王 琪,梅 俊,謝 晶*
(1 上海海洋大學(xué)食品學(xué)院 上海 201306 2 食品科學(xué)與工程國家級實驗教學(xué)示范中心(上海海洋大學(xué)) 上海 201306 3 上海水產(chǎn)品加工及貯藏工程技術(shù)中心(上海海洋大學(xué)) 上海 201306)
海鱸魚(Lateolabrax maculatus),屬硬骨魚綱、鱸形目、鱸魚種、鮨科,花鱸屬,是我國養(yǎng)殖海水鱸魚的主要品種[1]。活魚運輸時海鱸魚應(yīng)激性強,在保活運輸過程中受到環(huán)境脅迫會出現(xiàn)跳躍、撞擊、浮頭、側(cè)翻以及呼吸困難等行為,且其性兇猛、自身鱗片粗糙、背部鰭極其鋒利,極易造成個體間相互碰撞、引發(fā)機械損傷,從而使其生理代謝和免疫系統(tǒng)功能下降,導(dǎo)致運輸存活率較低[2],限制了活魚銷售的市場規(guī)模。目前對于大菱鲆[3]、石斑魚[4]、大西洋鱈魚[5]等魚類的?;钸\輸已有研究,而海鱸魚?;钸\輸?shù)难芯繄蟮垒^少。
在魚類?;钸\輸中,溫度是整個運輸過程中重要的條件之一,適宜的運輸溫度可以減少魚類對環(huán)境脅迫所引起的應(yīng)激反應(yīng)。目前研究表明,海鱸魚在低溫條件下會降低體內(nèi)酶的活性和新陳代謝速率,使其處于低溫休眠狀態(tài)后進行短途(8 h)無水?;钸\輸,可以提高魚的短途運輸存活率[6]。范秀萍等[7]在珍珠龍膽石斑魚的?;钸\輸中發(fā)現(xiàn),低溫有水運輸可以減緩石斑魚在環(huán)境脅迫誘發(fā)的應(yīng)激反應(yīng),降低體內(nèi)轉(zhuǎn)氨酶的活性和血液中的激素水平,延長保活運輸時間。為了實現(xiàn)海鱸魚長途運輸?shù)漠a(chǎn)業(yè)需求,本研究考察低溫長時間有水?;钸\輸對海鱸魚血液生化指標(biāo)和肌肉理化性質(zhì)的影響,以得出最佳有水?;罟に?,為海鱸魚的?;钸\輸提供參考。
海鱸魚,購自上海當(dāng)?shù)厮a(chǎn)品市場。挑選體質(zhì)健康、無外傷、大小基本一致,平均體長約(39±1)cm,平均體重約(500±120)g 的鮮活海鱸魚。
HS28A 全自動循環(huán)冷水機,廣東海利集團;LX-100VTR 模擬運輸振動臺,上海魯軒儀器設(shè)備廠;F2640 型多點溫度采集儀,美國Fluke 公司;Biophotometer RS-232 分光光度儀,德國EPPENDORF 公司;JPSJ-605F 溶解氧測定儀,上海儀電科學(xué)儀器股份有限公司;GL-200 氨氮檢測儀,山東格林凱瑞精密儀器有限公司;S230 電導(dǎo)率儀,梅特勒-托利多METTLER。
1.3.1 運輸條件對海鱸魚運輸存活率的影響
1.3.1.1 水溫對海鱸魚運輸存活率的影響 選取大小、呼吸頻率一致的海鱸魚,將其禁食暫養(yǎng)24 h 后以3 ℃/h 的降溫速率緩慢降溫至7 個運輸溫度(4,8,12,16,20,24,28 ℃),在鹽度15‰(海水鹽度)、溶解氧4~6 mg/L、pH 7.5~8.5、魚水比1∶10的條件下模擬運輸72 h,測定存活率。
1.3.1.2 鹽度對海鱸魚運輸存活率的影響 選取大小、呼吸頻率一致的海鱸魚,將其禁食暫養(yǎng)24 h 后以3 ℃/h 的降溫速率緩慢降溫至12 ℃,將海鱸魚轉(zhuǎn)移至7 個鹽度 (6‰,10‰,14‰,16‰,18‰,22‰,26‰)的水體中,在溶解氧4~6 mg/L、pH 7.5~8.5、魚水比1∶10 的條件下模擬運輸72 h,測定存活率。
1.3.1.3 密度對海鱸魚運輸存活率的影響 選取大小、呼吸頻率一致的海鱸魚,將其禁食暫養(yǎng)24 h 后以3 ℃/h 的降溫速率緩慢降溫至12 ℃,在鹽度16‰、溶解氧4~6 mg/L、pH 7.5~8.5 的條件下按照不同密度(魚水比分別為1∶2,1∶4,1∶6,1∶8,1∶10)模擬運輸72 h,測定存活率。
1.3.1.4 暫養(yǎng)時間對海鱸魚運輸存活率的影響選取大小、呼吸頻率一致的海鱸魚,分別暫養(yǎng)(0,12,24,36,48,60 h)后,以3 ℃/h 的降溫速率緩慢降溫至12 ℃,在鹽度16‰、魚水比1∶10~1∶8、溶解氧4~6 mg/L、pH 7.5~8.5 的條件下模擬運輸72 h,測定存活率。
