吳東,李茂森,李帥兵,董賢春,牟毅,王博,唐婷婷,唐韻,赫英宇,任天寶

(1.湖北中煙工業(yè)有限責(zé)任公司,湖北 武漢430048;2.河南農(nóng)業(yè)大學(xué)煙草學(xué)院/河南省生物炭研究工程技術(shù)中心,河南 鄭州450002;3.黑龍江省煙草公司牡丹江煙葉公司,黑龍江 牡丹江157011;4.湖北省煙草公司宜昌市公司,湖北 宜昌 420500)

土壤細(xì)菌是土壤微生物中數(shù)量最多,組成最復(fù)雜的一類生物,其相對豐度達(dá)到70%～90%,是土壤有機(jī)質(zhì)分解,腐殖質(zhì)形成的重要承擔(dān)者,其物種多樣性和群落組成結(jié)構(gòu)是衡量土壤健康和養(yǎng)分水平的重要指標(biāo)[1-2]。煙草是中國重要的經(jīng)濟(jì)作物,煙葉的品質(zhì)決定了中國煙草行業(yè)的發(fā)展?fàn)顩r,由于耕地面積有限,目前中國烤煙生產(chǎn)中存在著常年連作和長期化肥施用等問題,導(dǎo)致植煙土壤微生物多樣性降低,微生物群落結(jié)構(gòu)失衡,土壤中益生菌豐度降低,病原菌大量積累,嚴(yán)重影響了煙葉品質(zhì)[3]。王偉華等[4]研究發(fā)現(xiàn),長期單施化學(xué)提高了土壤總氮、全磷含量,但對有機(jī)質(zhì)沒有顯著的影響,有機(jī)肥和氮肥配施顯著提高了土壤有機(jī)質(zhì)、總碳、總氮、全磷和速效磷含量。唐海明等[5]研究發(fā)現(xiàn),60%無機(jī)肥和40%化肥配施有利于提高微生物對土壤碳源的利用效率,長期單施化肥土壤細(xì)菌多樣性顯著降低。陳丹梅等[6]通過長期定位試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn),長期施用化肥植煙土壤有機(jī)質(zhì)含量下降20.56%,真菌種群數(shù)量增加,病原微生物相對比例增大。改變施肥模式,增加有機(jī)肥的施用可對土壤產(chǎn)生重要影響[7]。

生物炭是一種富碳的黑色固體產(chǎn)物,主要由農(nóng)林廢棄物(秸稈、污泥、糞便等)在高溫低氧環(huán)境中燒制而成,其碳含量高達(dá)70%以上,對于土壤有機(jī)質(zhì)提升、土壤碳氮比調(diào)節(jié)有著積極的作用。生物炭本身孔隙結(jié)構(gòu)豐度,為土壤細(xì)菌和真菌提供生存環(huán)境,對提高土壤酶活性,增加土壤微生物量起著積極的作用[8-9]。生物炭由高溫?zé)峤庵瞥?其本身的養(yǎng)分含量有限,且難以被土壤微生物分解或礦化,已成為土壤改良重要的原料[10],以生物炭主要原料制成新型的生物炭基肥,具有減氮增效的作用[11]。研究發(fā)現(xiàn)施加生物炭基肥能夠顯著提高土壤有機(jī)質(zhì)含量,增加土壤速效養(yǎng)分含量,提高土壤酶活性和細(xì)菌群落多樣性[12-13]。汪坤等[14]研究發(fā)現(xiàn),施加生物炭基肥提高了烤煙土壤酶活性,增強(qiáng)了烤煙的抗病性。劉福童等[15]通過施加生物炭基肥,發(fā)現(xiàn)土壤有機(jī)質(zhì)含量顯著提高,土壤酶活性增強(qiáng),土壤細(xì)菌多樣性顯著增加。高夢雨等[16]通過研究生物炭基肥與等量碳素或氮磷鉀肥料對棕壤土碳組分的影響,發(fā)現(xiàn)長期施用生物炭和炭基肥可以顯著提高土壤有機(jī)碳含量,且對土壤速效養(yǎng)分的提升效果更優(yōu)。常棟等[17]研究發(fā)現(xiàn),施加生物炭可以促進(jìn)土壤微生物對土壤中碳源的利用程度,并顯著提高了土壤脲酶、蔗糖酶和多酚氧化酶等土壤關(guān)鍵碳氮循環(huán)酶活性。IBRAHIM等[18]發(fā)現(xiàn),施用煙稈炭基肥能夠顯著增強(qiáng)土壤氮循環(huán)酶活性,改善土壤微生物群落結(jié)構(gòu)。GAO等[19]研究發(fā)現(xiàn),施加生物炭顯著改變了土壤細(xì)菌群落組成,隨著生物炭施加量的增加,土壤放線菌的豐度降低,變形菌門和酸桿菌門的相對豐度增加。而王明元等[20]研究發(fā)現(xiàn),施加生物炭后,土壤擬桿菌門、疣微菌門和厚壁菌門的相對豐度顯著增加,酸桿菌門、芽單胞菌門明顯減少。

