李超 陳云 李俊 盛曉生

[摘要] 目的 探討核轉(zhuǎn)錄因子-κB1（nuclear transcription factor-κB1，NF-κB1）基因rs28362491 位點(diǎn)多態(tài)性與冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟?。╟oronary atherosclerotic heart disease，CHD）患者的嚴(yán)重程度、炎癥因子的相關(guān)性。方法 前瞻性選取2018 年6 月至2021 年6 月浙江省金華市人民醫(yī)院CHD 患者173 例為觀察組，同期非CHD 的患者107 例為對照組，采用聚合酶鏈反應(yīng)–限制性片段長度多態(tài)性技術(shù)分析NF-κB1 基因rs28362491 位點(diǎn)基因多態(tài)性，檢測腫瘤壞死因子-α（tumornecrosis factor–α，TNF-α）、白細(xì)胞介素（interleukin，IL）-6、IL-8 水平。結(jié)果 觀察組NF-κB1 基因rs28362491 位點(diǎn)DD基因型頻率高于對照組，Ⅱ、ID 基因型頻率低于對照組（P<0.05）。兩組D、I 等位基因頻率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。觀察組中，DD 基因型組Gensini 評分均高于ID 和Ⅱ基因型組（P<0.05）；ID 組和Ⅱ基因型組病變支數(shù)、Gensini 評分比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。觀察組血清TNF-α、IL-6、IL-8 水平顯著高于對照組（P<0.05）。觀察組DD 基因型TNF-α、IL-6、IL-8 水平明顯高于ID 和Ⅱ基因型，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；ID 組和Ⅱ基因型組TNF-α、IL-6、IL-8 水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論 NF-κB1 基因rs28362491 位點(diǎn)多態(tài)性與CHD 嚴(yán)重程度及炎癥因子相關(guān)，DD 基因型可能上調(diào)TNF-α、IL-6、IL-8 水平，成為預(yù)測CHD 病變程度的危險(xiǎn)因子。

[關(guān)鍵詞] NF-κB1；冠心??；基因多態(tài)性；炎癥因子

[中圖分類號] R541? ?[文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A? ?[DOI] 10.3969/j.issn.1673-9701.2023.12.001

冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病（coronary heartdisease，CHD）屬于心血管系統(tǒng)疾病，具有發(fā)病率高、致殘率高及致死率高等特點(diǎn)[1-3]。研究表明，CHD發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)除受到環(huán)境因素影響外，與基因多態(tài)性密切相關(guān)[4]。核轉(zhuǎn)錄因子-κB1（nuclear transcription factor-κB1，NF-κB1）基因rs28362491 位點(diǎn)是NF-κB1 基因中唯一具有表達(dá)功能的單核苷酸多態(tài)性（singlenucleotide polymorphises，SNPs），與甲狀腺疾病、2 型糖尿病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、炎癥性腸病等慢性炎癥性疾病發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)密切相關(guān)[5-6]。近年來，許多研究證實(shí)中國西北地區(qū)漢族及維吾爾族人群NF-κB1-rs28362491 位點(diǎn)多態(tài)性與CHD 的遺傳易感性相關(guān)，攜帶DD 基因型在CHD 中具有危險(xiǎn)性[7]，但與CHD 嚴(yán)重程度和炎癥因子關(guān)系的相關(guān)報(bào)道較少?；谝陨涎芯勘尘埃狙芯糠治稣憬胁康貐^(qū)NF-κB1 基因rs28362491 位點(diǎn)多態(tài)性與CHD 嚴(yán)重程度及炎癥因子的相關(guān)性，旨在為CHD 的診斷和治療提供合理的依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018 年6 月至2021 年6 月就診金華市人民醫(yī)院心血管內(nèi)科疑似CHD 患者280 例，根據(jù)冠脈造影結(jié)果診治的173 例CHD 患者作為觀察組，107例非CHD 患者作為對照組。觀察組男102 例，女71例，平均年齡（62.22±5.99）歲；對照組男65 例，女42 例，平均年齡（61.73±5.83）歲。診斷標(biāo)準(zhǔn)：參照《美國心臟病學(xué)會(huì)和心臟協(xié)會(huì)CHD 心絞痛診斷指南》和《2007 年中國慢性穩(wěn)定性心絞痛診斷與治療指南》制定的穩(wěn)定性心絞痛[8]。本研究中所有受試者均為浙江中部地區(qū)漢族常住人群，相互間均無血緣關(guān)系；年齡18～75 歲，性別不限，排除先天性心臟病、嚴(yán)重急慢性感染、肝腎功能不全、惡性腫瘤等疾病，兩組患者的性別、年齡、糖尿病、高血壓、高脂血癥、吸煙等方面比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。受試患者均簽署知情同意書，本研究經(jīng)浙江省金華市人民醫(yī)院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)（倫理審批號：IBR-2021073-R）。