1.3.2 海鱸魚的包裝與運輸 海鱸魚的禁食暫養(yǎng)時間為36 h,暫養(yǎng)期間魚水比1∶50,水溫20~22℃、鹽度16‰、溶解氧4~6 mg/L、pH 7.5~8.5。暫養(yǎng)后冷馴化,設(shè)置冷水機以3 ℃/h 速率將暫養(yǎng)池中水溫從20~22 ℃分別降至3 個運輸溫度12,16 ℃和20 ℃,在魚水比1∶10~1∶8、鹽度16‰的條件下將海鱸魚裝入塑料袋,然后曝氣機空氣曝氣、扎緊袋口,置于振動臺上的大保溫箱內(nèi),室內(nèi)曝氣模擬運輸72 h。以室溫下不運輸?shù)暮w|魚作為對照組。運輸過程[8]:B 級路面(80 km/h)1 h→A 級路面(100 km/h)3 h→B 級路面(80 km/h)1 h,分別在模擬運輸?shù)?2,24,36,48,60,72 h 和運輸結(jié)束恢復(fù)12 h 后隨機選取3 尾海鱸魚取樣,測定相關(guān)指標(biāo)。
1.4.1 水質(zhì)指標(biāo)測定 在運輸?shù)拿總€測試點用離心管取100 mL 運輸水體,測定水質(zhì)指標(biāo)。pH 值采用pH 計檢測;電導(dǎo)率采用電導(dǎo)率儀測定;總氨氮的測定采用納氏試劑法(GB 3097-1997 海水水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn));溶解氧使用溶解氧測定儀測定(單位為mg/L)。
1.4.2 血液生化指標(biāo)測定 取血方法:海鱸魚經(jīng)木棒敲擊致死,尾部靜脈取血后4 ℃靜置2 h,4℃,10 000 r/min 離心5 min,上清液即制備的血清,存放于-80 ℃冰箱,用于血液生化指標(biāo)的測定。
1.4.2.1 皮質(zhì)醇、應(yīng)激蛋白質(zhì)量濃度 采用魚皮質(zhì)醇(Cortisol,COR)和魚熱應(yīng)激蛋白(Heat shock proteins,HSP)ELISA 試劑盒(南京建成生物工程研究所)測定。
1.4.2.2 血糖、谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶和乳酸脫氫酶 分別采用葡萄糖(Glucose,GLU)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(Aspartate aminotransferase,AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(Alanine aminotransferase,ALT) 和乳酸脫氫酶(Lactate dehydrogenase,LDH)試劑盒(南京建成生物工程研究所)測定。
1.4.3 肌肉理化指標(biāo)測定 取背部肌肉,用蒸餾水沖洗干凈,濾紙吸干肌肉表面水分,用于肌肉指標(biāo)的測定。
1.4.3.1 總蛋白、乳酸和肌糖原 分別采用總蛋白(Total protein,TP)、乳酸(Lactate,LD)和糖原(Glycogen,Gly)試劑盒(南京建成生物工程研究所)測定。
1.4.3.2 質(zhì)構(gòu) 選取海鱸魚背部肌肉 (20 mm×15 mm×10 mm),用質(zhì)構(gòu)儀分析其硬度、彈性和咀嚼性。測試條件:測試前速率3 mm/s,測試速率1 mm/s,測試后速率1 mm/s;壓縮程度50%;停留間隔5 s;探針類型P/5。隨機挑選2 尾海鱸魚,每條魚取背部肌肉3 塊,每塊重復(fù)測量1 次,取平均值。
1.4.3.3 持水力 取5 g 魚肉塊(M,g),用濾紙包裹后置離心管中,6 000 r/min 離心5 min,瀝干表面水分稱量(m,g),重復(fù)3 次,取平均值。
1.4.3.4 pH 值 準(zhǔn)確稱量2 g 魚肉于燒杯中,加0.85%生理鹽水18 mL,均質(zhì)后5 000 r/min 離心2 min,上清液pH 值使用pH 計測定。
應(yīng)用SPSS 19.0 軟件對試驗數(shù)據(jù)進行處理,采用Origin 軟件作圖。
不同運輸條件對海鱸魚運輸存活率的影響見圖1。
圖1 溫度(a)、鹽度(b)、魚水比(c)和暫養(yǎng)時間(d)對海鱸魚運輸存活率的影響Fig.1 Effects of temperature (a),salinity (b),fish to water ratio (c) and temporary culture time (d)on transport survival rate of sea bass
