盧新兆 黃曉華 鄭小鳳 李新才 黃浩南

[關(guān)鍵詞]紅細(xì)胞貧血；地中海貧血；血紅蛋白電泳；基因診斷

地中海貧血是人體血液中珠蛋白基因發(fā)生突變或者缺失引起珠蛋白生成障礙的單基因遺傳性疾病?；颊呒t細(xì)胞中血紅蛋白的組分和含量發(fā)生改變，導(dǎo)致不同程度的溶血貧血，影響紅細(xì)胞的攜氧能力，因此地中海貧血患者容易發(fā)生感染、發(fā)熱、免疫功能低下并會(huì)引起黃疸、肝脾腫大、小兒發(fā)育不良、心臟肺功能不全[1]。本研究通過(guò)全自動(dòng)血液分析儀和毛細(xì)管電泳儀及PCR檢測(cè)儀器對(duì)患者進(jìn)行地中海貧血篩查，紅細(xì)胞貧血指標(biāo)先進(jìn)行初篩，血紅蛋白電泳檢測(cè)提高效率，地中海貧血基因檢測(cè)提高準(zhǔn)確率，聯(lián)合檢測(cè)才能進(jìn)一步明確診斷。通過(guò)紅細(xì)胞貧血指標(biāo)和血紅蛋白電泳聯(lián)合地中海貧血基因檢測(cè)，提高患者地中海貧血的診斷水平，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2018年1月至2021年6月福建醫(yī)科大學(xué)附屬龍巖市第一醫(yī)院門診及住院治療的診斷為α-地中海貧血患者51例為α-地中海貧血組，其中男15例，女36例。納入標(biāo)準(zhǔn)[2]：根據(jù)中華醫(yī)學(xué)會(huì)臨床血液學(xué)分會(huì)關(guān)于地中海貧血診斷標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行確診的患者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①骨髓造血功能引起的貧血；②缺鐵性貧血；③惡性腫瘤性貧血；④其他原因貧血。對(duì)照組為本院體檢健康人群50例，其中男24例，女26例。兩組一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。本研究已經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 紅細(xì)胞貧血指標(biāo)檢測(cè)

患者空腹抽靜脈抗凝血2ml，紅細(xì)胞血紅蛋白（Hb），紅細(xì)胞平均體積（MCV），紅細(xì)胞平均血紅蛋白量（MCH），紅細(xì)胞平均血紅蛋白濃度（MCHC），利用日本希森美康公司生產(chǎn)的全自動(dòng)血液分析流水線及配套質(zhì)控品試劑進(jìn)行檢測(cè)。男性血紅蛋白<120g/L，女性血紅蛋白<110g/L判斷為貧血。

1.3 血紅蛋白電泳檢查

患者空腹抽靜脈抗凝血2ml，使用法國(guó)西比亞公司生產(chǎn)的全自動(dòng)毛細(xì)管血紅蛋白電泳儀進(jìn)行分析，所用的質(zhì)控品和試劑為公司配套生產(chǎn)，嚴(yán)格按照儀器操作規(guī)程及試劑說(shuō)明書進(jìn)行，儀器全自動(dòng)完成血紅蛋白電泳結(jié)果的分析處理，最后得出血紅蛋白的各種電泳區(qū)帶。男女HbA2正常參考值為2.2～3.3，HbA2<2.2判斷為α-地中海貧血表型陽(yáng)性。

1.4 地中海貧血基因檢測(cè)

空腹采取患者抗凝血液標(biāo)本，試劑為深圳亞寧生物公司生產(chǎn)的α-地中海貧血點(diǎn)突變基因和缺失型基因檢測(cè)試劑盒。應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)反向斑點(diǎn)雜交與聚合酶鏈反應(yīng)進(jìn)行地中海貧血基因檢測(cè)，分別檢測(cè)常見的α-地中海貧血三種缺失型（α-SEA，α-3.7，α-4.2）和三種非缺失型突變基因（α-WS，α-QS，α-CS）。嚴(yán)格按照操作規(guī)程進(jìn)行，首先提取全血DNA，利用PCR儀進(jìn)行擴(kuò)增，再用導(dǎo)流雜交技術(shù)顯色，最后結(jié)果判斷與分析。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用[n（%）]表示，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。根據(jù)紅細(xì)胞貧血各指標(biāo)及血紅蛋白電泳HbA2等結(jié)果繪制ROC曲線，通過(guò)AUC值判斷對(duì)地中海貧血診斷效能。

2 結(jié)果

2.1 地中海貧血患者貧血情況

51例地中海貧血患者有46例貧血，貧血總發(fā)生率為90.20%，其中15例男性患者中14例都有貧血，貧血發(fā)生率為93.33%。36例女性患者中32例都有貧血，貧血發(fā)生率為88.89%，紅細(xì)胞貧血指標(biāo)值及各種貧血百分比見表1。在本研究結(jié)果中，α-地中海貧血組HbA2，Hb，MCV，MCH及MCHC均低于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表2。

2.2 α-地中海貧血患者血紅蛋白電泳分析

51例α-地中海貧血患者，有50例HbA2<2.2，表型陽(yáng)性率為98.04%，大部分地中海貧血患者同時(shí)檢出HbH、HbBart’s、HbCS的一種或多種區(qū)帶[3]。其中男性15例，女性36例，血紅蛋白電泳結(jié)果見表3。33例α-地中海貧血患者進(jìn)行地中海貧血基因檢測(cè)，31例檢出三種基因缺失型和三種基因突變型中的一種或混合型，以α-SEA型為主，2例未檢出常見基因型。見表4。

