楊淑芳 由彩云

非感染性葡萄膜炎是發(fā)生于葡萄膜、視網(wǎng)膜以及玻璃體的一類常見而又重要的致盲性眼病。它多發(fā)于青壯年，常反復(fù)發(fā)作，治療棘手，嚴(yán)重危害患者的視功能和生活質(zhì)量，給患者及家庭帶來沉重的負(fù)擔(dān)。白細(xì)胞介素(IL)-35是IL-12家族的新成員，與其他成員結(jié)構(gòu)相似但功能不同，是類似于IL-10、轉(zhuǎn)化生長因子-β(TGF-β)的一類抗炎細(xì)胞因子。IL-35在多種自身免疫性疾病、器官移植和腫瘤中發(fā)揮作用，是一類具有重要治療前景的抗炎細(xì)胞因子。許多研究顯示，IL-35參與多種非感染性葡萄膜炎的發(fā)生、發(fā)展。本文就IL-35的結(jié)構(gòu)與來源、生物學(xué)功能及其在自身免疫性葡萄膜炎中的研究進(jìn)展進(jìn)行綜述。

1 IL-35的發(fā)現(xiàn)背景

IL-35是IL-12家族的新成員。IL-12由IL-12p35和IL-12p40兩個(gè)亞基組成，IL-12p35似乎是普遍表達(dá)；IL-12p40是誘導(dǎo)性表達(dá)，主要局限于表達(dá)IL-12的細(xì)胞系[1]。p35和p40基因調(diào)控分離引發(fā)了一個(gè)猜想：其中一個(gè)亞基可能與其他亞基相關(guān)聯(lián)。1996年，Devergne等[2]在Epstein-Barr病毒(EBV)感染B淋巴細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)了EBV誘導(dǎo)的基因3(EBI3)，它編碼了一個(gè)與IL-12p40亞基和睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子受體相關(guān)的可溶性紅細(xì)胞生成素受體。鑒于EBI3和p40之間的相似性，Devergne等[2]形成一個(gè)簡單的假設(shè)：EBI3非共價(jià)結(jié)合p35或相關(guān)分子會形成一個(gè)分泌性的異二聚體。1997年，Devergne等[1]證實(shí)，EBI3與IL-12的p35亞基非共價(jià)結(jié)合形成一個(gè)新的異二聚體，即紅細(xì)胞生成素EBI3/p35，這個(gè)新的異二聚體細(xì)胞因子后來被命名為IL-35[3]。

2 IL-35的結(jié)構(gòu)與來源

IL-12家族只有異二聚體細(xì)胞因子，由α鏈(p19、p28或p35)和β鏈(p40或EBI3)組成，包括IL-12、IL-23、IL-27、IL-35和IL-39。α鏈具有4個(gè)IL-6和粒細(xì)胞/巨噬細(xì)胞集落刺激因子典型的α螺旋束結(jié)構(gòu)，β鏈與可溶性細(xì)胞因子受體鏈具有同源性。IL-12由p35和p40亞基組成；IL-23由p19和p40亞基組成[4]；IL-27由p28和EBI3亞基組成[5]；IL-35由EBI3和p35組成；IL-39是最新發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞因子，由p19和EBI3組成。

盡管IL-12家族的亞基構(gòu)成和結(jié)構(gòu)特征相似，但它們的表達(dá)和分泌顯著不同。IL-12、IL-23和IL-27主要由抗原提呈細(xì)胞產(chǎn)生，如樹突狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞和B細(xì)胞[6]。Collison等[7]研究表明，IL-35是由小鼠Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Tregs)產(chǎn)生，而效應(yīng)性T細(xì)胞可能在此調(diào)節(jié)過程中起促進(jìn)作用。IL-35也可能表達(dá)在γδT細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞和胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞[1,7]。