1.2 方法

1.2.1 冠狀動(dòng)脈造影術(shù) 采用Judkin 法造影冠狀動(dòng)脈其中一條或者較大的分支，直徑狹窄≥50%，即可以診斷CHD[9]。冠狀動(dòng)脈病變支數(shù)的判定：①單支病變：前降支、回旋支及右冠狀動(dòng)脈中任何一支血管直徑狹窄≥50％；②雙支病變：前降支、回旋支及右冠狀動(dòng)脈中任何兩支或者左主干狹窄≥0%；③三支病變：任意三支動(dòng)脈狹窄≥50%。Gensini 評分法：冠脈管腔狹窄程度系數(shù)乘以各病變血管的系數(shù)，最后總評分為各分支血管評分之和。每支血管狹窄程度，狹窄≤25%計(jì)1 分，26%～_______50%計(jì)2 分，51%～75%計(jì)4 分，76%～90%計(jì)8 分，91%～99%計(jì)16 分，100%計(jì)32 分。各段冠狀動(dòng)脈病變系數(shù)：左主干為5，前降支及回旋支近段為2.5，前降支中段為1，前降支遠(yuǎn)段為1，回旋支中遠(yuǎn)段為1，右冠狀動(dòng)脈近中遠(yuǎn)段為1，第一對角支為1，第二對角支為1，右心室后支為1，其他小分支為0.5。

1.2.2 NF-κB1 基因多態(tài)性檢測 空腹取靜脈血5ml，采用低滲法分離白細(xì)胞，提取DNA，利用聚合酶鏈反應(yīng)– 限制性片段長度多態(tài)性技術(shù)擴(kuò)增NF-κB1 基因啟動(dòng)區(qū)-94 位點(diǎn)，進(jìn)行NF-κB1 基因多態(tài)性檢測。

1.2.3 炎癥因子分析 取晨空腹肘正中靜脈血5ml，乙二胺四乙酸抗凝管收集，ALLEGRAX-15R 醫(yī)用低速離心機(jī)，離心1000 轉(zhuǎn)/min，離心15min，血清于–80℃冰箱儲存。采用酶鏈免疫吸附法檢測腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor–α，TNF-α）、白細(xì)胞介素（interleukin，IL）-6、IL-8 水平，試劑盒由北京百奧萊博科技有限公司提供。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x s ）表示，組間比較采用t 檢驗(yàn)，多組間比較采用方差分析；計(jì)數(shù)資料以例數(shù)（百分率）[n（%）]表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組NF-κB1 基因rs28362491 位點(diǎn)多態(tài)性比較

NF-κB1基因rs2836249位點(diǎn)的基因型及等位基因頻率在觀察組和對照組的分布均符合Hard-Weinberg平衡定律。NF-κB1 基因rs28362491 位點(diǎn)DD 基因型頻率高于對照組，Ⅱ、ID 基因型頻率低于對照組（P<0.05），兩組D、Ι等位基因頻率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表1。

2.2 觀察組不同基因與冠狀動(dòng)脈嚴(yán)重程度的相關(guān)性

觀察組中3 種不同基因組病變支數(shù)、Gensini 評分比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。DD 基因型組Gensini 評分高于ID 和Ⅱ基因型組患者（P<0.05）。

ID 組和Ⅱ基因型組病變支數(shù)、Gensini 評分比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見表2。

2.3 兩組患者TNF-α、IL-6、IL-8 表達(dá)水平比較

觀察組患者的TNF-α、IL-6、IL-8 表達(dá)水平明顯高于對照組（P<0.05），見表3。

2.4 觀察組不同基因型炎癥因子水平比較

觀察組中3 種不同基因組TNF-α、IL-6、IL-8 水平比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。DD 基因型組TNF-α、IL-6、IL-8 水平均高于ID 和II 基因型組（P<0.05）。ID 組和Ⅱ基因型組TNF-α、IL-6、IL-8水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見表4。

