ蛋白IOD值為0.81（0.47，1.19）和0.54（0.23，0.79），癌組織TAZ蛋白表達升高，差異具有統(tǒng)計學意義（P=0.008）。見表1。

2.3 NSCLC患者TAZ蛋白表達與臨床病理因素的關系

臨床病理因素分析顯示，NSCLC患者TAZ蛋白表達在腫瘤大小、分化程度分組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P=0.036，0.011）;在性別、年齡、吸煙史、病理類型、p-TNM分期、淋巴結轉移分組中比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。見表2。

3 討論

癌癥晚期癌細胞轉移、擴散成為患者死亡的主要原因，轉移患者已從靶向治療獲益生存期延長，但腫瘤轉移、擴散過程復雜，與腫瘤細胞微環(huán)境等相關，并受多種細胞信號通路調控[9]?；蛲蛔儭⑼蛔兗毎麗盒栽鲋?、惡性細胞遷移和侵襲成為惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展的過程，其復雜過程在不同因素、不同通路、不同階段中演化。盡管如此，有些腫瘤的發(fā)生、發(fā)展還是被特定的癌基因驅動[10]。TAZ是有PDZ結合域的轉錄輔激活物，與細胞增殖、凋亡調控和器官發(fā)育相關，通過第89位絲氨酸殘基磷酸化與細胞質中的14-3-3蛋白結合，去磷酸化后作為轉錄輔激活物易位細胞核中[11]，正常生理狀態(tài)下，TAZ蛋白在肺臟中表達量較高[3]，并在正常組織發(fā)育和穩(wěn)定細胞形態(tài)中發(fā)揮獨特的重要作用[12]。TAZ本質上是參與器官發(fā)育及大小控制、組織修復和再生的生理調節(jié)。其作為轉錄共刺激因子調節(jié)多種組織器官的穩(wěn)態(tài)。TAZ通過增加干細胞活性維持正常的組織穩(wěn)態(tài)，考慮到TAZ在癌細胞和正常組織中的復合體功能，雖然完全抑制TAZ在癌癥治療中可能有效，但存在破壞正常組織穩(wěn)態(tài)的風險。因此，TAZ抑制劑用于癌癥治療的發(fā)展值得高度重視。開發(fā)靶向TAZ及其特異性結合位點的選擇性抑制劑或激活劑就可能不會干擾正常的組織穩(wěn)態(tài)，并可能獲得理想的治療效果[13]。TAZ在腫瘤進展中具有一定的特征，TAZ在人類多種癌癥中均高表達，參與癌癥患者的腫瘤轉移并導致不良預后，提示TAZ是一種致癌調節(jié)劑。因此靶向治療過表達的TAZ可能是一種有前景的癌癥治療策略，然而TAZ持續(xù)失活可能導致組織穩(wěn)態(tài)控制失敗。當Hippo信號通路失活時，TAZ被去磷酸化并定位于細胞核內。TAZ與許多調控細胞增殖、分化、遷移、凋亡、衰老等生理轉錄因子相關，從而導致靶基因的轉錄激活[14-15]。由于TAZ有助于自我更新和潛能干細胞與許多癌癥的發(fā)生有關特征，TAZ被認為能更有效地控制癌癥，以TAZ為靶點的抗癌藥物的開發(fā)有望治療某些類型的癌癥，包括皮膚、乳房和肺癌[16]。

本實驗通過蛋白質印跡法檢測TAZ蛋白在非小細胞肺癌組織中的表達發(fā)現(xiàn)TAZ在癌組織中的表達量高于癌旁及肺良性腫瘤（病變）組織，表達量差異具有統(tǒng)計學意義。TAZ蛋白表達差異在腫瘤大小及分化程度分組中有統(tǒng)計學意義，表明TAZ與腫瘤進展及預后密切相關。本實驗結果與文獻報道相符合，但遺憾的是在腫瘤分期和淋巴結轉移分組中未發(fā)現(xiàn)差異，分析可能與惡性腫瘤發(fā)生過程是多因素、多通路、多階段的復雜過程及樣本量相對不足等相關。所以，本研究初步結論TAZ可能與非小細胞肺癌的發(fā)生、發(fā)展相關;TAZ可能成為預測非小細胞肺癌預后的指標、并為肺癌治療提供靶點。

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