3 IL-35的受體和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路

IL-12家族的受體和信號通路也共享亞基。IL-35的受體有三種表現(xiàn)形式，即IL-12Rβ2IL-12Rβ2、gp130gp130和IL-12Rβ2gp130[8]。IL-12Rβ2是IL-12受體的組成部分，gp130是多種細(xì)胞因子受體的組成部分，包括IL-6、IL-11、IL-27、抑瘤素M、白血病抑制因子、睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子、心肌營養(yǎng)素1和心肌營養(yǎng)素樣細(xì)胞因子[9]。

IL-35與受體結(jié)合后，激活Janus激酶、磷酸化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子(STAT)。IL-35與IL-12Rβ2和gp130同二聚體受體結(jié)合分別磷酸化 STAT1和STAT4，發(fā)揮部分免疫抑制作用。IL-35與 IL-12Rβ2gp130異二聚體受體結(jié)合激活STAT-4-STAT-1蛋白，發(fā)揮最大免疫抑制作用[8]。Wang等[10]研究發(fā)現(xiàn)，在B細(xì)胞中，IL-35通過與IL-12Rβ2WSX-1異二聚體受體結(jié)合誘導(dǎo)STAT-1和STAT-3蛋白磷酸化進(jìn)行信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。

4 IL-35的生物學(xué)功能

IL-35進(jìn)行信號轉(zhuǎn)導(dǎo)時(shí)，與IL-12Rβ2或gp130同二聚體受體結(jié)合僅能抑制T細(xì)胞的增殖；與IL-12Rβ2gp130異二聚體受體結(jié)合不僅可以抑制T細(xì)胞的增殖，還可以將初始T細(xì)胞轉(zhuǎn)化為產(chǎn)生IL-35的誘導(dǎo)性調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(iTr35)。iTr35可促進(jìn)IL-35的分泌，產(chǎn)生正反饋?zhàn)饔肹8]。iTr35只通過分泌IL-35介導(dǎo)免疫抑制作用[8,10]。Wang等[10]研究表明，IL-35可以通過抑制輔助性T細(xì)胞1(Th1)、Th17免疫應(yīng)答誘導(dǎo)Bregs擴(kuò)增，從而抑制小鼠葡萄膜炎?？傊?，IL-35主要通過抑制效應(yīng)T細(xì)胞抑制炎癥細(xì)胞因子分泌，擴(kuò)增Tregs和Bregs促進(jìn)抑炎細(xì)胞因子分泌，發(fā)揮免疫抑制作用。

5 IL-35與全身性疾病

多種研究表明，IL-35在炎癥性自身免疫性疾病中表達(dá)異常，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、炎癥性腸病、多發(fā)性硬化癥、1型糖尿病、銀屑病、自身免疫性肝炎、實(shí)驗(yàn)性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)、強(qiáng)直性脊柱炎(AS)等。IL-35在這些疾病的發(fā)生和發(fā)展中可能起關(guān)鍵作用，但其作用機(jī)制尚不完全清楚。