3 討論

越來越多研究支持，炎癥反應(yīng)通過影響動(dòng)脈粥樣硬化（atherosclerosis，AS），貫穿CHD 的形成、發(fā)展與預(yù)后的全過程[10]。炎癥因子一般起源于血管內(nèi)皮和巨噬細(xì)胞的促炎細(xì)胞顆粒，在外周血液中被檢測。相關(guān)研究表明，TNF-α 由單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，侵襲血管內(nèi)皮細(xì)胞，誘導(dǎo)血栓形成，引起血管狹窄及心肌細(xì)胞壞死，最終導(dǎo)致心臟功能惡化[11-12]。葛麗英等[13]研究證實(shí)，IL-6、IL-8 水平與CHD 發(fā)生密切相關(guān)。本研究結(jié)果表明，觀察組患者血清中TNF-α、IL-6、IL-8 水平高于對照組。

核因子κB（nuclear factor kappa-B，NF-κB）是一種重要的核轉(zhuǎn)錄因子，參與機(jī)體炎癥反應(yīng)，主要由NF-κB 和RelA 基因編碼組成[14]。NF-κB 介導(dǎo)炎癥細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在AS 的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮關(guān)鍵作用，故NF-κB 的活化可能是CHD 發(fā)生的重要因素[15]。NF-κB1 為NF-κB 重要組成部分，其基因位于人類第4 號染色體長臂2 區(qū)4 帶（4q24），由24 個(gè)外顯子和內(nèi)含子組成，跨度為1.56×105bp，編碼NF-κB 亞單位p105 與p50，調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄因子反應(yīng)[16]。p50/p65 異源二聚體作為NF-κB 轉(zhuǎn)錄軸的組成部分，誘導(dǎo)促炎細(xì)胞因子的轉(zhuǎn)錄而具有促炎作用。相反，p50 在p50 同型二聚體中具有抗炎特性，其能夠抑制促炎細(xì)胞因子，刺激單核巨噬細(xì)胞分泌IL-10，起到持續(xù)的抗炎作用[17]。rs28362491 位點(diǎn)多態(tài)性表現(xiàn)為ATTG 堿基的插入/缺失，編碼野生純合基因型（ins/ins，Ⅱ），雜合突變基因型（ind/del，ID），純合突變基因型（ del/del ，DD） 3 種基因[18]。大量證據(jù)表明，NF-κB1-rs28362491 多態(tài)性與CHD 遺傳易感相關(guān)，D等位基因和DD、ID 基因型可能增加CHD 的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)[19]，究其原因可能是影響p50/p50 的濃度，導(dǎo)致促炎/抑炎平衡失調(diào)[20-21]，但與CHD 的嚴(yán)重程度研究不多，且研究證實(shí)Gensini 評分可反映冠狀動(dòng)脈病變嚴(yán)重程度，其與患者的預(yù)后呈負(fù)相關(guān)。本研究中，觀察組NF-κB1 基因rs28362491 位點(diǎn)DD 基因型和D等位基因分布頻率顯著高于對照組，表明D 等位基因可能是CHD 發(fā)生的遺傳易感基因。另外，通過觀察組NF-κB1-rs28362491 多態(tài)性分布情況，DD 基因型的冠脈病變?nèi)е?shù)增多以及Gensini 評分增高，進(jìn)一步說明等位基因D 增多與CHD 的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。

本研究結(jié)果顯示，觀察組NF-κB1-rs28362491位點(diǎn)DD 與ID+Ⅱ基因型比較，DD 基因型TNF-α、IL-6、IL-8 水平高于ID+Ⅱ基因型（P<0.05），提示CHD 患者NF-κB1-rs28362491 位點(diǎn)與炎癥反應(yīng)有一定的聯(lián)系，推測NF-κB1-rs28362491 位點(diǎn)ATTG 缺失（等位基因D）不能與核蛋白結(jié)合，抑制NF-κB 轉(zhuǎn)錄效率，導(dǎo)致p50 蛋白合成能力下降，引起p50/p65異源二聚體和p50/p50 同源二聚體失衡，損害內(nèi)皮細(xì)胞，刺激平滑肌細(xì)胞增殖，最終促進(jìn)CHD 的發(fā)生、發(fā)展，因此對CHD 的高危人群進(jìn)行NF-κB1 基因篩查，從而早診斷、早預(yù)防、早治療。

綜上所述，NF-κB1 基因rs28362491 位點(diǎn)多態(tài)性與浙中地區(qū)漢族人群CHD 的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)，DD 基因型可能通過影響TNF-α、IL-6、IL-8 表達(dá)，使機(jī)體處于高炎癥狀態(tài)，成為易感基因型，易導(dǎo)致冠脈病變程度加重。

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（收稿日期：2022–08–17）

（修回日期：2023–03–08）