水溫較高時魚體新陳代謝旺盛,容易產(chǎn)生有害代謝物;水溫過低時影響其生命活動相關(guān)酶的活性[9-10]。海鱸魚在溫度12 ℃的水中進行模擬運輸時,?;?2 h 的存活率為100%,即運輸成活率最高(圖1a)。4 ℃和28 ℃條件下運輸24 h 的存活率分別為20%和35%,出現(xiàn)大批量死亡,表明過高或過低的溫度均影響海鱸魚生命活動。水溫4~8 ℃時,海鱸魚新陳代謝較低,呼吸頻率較低,建議采用無水?;疃掏具\輸[6]。長途運輸?shù)倪m宜水溫為12~20 ℃,最佳運輸溫度為12 ℃。
當(dāng)鹽度過高或過低時,海鱸魚出現(xiàn)劇烈游動、撞擊、掙扎等應(yīng)激反應(yīng),若在此狀態(tài)下繼續(xù)模擬運輸,應(yīng)激程度超出海鱸魚機體所承受的閾值,機體發(fā)生咧腮死亡,說明海鱸魚對高鹽和低鹽的耐受力不強。用鹽度16‰的水體運輸,72 h 時存活率為98%,此時存活率最高(圖1b)。在鹽度為14‰和18‰時,模擬運輸,72 h 時存活率為95%。說明海鱸魚最佳運輸鹽度為16‰。
由圖1可知,模擬?;钸\輸至12 h 時,魚水比為1∶6,1∶8 和1∶10 的存活率均為100%。魚水比為1∶10 的運輸條件下模擬運輸至72 h,存活率為98%。運輸結(jié)束恢復(fù)12 h 后,存活率為95%(圖1c)。海鱸魚的運輸存活率隨魚水比的減小而升高。運輸結(jié)束后海鱸魚在新鮮海水中恢復(fù)時,有個體出現(xiàn)死亡,可能是因海鱸魚運輸過程中受到機械損傷,加劇其應(yīng)激反應(yīng),導(dǎo)致運輸存活率下降[2]。也可能是魚水比大,導(dǎo)致水體中的氨氮等代謝物過高,對魚鰓及肝臟造成不可逆損傷,導(dǎo)致魚類氨氮中毒而亡[11]。
由圖1可知,暫養(yǎng)時間從0 h 延長至36 h,海鱸魚的運輸存活率逐漸升高。暫養(yǎng)時間從36 h 延長至60 h 時,海鱸魚的運輸存活率開始逐漸下降,海鱸魚適宜的暫養(yǎng)時間為36 h(圖1d)。適當(dāng)延長暫養(yǎng)時間可以使海鱸魚排泄出體內(nèi)大量的代謝物質(zhì)[12],從而減緩后續(xù)運輸過程中水質(zhì)的惡化。暫養(yǎng)時間的過度延長,因禁食暫養(yǎng)而導(dǎo)致魚體能量攝入不足,機體免疫能力下降,存活率下降。
隨保活時間的延長,水質(zhì)逐漸惡化,海鱸魚在低溫運輸條件下對水體指標(biāo)的影響見圖2。
圖2 溫度對保活運輸水體中pH 值(a)、溶解氧(b)、總氨氮(c)與電導(dǎo)率(d)的影響Fig.2 Effects of temperature on pH value(a),dissolved oxygen (b),total ammonia nitrogen (c)and electrical conductivity (d) in water for keeping alive transportation
如圖2a 所示,整個?;钸\輸過程中,水體中的pH 值維持在7.4~8.0 之間,呈先降低后升高的趨勢。12 ℃與16 ℃組無顯著性變化(P>0.05)。
有研究表明,水體中的溶解氧是影響水產(chǎn)品新陳代謝中有氧代謝的主要限制因素[13]。隨著保活運輸時間的延長,溶解氧水平逐漸下降,?;钸\輸至72 h 時,水體中溶解氧在3.7~4.1 mg/L (圖2b)。Sun 等[14]研究表明大口黑鱸在溶解氧含量過低的環(huán)境下加速其肝臟的氧化應(yīng)激,甚至導(dǎo)致機體死亡。12 ℃組中水體溶解氧水平略高于其它兩組,無顯著性差異變化。
溫度作為影響魚類生命活動及代謝程度的最主要因素之一[7],與魚體代謝能力成正比。隨著?;顣r間的延長,魚體排泄物和其體表分泌的蛋白黏液增加,導(dǎo)致水體中氨氮水平過高,容易引起魚類氨氮中毒[15-16],由圖2c 可明顯看出隨著?;钸\輸時間的延長,水體中氨氮水平顯著升高。運輸72 h 后,12 ℃的水體中氨氮水平最低。
電導(dǎo)率主要反映水體中的離子濃度,12~20℃運輸條件下水體中電導(dǎo)率呈現(xiàn)緩慢上升趨勢(圖2d),且無顯著性差異。其中在20 ℃的水體中離子濃度增加的最快,說明溫度越高,保活運輸水體中的離子濃度越高,魚體的新陳代謝越快。
血液生化指標(biāo)的變化反映動物應(yīng)激程度。低溫?;钸\輸對海鱸魚COR、GLU、HSP、LDH、ALT和AST 的影響見表1。