IL-35水平在自身免疫性疾病患者血清中顯著下降。張宇等[11]研究顯示，AS患者的血清IL-35水平顯著低于健康對照組，IL-17水平顯著高于健康對照組，血清IL-35水平與IL-17、血沉、超敏C反應(yīng)蛋白水平和疾病活動指數(shù)評分均呈負(fù)相關(guān)，這表明AS患者血清IL-35、IL-17水平與臨床炎癥活動指標(biāo)、疾病活動情況有關(guān)。Ye等[12]研究顯示，系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者IL-35+Bregs、血清IL-35水平與疾病活動性和血沉水平均呈負(fù)相關(guān)，表明IL-35+Bregs和IL-35可能在系統(tǒng)性紅斑狼瘡的發(fā)生和進(jìn)展中發(fā)揮保護(hù)作用。Xu等[13]研究顯示，在人鼻咽相關(guān)淋巴樣組織中，產(chǎn)生超抗原的金黃色葡萄球菌(SAg-Sau)誘導(dǎo)的Th17免疫應(yīng)答與扁桃體CD4+T細(xì)胞中IL-35的顯著下調(diào)相關(guān)，重組IL-35可以抑制SAg-Sau激活Th17。Yang等[14]研究表明，與健康對照組相比，急性期和緩解期視神經(jīng)脊髓炎患者血清IL-35水平顯著降低，與腦脊液蛋白水平呈負(fù)相關(guān)。Zhang等[15]在三種著名的銀屑病模型中評估IL-35的作用，結(jié)果顯示，在人永生化角質(zhì)形成細(xì)胞系(HaCaT)誘導(dǎo)的小鼠銀屑病模型中，IL-35抑制IL-6、CXCL8和S100A7的表達(dá)；在角蛋白14-血管內(nèi)皮生長因子-轉(zhuǎn)基因小鼠模型和咪喹莫特誘導(dǎo)的銀屑病小鼠模型中，陽離子脂質(zhì)體包被的編碼人IL-35序列的質(zhì)粒有明顯的免疫抑制作用；在角蛋白14-血管內(nèi)皮生長因子-轉(zhuǎn)基因小鼠模型中，觀察到幾種促炎細(xì)胞因子顯著下調(diào)，IL-35顯著誘導(dǎo)IL-10表達(dá)；相比對照組，IL-35組CD4+IL-17+T細(xì)胞數(shù)量較少，CD4+IL-10+T細(xì)胞和CD4+CD25+Foxp3+T細(xì)胞數(shù)量較多。該研究突破性地發(fā)現(xiàn)IL-35可降低總巨噬細(xì)胞數(shù)和M1/M2巨噬細(xì)胞比例。

IL-35水平在自身免疫性疾病患者血清中顯著升高。Zhao等[16]研究觀察到活動性結(jié)節(jié)病患者的血清IL-35水平及外周血Bregs比例明顯高于穩(wěn)定期患者和健康對照組，疾病進(jìn)展的患者IL-35水平低于初次就診時(shí)水平，這表明IL-35水平降低與疾病進(jìn)展相關(guān)；且在患者CD19+細(xì)胞中IL-35亞基mRNA水平明顯高于對照組，表明血清IL-35水平可能與Breg細(xì)胞功能相關(guān)。Lian等[17]研究發(fā)現(xiàn)，自身免疫性肝炎患者肝組織中IL-35亞基(EBI3和p35)表達(dá)與肝炎和肝纖維化程度呈正相關(guān)。Ito等[18]研究顯示，1型自身免疫性胰腺炎患者血漿和組織中IL-35亞基(EBI3和IL-12p35)表達(dá)升高，IL-35可能通過細(xì)胞因子和Tregs的分化抵抗Th2免疫應(yīng)答，發(fā)揮抗炎作用。

此外，許多研究討論了IL-35在腫瘤中的作用。研究發(fā)現(xiàn)，IL-35的異常表達(dá)會促進(jìn)腫瘤進(jìn)展和轉(zhuǎn)移，可能是腫瘤預(yù)后的標(biāo)志物。Liu等[19]研究發(fā)現(xiàn)，骨肉瘤患者血清IL-35水平和Tregs分泌的IL-35水平明顯升高，IL-35的刺激降低了CD8+T細(xì)胞溶細(xì)胞和非溶細(xì)胞的活性。Sawant等[20]研究表明，Tregs來源的IL-10和IL-35協(xié)同促進(jìn)依賴BLIMP1(Prdm1編碼)的CD8+腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞衰竭，有效限制了抗腫瘤免疫應(yīng)答。Yang等[21]研究顯示，肝細(xì)胞癌患者血清IL-35水平顯著升高，有效的抗腫瘤療法會下調(diào)IL-35水平，重組 IL-35(rlL-35)抑制CD8+T細(xì)胞的細(xì)胞毒性和促炎細(xì)胞因子的分泌。Takeda等[22]對玻璃體視網(wǎng)膜淋巴瘤、非感染性葡萄膜炎和特發(fā)性視網(wǎng)膜前膜患者進(jìn)行回顧性研究，結(jié)果顯示，玻璃體視網(wǎng)膜淋巴瘤和非感染性葡萄膜炎患者的玻璃體內(nèi)IL-35水平和可溶性IL-2受體α水平均顯著高于對照組，玻璃體內(nèi)IL-35高水平組患者的5年總生存率明顯低于低水平組，證實(shí)玻璃體內(nèi)IL-35高水平預(yù)示B細(xì)胞玻璃體視網(wǎng)膜淋巴瘤患者預(yù)后較差。IL-35 在腫瘤中的免疫抑制作用為抗腫瘤療法提供了新思路。