2.3 各指標(biāo)ROC曲線分析

分析各貧血指標(biāo)及血紅蛋白電泳對(duì)α-地中海貧血組的診斷價(jià)值，計(jì)算敏感度和特異度，以1-特異性為橫坐標(biāo)，敏感度為縱坐標(biāo)，繪制HbA2、Hb、MCV、MCH、MCHC等指標(biāo)的ROC曲線，AUC分別為0.990、0.987、0.994、0.970、0.960，各指標(biāo)AUC和對(duì)照組比較均顯著提高地中海貧血診斷的敏感度和特異度。見圖1。

3 討論

α-地中海貧血是因?yàn)?6號(hào)常染色體α蛋白質(zhì)肽鏈基因發(fā)生缺失或突變引起的貧血性疾病[4]。貧血是地中海貧血最主要的臨床體征，在本研究中，51例α-地中海貧血患者有46例出現(xiàn)貧血，貧血陽(yáng)性率90.20%，其中以中度貧血為主，部分發(fā)生重度貧血，甚至出現(xiàn)極重度貧血，嚴(yán)重危及患者的生命。α-地中海貧血組Hb、MCV、MCH、MCHC均顯著低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

紅細(xì)胞貧血指數(shù)是地中海貧血篩查最簡(jiǎn)單實(shí)用的方法，缺鐵性貧血和輕型地中海貧血在臨床上都是小細(xì)胞低色素性貧血，因而單純貧血指標(biāo)不能鑒別這兩種疾病，容易造成輕型地中海貧血的漏檢，因此敏感度和特異度不足，存在一定的假陽(yáng)性和假陰性。全自動(dòng)毛細(xì)管血紅蛋白電泳分析儀是地中海貧血篩查的重要方法，自動(dòng)化程度高，操作簡(jiǎn)單速度快，敏感度和特異度顯著提高。本研究發(fā)現(xiàn)51例α-地中海貧血患者有50例HbA<2.2，同時(shí)檢出α-地中海貧血可能出現(xiàn)的HbH、HbBart’s、HbCS等區(qū)帶，這些區(qū)帶可以出現(xiàn)其中一種或者多種，濃度也不同，與α-地中海貧血類型和病情嚴(yán)重程度相關(guān)。因此，紅細(xì)胞貧血指數(shù)和全自動(dòng)毛細(xì)管電泳儀檢測(cè)血紅蛋白，可以提高地中海貧血的檢出率，減少地中海貧血的漏診[5]。

小部分α-地中海貧血靜止型及輕型在紅細(xì)胞貧血指標(biāo)大部分是正常的，臨床上也沒有明顯癥狀，這是由于靜止型及輕型地中海貧血基因型多數(shù)是只有一種或者兩種α-珠蛋白缺失或者發(fā)生突變，可以通過(guò)紅細(xì)胞的代償功能增強(qiáng)，使得靜止型和輕型地中海貧血患者的紅細(xì)胞指標(biāo)正常，血紅蛋白電泳也存在部分α-地中海貧血的漏檢，沒有嚴(yán)重的貧血及與貧血有關(guān)的并發(fā)癥[6]。因此為了減少α-地中海貧血靜止型及輕型的漏診率，根據(jù)臨床診斷需要進(jìn)行增加地中海貧血基因檢測(cè)是必需的，因?yàn)榈刂泻Ｘ氀驒z測(cè)是地中海貧血診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，雖然檢測(cè)方法比較復(fù)雜，費(fèi)用較高，但是能夠防止紅細(xì)胞貧血指數(shù)及血紅蛋白電泳儀篩查地中海貧血的漏診，提高地中海貧血的檢出率[7]。本研究在33例α-地中海貧血患者進(jìn)行常見的三種缺失型和三種突變型基因檢測(cè)中，31例檢出地中海貧血基因陽(yáng)性，2例靜止型α-地中海貧血未檢測(cè)出地中海貧血基因。本地區(qū)α-地中海貧血最常見的基因型為東南亞缺失型α-SEA，其次是α-3.7缺失型和α-4.2缺失型，跟華南地區(qū)及福建泉州地區(qū)地中海貧血的基因型的研究報(bào)道比較接近[8-9]。α-地中海貧血基因突變型最常見的是α-CS突變，其次是α-QS突變這跟廣東地區(qū)的報(bào)道也相似[10-11]。

通過(guò)多項(xiàng)目ROC曲線分析，聯(lián)合檢測(cè)在地中海貧血的診斷符合率顯著升高，有效地減少輕型地中海貧血的誤診和漏診率，提高地中海貧血確診的準(zhǔn)確度[12]。

紅細(xì)胞貧血指標(biāo)和紅細(xì)胞血紅蛋白電泳檢測(cè)是篩查地中海貧血的重要方法，同時(shí)具有高度的敏感度和特異度，顯著提高地中海貧血患者的檢出率[13-14]。由于少數(shù)輕型地中海貧血患者及罕見型存在漏診，聯(lián)合地中海貧血基因檢測(cè)以及蛋白測(cè)序技術(shù)，可以大大提高地中海貧血的確診和檢出率[15-16]。地中海貧血是一種嚴(yán)重危害人類健康的遺傳性疾病，提早預(yù)防是關(guān)鍵，特別是做好婚前及孕產(chǎn)前診斷和羊水檢查，降低地中海貧血發(fā)生率具有重要的臨床指導(dǎo)意義。