12復(fù)恢ABf 192.33±5.31 Bc 216.66±7.03 BCb 204.33±4.64 Ab 3.56±0.04 Bb 3.06±0.01 Ch 1.43±0.01 Ab 232.66±2.05 Ab 259.16±1.43 Ab 261.66±3.09 Aa 273.36±5.92 Bg 934.97±7.76 Ch 706.47±2.81 Aa 50.33±1.24 BCa 53.83±1.31 Cb 59.07±0.89 Ab 106.17±1.43 Bb 97.6±1.97 Cbc 119.33±4.11化變的標(biāo)指化生清血、后前輸運活保下件條溫低在魚鱸海1表The changes of blood biochemical indexes of Lateolabrax maculatus before and after transportation at low temperatures Table 1 /h間時輸運活保別組72 60 48 36 24 12組照對Ag 348.33±18.73 Ac 267.66±9.39 Ae 216.33±2.86 Aef 197.67±6.18 Ad 236.17±9.05 Ab 288.06±3.01 a 165.67±8.58 12 ℃Af 317.06±16.17 Bf 299.33±6.18 Ab 198.33±6.94 Bd 261.66±2.05 Be 279.66±7.93 Bg 337.16±4.32 16 ℃Ae 338.33±4.78 Bd 306.66±5.43 Ab 210.66±10.62 Cc 288.66±5.73 Ce 324.06±3.65 Cf 365.03±7.84 20 ℃Ad 5.26±0.05 Af 6.92±0.05 Ag 7.84±0.03 Ae 6.17±0.01 Af 6.89±0.04 Ac 4.78±0.02 a 1.31±0.02 12 ℃Bc 4.51±0.02 Bh 6.14±0.04 Bg 7.06±0.01 Bf 6.47±0.02 Be 6.37±0.01 Bd 5.16±0.01 16 ℃Cg 1.66±0.08 Cf 1.95±0.01 Ce 3.24±0.04 Cd 7.86±0.01 Cc 5.24±0.03 Cb 5.58±0.01 20 ℃Ac 262.33±3.39 Ad 307.66±3.09 Ah 412.66±2.86 Ag 394.2±2.26 Af 381.33±2.05 Ae 329.33±2.49 a 223.33±7.93 12 ℃Bc 281.33±3.39 Bf 418.16±1.84 Bc 282.06±3.03 Be 402.66±3.29 Bf 425.33±4.02 Bd 352.33±2.62 16 ℃Bb 280.33±2.05 Cc 393.16±1.92 Cd 463.66±2.05 Ce 502.1±3.08 Bd 431.66±2.49 Cc 387.33±2.49 20 ℃Ac 582.80±4.85 Abc 530.25±0.73 Ac 552.38±1.75 Ab 422.30±1.68 Ac 636.19±3.72 Ab 529.66±4.64 a 283.07±5.62 12 ℃Bf 1147.92±29.53 Bb 481.66±3.08 Be 440.90±4.78 Bd 901.47±5.48 Bc 838.04±2.49 Ab 498.64±2.03 16 ℃Cg 891.94±2.86 Cf 723.36±3.33 Ce 1029.47±4.67 Cd 618.33±5.31 Cc 978.77±3.44 Bb 755.80±3.84 20 ℃Acd 66.5±1.77 Ab 62.66±1.24 Ad 72.26±5.34 Abc 65.34±2.86 Acd 67.07±1.55 Abc 64.07±0.74 a 51.83±0.84 12 ℃Ab 63.46±1.11 Ba 53.33±1.24 Bb 63.73±1.31 Bd 74.33±1.69 Ac 69.33±2.05 Ab 65.2±0.99 16 ℃Be 76.06±2.13 Ba 50.5±1.22 Cbc 59.66±1.69 Ac 62.06±0.73 Ad 65.33±1.24 Bb 59.17±0.85 20 ℃Ae 145.33±2.05 Af 178.33±1.69 Ab 106.17±0.62 Ac 116.2±2.35 Ae 146.26±0.89 Ad 140.33±1.24 a 91.71±2.10 12 ℃Af 150.66±3.09 Be 160.66±3.39 Bb 99.66±3.85 Bc 125.13±0.83 Bd 139.16±0.62 Bc 124.06±2.06 16 ℃Bf 161.66±2.86 Ce 150.66±4.49 Cc 124.06±0.89 Ab 115.66±2.05 Cd 132.66±4.10 Cb 115.3±2.87 20 ℃。