6 IL-35與非感染性葡萄膜炎

葡萄膜炎是導(dǎo)致視力喪失的主要原因之一，其常反復(fù)發(fā)作，可并發(fā)多種眼部并發(fā)癥，包括青光眼、白內(nèi)障和黃斑水腫等，最終可導(dǎo)致視力嚴(yán)重下降，甚至盲。IL-35是免疫抑制性細(xì)胞因子，通過將靜止性T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化為表達(dá)IL-10和IL-35的Tregs和Bregs來抑制自身免疫性疾病，其異常高表達(dá)會阻止宿主對微生物的免疫應(yīng)答，并促進(jìn)腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移[23]。最初的報(bào)道顯示，主要由T細(xì)胞產(chǎn)生的IL-35參與Tregs的抑制活動[7]。后來的研究表明，IL-35也是產(chǎn)生IL-10和IL-35 Bregs的誘導(dǎo)物[10]。

6.1 IL-35在EAU中的研究小鼠EAU模型是研究人類自身免疫性葡萄膜炎的常用模型，其發(fā)病是由Th1細(xì)胞和Th17細(xì)胞共同反應(yīng)引起的[24]。 Wang等[10]通過基因工程獲得rIL-35，并發(fā)現(xiàn)IL-35可以通過誘導(dǎo)Bregs擴(kuò)增，促進(jìn)Bregs轉(zhuǎn)化為IL-35+Bregs，從而抑制小鼠葡萄膜炎，且體外產(chǎn)生的Bregs會通過擴(kuò)增Tregs、抑制Th1細(xì)胞和Th17細(xì)胞從而抑制葡萄膜炎；該研究還發(fā)現(xiàn)，IL-35可將人B細(xì)胞轉(zhuǎn)化為Bregs進(jìn)而抑制葡萄膜炎。這表明了使用Bregs治療自身免疫性疾病的可能性。然而，Bregs療法在人類葡萄膜炎中的應(yīng)用受到限制，因?yàn)橹委煏r(shí)需要使每位葡萄膜炎患者產(chǎn)生自體Bregs，以防止異體Bregs的免疫排斥反應(yīng)。Kang等[25]通過誘導(dǎo)EAU小鼠模型分離產(chǎn)生IL-35的外泌體(i35-Exosomes)研究i35-Exosomes是否會抑制葡萄膜炎，結(jié)果顯示，i35-Exosomes干預(yù)后的小鼠出現(xiàn)輕度的EAU表現(xiàn)，EAU評分明顯降低，對照組小鼠產(chǎn)生嚴(yán)重的葡萄膜炎表現(xiàn)；該研究還觀察到i35-Exosome通過擴(kuò)增分泌IL-10、IL-35的Tregs和抑制Th17細(xì)胞免疫應(yīng)答發(fā)揮作用。對于i35-Exosome在人類葡萄膜炎中的潛在用途，有必要進(jìn)行藥代動力學(xué)研究，以確定i35-Exosome的生物利用度和達(dá)到治療效果所需的最小劑量。Yu等[26]在C57BL/6J小鼠中誘導(dǎo)EAU模型，研究T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞或骨髓細(xì)胞是否是血液、淋巴結(jié)、脾臟及眼部炎癥的神經(jīng)視網(wǎng)膜中IL-10或IL-35的主要產(chǎn)生者，結(jié)果顯示，體內(nèi)IL-10和IL-35主要由B細(xì)胞產(chǎn)生，且與Tregs相比，組織中產(chǎn)生IL-10或IL-35的Bregs顯著擴(kuò)增，表明BATF/IRF-4/IRF-8軸可治療性地用于調(diào)節(jié)IL-10/IL-35+Bregs的生理水平。盡管IL-35在治療自身免疫性疾病方面有廣闊的前景，但還有一個(gè)重要的缺陷是IL-35半衰期相對較短，其應(yīng)用仍需要進(jìn)一步研究。