同)。下(P<0.05著顯異差示表母字同不注標(biāo)標(biāo)上列一),同(P<0.05著顯異差示表母字同不注標(biāo)標(biāo)上行一”,同差準(zhǔn)標(biāo)±數(shù)均標(biāo)指-1 COR/ng·L-1·L GLU/mmol-1·L HSP/ng-1·L LDH/U-1·L ALT/U-1·L AST/U“平為示表據(jù):數(shù)注
當(dāng)魚類受到環(huán)境脅迫時會出現(xiàn)一系列應(yīng)激反應(yīng),首先是神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)作出初級反應(yīng),通過下丘腦-垂體-腎間組織軸促進腎上腺皮質(zhì)激素的合成及釋放,此時皮質(zhì)醇(COR)水平迅速上升[17],因此血清COR 水平常作為應(yīng)激反應(yīng)的靈敏指標(biāo)之一[18]。由表1可知,在整個?;钸\輸過程中,與對照組相比,隨著?;顣r間的延長,海鱸魚的血清COR 水平顯著升高(P<0.05),其中在運輸12 h 和72 h 后其血清COR 處于最高水平,可能是由于機體不適應(yīng)環(huán)境的改變以及運輸過程中的機械損傷誘發(fā)的應(yīng)激反應(yīng),這與Nie 等[3]和Vanderzwalmen等[19]的研究結(jié)果相一致。運輸結(jié)束恢復(fù)12 h 后,血清COR 顯著下降 (P<0.05),未恢復(fù)至對照組狀態(tài),可能是由于?;钸\輸結(jié)束后恢復(fù)時間太短,魚體應(yīng)激反應(yīng)未完全恢復(fù)[19]。劉驍?shù)萚20]研究團頭魴在無水保活條件下血清COR 水平顯著升高,?;罱Y(jié)束24 h 后未降至對照組狀態(tài),與本試驗結(jié)果相似。在12,16 ℃和20 ℃3 個處理組中,較高溫組的血清COR 水平顯著高于較低溫組(P<0.05),這可能是由于較高溫組的機體新陳代謝較旺盛,水質(zhì)惡化較快,對環(huán)境及水質(zhì)的敏感度較高,因此其COR 水平高于較低溫組[7]。有研究發(fā)現(xiàn)COR 的分泌能夠促進糖原的生成和脂肪的降解,釋放氨基酸、葡萄糖及脂肪酸,同時伴有能量的生成,供給機體能量的消耗,從而減緩魚類在環(huán)境脅迫誘導(dǎo)下的應(yīng)激反應(yīng)[21]。
魚類在出現(xiàn)應(yīng)激反應(yīng)時,可以通過糖異生作用提高體內(nèi)的葡萄糖(GLU)水平,從而維持體內(nèi)的GLU 平衡[22]。在保活運輸過程中,血清GLU 水平呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢,運輸結(jié)束恢復(fù)12 h后未回至對照組狀態(tài),其中溫度12 ℃下保活運輸結(jié)束恢復(fù)12 h 后的GLU 水平最高 (為對照組的2.72 倍),這可能是海鱸魚在較低溫條件下其代謝水平和能量消耗較低,從而導(dǎo)致血清GLU 處于較高的水平,也可能是由于在機體受到刺激后,COR水平升高,導(dǎo)致機體對葡萄糖的利用率下降[22],加之COR 的分泌促進糖原的生成,從而使其血液中GLU 水平升高。隨著保活時間的延長,12,16 ℃和20 ℃3 個處理組中,20 ℃組的海鱸魚血清GLU水平顯著低于12 ℃(P<0.05),可能是?;钸^程中由于運輸中的機械損傷、饑餓以及水體質(zhì)量的下降,導(dǎo)致魚體出現(xiàn)脅迫應(yīng)激,其體內(nèi)能量代謝增強,且溫度越高魚體代謝速率和能量消耗越高,糖原的分解及消耗使其GLU 水平在運輸60 h 時出現(xiàn)下降,這與范秀萍等[7]對珍珠龍膽石斑魚的代謝研究結(jié)果一致。然而,有研究發(fā)現(xiàn),由于魚種類的不同,其體內(nèi)的代謝機制和對環(huán)境脅迫程度的適應(yīng)性存在差異,無水保活后與?;钸^程中相對比,魚類體內(nèi)的GLU 水平顯著降低[23]。
魚類在非應(yīng)激狀態(tài)時,機體內(nèi)的應(yīng)激蛋白(HSP)常保持一定水平,當(dāng)發(fā)生應(yīng)激反應(yīng)時,應(yīng)激蛋白是魚類機體自身誘導(dǎo)產(chǎn)生的具有保護細(xì)胞免受機體組織和器官受損的一類蛋白質(zhì),可以激活超氧化物歧化酶、過氧化氫酶等,抑制線粒體膜的去極化以減緩細(xì)胞的損傷[9]。由表1可知,在整個?;钸\輸過程中,海鱸魚體內(nèi)HSP 合成量呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢,這與吳波等[24]對石斑魚溫度及鹽度的優(yōu)化結(jié)果一致。12,16 ℃和20 ℃3 個?;钸\輸溫度處理組間的HSP 水平差異性顯著(P<0.05),溫度越高其體內(nèi)合成量越高。在?;钸\輸結(jié)束恢復(fù)12 h 后其體內(nèi)HSP 水平顯著下降 (P<0.05),12 ℃組恢復(fù)至對照組水平,其余兩組均未恢復(fù),可能是由于海鱸魚肝臟細(xì)胞的自身保護機制受損,短期無法恢復(fù)至正常狀態(tài),這可能是導(dǎo)致較高溫組運輸存活率下降的原因之一[20]。
乳酸脫氫酶(LDH)是糖代謝中催化丙酮酸轉(zhuǎn)化成乳酸的一類酶,當(dāng)海鱸魚運輸至72 h 時,體內(nèi)的LDH 活性顯著升高(P<0.05),說明在?;钸\輸期間機體參與無氧呼吸,這與尤宏爭等[25]研究結(jié)果一致。12,16 ℃和20 ℃3 個處理組中,溫度越高,與之相對應(yīng)的LDH 活性越高。運輸結(jié)束恢復(fù)12 h 后,在水溫12 ℃的運輸條件下恢復(fù)至對照組狀態(tài),其余兩組均顯著高于對照組(P<0.05),說明水溫12 ℃進行?;钸\輸時,對海鱸魚的心肌功能影響較小,可正常有氧呼吸,這與朱乾峰等[12]的研究結(jié)果一致。
谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)是魚類重要的轉(zhuǎn)氨酶,正常情況下這兩種轉(zhuǎn)氨酶的活性較低且較穩(wěn)定,當(dāng)肝臟、心臟等器官受到損傷或病變時,血液中的ALT 和AST 含量顯著升高[18,26]。在?;钸\輸前期,海鱸魚血清ALT 和AST 顯著上升(P<0.05)。在?;钸\輸中期(12~60 h)變化相對較平穩(wěn),ALT 水平在?;钸\輸72 h 達(dá)到最高值,AST 水平在保活運輸60 h 達(dá)到最高值,表明運輸過程中的脅迫應(yīng)激對魚的肝臟有一定程度損傷[27]。保活運輸至72 h、水溫12 ℃和16 ℃的低溫條件下酶活性降低,顯著低于20 ℃組(P<0.05)。?;钸\輸結(jié)束恢復(fù)12 h 后兩種轉(zhuǎn)氨酶活性顯著下降(P<0.05)。除20 ℃組外,其余兩組ALT 和AST 均恢復(fù)至對照組水平,這表明12~16 ℃低溫?;钸\輸不會給機體造成肝臟組織損傷,較低溫?;钸\輸比高溫?;钸\輸存活率高。
保活運輸過程中魚類因受到環(huán)境脅所誘發(fā)的應(yīng)激反應(yīng)而對其肌肉品質(zhì)產(chǎn)生一定的影響[28]。低溫?;钸\輸中海鱸魚肌肉理化指標(biāo)的變化見表2。在保活運輸前期,肌肉中總蛋白(TP)和乳酸(LD)水平顯著上升,糖原(Gly)顯著下降(P<0.05),之后隨著保活時間的延長乳酸緩慢變化,總蛋白和肌糖原水平顯著降低(P<0.05),這與王學(xué)娟等[29]對波紋巴非蛤的研究結(jié)論一致。在運輸結(jié)束恢復(fù)12 h 后,3 個處理組的乳酸恢復(fù)至對照組狀態(tài)且無顯著性差異(P>0.05),16 ℃和20 ℃兩個處理組總蛋白和糖原含量均恢復(fù)至對照組狀態(tài),12 ℃組未恢復(fù)至對照組狀態(tài)。?;钸\輸前、后海鱸魚肌肉pH 值、保水性和彈性無顯著性變化(P>0.05),且不同溫度處理組在恢復(fù)12 h 后無顯著性差異。在運輸結(jié)束恢復(fù)12 h 后硬度和咀嚼性顯著降低(P<0.05)。