6.2 IL-35與Vogt-小柳原田病Vogt-小柳原田病(VKH)是以雙側(cè)肉芽腫性全葡萄膜炎為特征的疾病，常伴有腦膜刺激征、聽力障礙、白癜風(fēng)、毛發(fā)變白或脫落，是我國常見的葡萄膜炎類型之一。Hu[27]等研究IL-35在VKH發(fā)病機(jī)制中的作用，分別采用ELISA和Real-Time PCR檢測VKH患者血清IL-35水平和IL-35亞基(p35和EbI3)mRNA表達(dá)水平，結(jié)果表明，活動性VKH患者血清IL-35水平降低，外周血單核細(xì)胞IL-35亞基表達(dá)降低，證實(shí)IL-35表達(dá)下降可能與VKH發(fā)病機(jī)制有關(guān)。

6.3 IL-35與Behcet病Behcet病(BD)是一種多系統(tǒng)炎癥性疾病，主要由自身免疫反應(yīng)所致，包括復(fù)發(fā)性口腔潰瘍、生殖器潰瘍、皮膚損害和慢性復(fù)發(fā)性雙側(cè)葡萄膜炎。

Yong等[28]對30例BD患者采用二甲雙胍治療，記錄患者Foxp3、IL-35、TGF-β、Ror-γt、IL-17和TNF-α的蛋白和mRNA表達(dá)水平，結(jié)果表明，二甲雙胍治療可顯著增加Foxp3和TGF-β的表達(dá)水平，降低ROR-γt、IL-17、TNF-α和IL-35的表達(dá)水平。IL-35與Tregs標(biāo)志物Foxp3及細(xì)胞因子TGF-β的變化水平不一致，可能是因?yàn)檠装Y反應(yīng)的緩解將IL-35降低至非刺激水平。Lopalco等[29]從46例BD患者和19位健康志愿者中采集了54個(gè)血清樣本，使用Bio-Rad細(xì)胞因子微珠陣列對25個(gè)血清細(xì)胞因子進(jìn)行同時(shí)定量，觀察到有黏膜皮膚表現(xiàn)和眼受累患者的血清IL-35水平顯著高于只有黏膜皮膚受累的亞組。Sonmez等[30]通過ELISA檢測不同階段BD患者外周血單核細(xì)胞培養(yǎng)上清中的多個(gè)細(xì)胞因子水平，結(jié)果顯示，與非活動期BD患者和健康對照組相比，活動期BD患者的淋巴細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-17A/F、IL-23水平顯著升高，IL-35水平顯著降低。這表明IL-17A/F和IL-23可能在BD的發(fā)病機(jī)制中起免疫致病作用，且IL-35水平可能與Th17細(xì)胞和Tregs細(xì)胞呈負(fù)相關(guān)。

7 小結(jié)與展望

綜上所述，IL-35通過調(diào)控Tregs、Bregs、Th1和Th17等免疫細(xì)胞及IL-10、TGF-β和IL-17等細(xì)胞因子在非感染性葡萄膜炎等自身免疫性疾病中發(fā)揮作用，但具體的作用機(jī)制尚不完全清楚。在目前的葡萄膜炎研究中，IL-35主要表現(xiàn)為免疫抑制作用，具體的作用機(jī)制仍有待深入研究，未來可作為非感染性葡萄膜炎基礎(chǔ)研究和臨床治療的新靶點(diǎn)。