12復(fù)恢Ag 506.06±1.02 Bh 525.14±4.27 Ch 550.83±2.11 Ad 1.55±0.02 Bb 1.60±0.01 Ba 1.62±0.01 Aa 0.51±0.007 Aa 0.51±0.002 Ab 0.52±0.004 ABab 6.52±0.01 Bab 6.54±0.01 Aa 6.49±0.02 Aabc 5.75±0.10 Bab 5.39±0.19 Aa 5.86±0.36 Acd 8 093±47 Abc 8 240±117 Abc 8 271±67 Aa 0.52±0.04 Abcd 0.54±0.01 Bcd 0.66±0.03 ABc 1 341±65 Ac 1 221±33 Bc 1 461±122化變的標(biāo)指化理肉肌、后前輸運活保下件條溫低在魚鱸海2表The changes of physicochemical indexes of Lateolabrax maculatus muscle before and after transportation at low temperatures Table 2 間/h時輸運活保別組標(biāo)指72 60 48 36 24 12組照對Af 450.97±0.51 Ae 486.50±1.78 Ad 514.77±2.94 Aa 538.03±2.44 Ac 567.74±1.08 Ab 572.82±1.77 a 540.14±1.03 12 ℃-1·mL TP/μg Bg 334.31±3.42 Bf 472.15±1.06 Be 493.43±2.31 Bd 506.76±1.78 Ac 563.70±4.25 Bb 606.40±2.45 16 ℃Cg 503.06±2.88 Cf 515.39±2.57 Ce 526.07±4.04 Cd 576.12±2.91 Bc 588.60±2.22 Cb 631.81±2.29 20 ℃Af 1.26±0.02 Ac 1.17±0.03 Ad 1.54±0.03 Ac 1.16±0.01 Ab 0.86±0.01 Ae 1.06±0.02 a 1.65±0.19 12 ℃-1 Gly/mg·g Bd 1.40±0.03 Bf 1.13±0.03 Bd 1.43±0.02 Be 1.32±0.01 Bc 1.52±0.02 Bb 1.59±0.02 16 ℃Bb 1.44±0.04 Cf 1.05±0.01 Ce 1.26±0.02 Cd 1.07±0.03 Cc 1.38±0.0 1 Cb 1.44±0.01 20 ℃Aa 0.53±0.009 Ac 0.52±0.003 Ac 0.48±0.008 Ad 0.48±0.005 Ac 0.49±0.001 Ab 0.56±0.001 a 0.51±0.007 12 ℃白-1 蛋·g LD/mmol Be 0.50±0.002 Bf 0.49±0.004 Be 0.50±0.003 Bd 0.54±0.003 Bc 0.56±0.002 Bb 0.65±0.001 16 ℃Cf 0.49±0.018 Ce 0.46±0.016 Cd 0.58±0.06 Cd 0.58±0.004 Cc 0.60±0..095 Cb 0.53±0.036 20 ℃Acd 6.64±0.02 Acd 6.69±0.01 Acd 6.67±0.02 Ad 6.66±0.01 Abcd 6.60±0.09 Aabc 6.59±0.03 a 6.51±0.04 12 ℃pH 值Bd 6.77±0.03 Ad 6.72±0.01 Ac 6.62±0.01 Aabc 6.57±0.04 Abc 6.55±0.03 Bd 6.72±0.01 16 ℃Bb 6.75±0.01 Ba 6.51±0.07 Aab 6.60±0.17 Aab 6.63±0.06 Aa 6.45±0.11 Aa 6.54±0.07 20 ℃Aab 5.95±0.24 Ad 8.86±0.16 Abc 6.67±0.79 Ac 7.22±0.73 Aab 6.04±0.19 Aa 5.65±0.18 a 5.66±0.23 12 ℃/%力水持Bc 9.41±0.76 Bc 9.95±0.18 Abc 8.28±0.73 Ac 10.11±2.28 Bbc 8.75±0.25 Bd 12.17±0.20 16 ℃Aab 6.60±0.33 Acd 8.44±0.24 Aab 6.85±0.47 Abc 7.27±1.09 Bcd 7.98±0.91 Cd 8.77±0.16 20 ℃Acd 8 029±205 Acd 8 140±110 Ad 7 821±282 Ac 8 267±112 Ab 8 689±163 Ab 8 617±99 a 9 256±45 12 ℃度硬Ad 7 910±89 Abc 8 340±163 Abcd 8 169±132 Ad 8 035±69 Abc 8 344±255 Ab 8 363±113 16 ℃Abc 8 290±302 Abc 8 375±421 Ac 7 846±175 Abc 8 088±116 Abc 8 143±251 Ab 8 599±218 20 ℃Aa 0.51±0.02 Ab 0.74±0.05 Aa 0.55±0.04 Ab 0.73±0.05 Aa 0.53±0.04 Aa 0.48±0.03 abc 0.51±0.02 12 ℃性彈Aab 0.49±0.01 Bd 0.58±0.04 Acd 0.57±0.01 Ae 0.71±0.02 Aab 0.49±0.02 Aa 0.47±0.04 16 ℃Aab 0.56±0.05 Bbc 0.60±0.01 Abc 0.60±0.03 Ad 0.67±0.01 Bd 0.68±0.02 Aa 0.50±0.06 20 ℃Ac 1 269±22 Ab 1 589±51 Aa 1 793±115 Ab 1 551±132 Ab 1 530±93 Ac 1 301±106 a 1 892±25 12 ℃性嚼咀Abc 1 331±96 Aab 1 634±283 ABab 1 597±49 Aab 1 623±168 Aab 1 597±125 ABc 1 262±60 16 ℃Ab 1 163±121 Ac 1 494±148 Bc 1 477±133 Ac 15 557±59 Ac 1 539±162 Bb 1 065±68 20 ℃
海鱸魚在饑餓條件下保活運輸時,機體為了維持體內(nèi)能量代謝平衡,主要靠分解體內(nèi)儲存的糖原、脂肪及蛋白質(zhì)獲得能量[30]。在保活運輸初期,由于低溫條件下魚體需要分解糖原抵御寒冷,較低溫組的肌糖原比較高溫組下降更顯著。隨著?;顣r間的延長,較高溫組的海鱸魚因應(yīng)激反應(yīng)較強烈,其體內(nèi)糖原被分解時機體無氧呼吸導(dǎo)致乳酸水平上升,糖原被分解為葡萄糖,葡萄糖可繼續(xù)被分解為水和二氧化碳,導(dǎo)致肌肉中的水分含量增加,從而降低魚肉的硬度和咀嚼性[31]。隨著機體內(nèi)糖原逐漸被消耗,肌肉中蛋白質(zhì)含量出現(xiàn)下降趨勢[32]。機體在較低溫條件下(12 ℃)代謝程度較低,能量的消耗比較高溫組小[33],這也是較低溫條件可延長?;顣r間的原因之一。持水力是指肌肉對水的保持能力,主要與機體蛋白質(zhì)的三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)和變性程度相關(guān)[34]。低溫?;钸\輸前、后海鱸魚持水力無顯著性變化,表明海鱸魚肌肉中的蛋白質(zhì)網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)未被破壞,不會發(fā)生蛋白降解,這與劉驍?shù)萚20]的研究結(jié)果相一致。
整個?;钸\輸過程中,?;钸\輸溫度越高,氨氮濃度越高,水體溶解氧水平越低。本試驗中,12℃組水質(zhì)惡化程度最小。20 ℃?;钸\輸組海鱸魚的機體活躍程度較高,呼吸代謝旺盛,導(dǎo)致其應(yīng)激響應(yīng)程度最高,然而,海鱸魚體內(nèi)激素水平過高會造成生理代謝和免疫系統(tǒng)紊亂,導(dǎo)致運輸存活率下降。與對照組相比,20 ℃組在運輸結(jié)束恢復(fù)12 h 后,血清HSP 水平以及ALT、AST 和LDH 酶活性顯著上升。12 ℃組在運輸結(jié)束恢復(fù)12 h 后海鱸魚血清HSP 水平以及ALT、AST 和LDH 酶活性無顯著性變化,這表明機體應(yīng)激響應(yīng)基本消除。海鱸魚在12 ℃低溫條件下代謝較低,對環(huán)境脅迫應(yīng)激的耐受力較強,運輸存活率最高,且運輸前、后血清生化和肌肉理化指標(biāo)基本恢復(fù)至未處理組狀態(tài)。保活運輸結(jié)束恢復(fù)12 h 后各組與對照組相比,除硬度和咀嚼性出現(xiàn)下降,總蛋白、肌糖原、乳酸、pH 值、持水力和彈性均無顯著性變化。綜上,海鱸魚長途?;钸\輸?shù)耐扑]工藝為:在?;钸\輸前禁食暫養(yǎng)36 h,以3 ℃/h 的降溫速率將運輸水溫降至運輸溫度12 ℃,在鹽度16‰,魚水比1∶10~1∶8 的條件下保活運輸至72 h,海鱸魚存活率為100%,恢復(fù)12 h 后的存活率為98%。