生物炭基肥在土壤健康培育、微生態(tài)調(diào)控等方面發(fā)揮著重要的作用。目前,有關(guān)生物炭基肥對烤煙生長發(fā)育、土壤理化特性已有較多研究,但關(guān)于生物炭基肥對植煙土壤微生物群落調(diào)控機(jī)制研究較少。本試驗(yàn)在植煙土壤中添加生物炭基肥,通過測定土壤中的養(yǎng)分指標(biāo),使用高通量測序技術(shù)分析土壤細(xì)菌群落,探究了生物炭基肥對土壤理化指標(biāo)及細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)的影響,為生物炭基肥在西南高海拔山區(qū)植煙土壤微生物群落結(jié)構(gòu)調(diào)節(jié)和土壤改良提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)地概況

于2021年4—9月在遵義市播州區(qū)樂山鎮(zhèn)進(jìn)行試驗(yàn)。該煙區(qū)為煙菜輪作,土壤為黃棕壤,其基礎(chǔ)理化性質(zhì)為:pH值6.35、有機(jī)質(zhì)20.12 g·kg-1、堿解氮120.45 mg·kg-1、速效磷42.36 mg·kg-1、速效鉀224.62 mg·kg-1。供試品種為云煙87,由遵義煙草公司提供,烤煙大田栽培措施按照當(dāng)?shù)貎?yōu)質(zhì)煙葉生產(chǎn)技術(shù)進(jìn)行。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)設(shè)置1個常規(guī)施肥處理和3個不同生物炭基肥梯度處理:常規(guī)施肥(CK)、0.6 t·hm-2(T1)、0.9 t·hm-2(T2)和1.2 t·hm-2(T3),每個處理重復(fù)3次。生物炭基肥由生物炭和植物油粕等制成:生物炭質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40.51%,芝麻餅肥質(zhì)量分?jǐn)?shù)為20.16%。其中有機(jī)質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)大于45.21%,有效養(yǎng)分質(zhì)量分?jǐn)?shù)大于5%,m(N)∶m(P2O5)∶m(K2O)=1∶1∶2.8。為保證試驗(yàn)的一致性,除CK處理外,其余處理均在常規(guī)施肥的基礎(chǔ)上減氮10%。常規(guī)施肥:煙草專用肥0.525 t·hm-2,m(N)∶m(P2O5)∶m(K2O)=10∶10∶24。生物炭基肥于起壟前條施。

1.3 測定方法

1.3.1 土壤樣品的采集 根據(jù)5點(diǎn)取樣法,每個處理取長勢一致的煙株3株,挖出整個根部,收集根系表面0～4 mm的土壤,保存在10 mL無菌離心管中,一部分用干冰保存進(jìn)行微生物多樣性檢測,剩余部分在陰涼處自然風(fēng)干后研磨,用于土壤理化性質(zhì)分析。

1.3.2 農(nóng)藝性狀的測定 參考YC/T 142—1998 煙草農(nóng)藝性狀調(diào)查方法,在移栽后90 d測定烤煙農(nóng)藝性狀,在每個處理選取10株長勢均勻的煙株,分別測量株高、自上而下第10片葉處莖圍,最大葉葉長、葉寬。

1.3.3 土壤理化指標(biāo)及養(yǎng)分的測定 參照文獻(xiàn)[21]進(jìn)行測定。土壤含水率(SWC)的測定采用烘干法;土壤容積質(zhì)量(SBD)采用環(huán)刀法測定;pH的測定采用超純水做浸提劑,按照m(土)∶m(水)=1∶2.5的比例浸提,用精密pH計(jì)(型號:BPH305)直接測定;土壤速效磷(AP)采用碳酸氫鈉浸提法測定;土壤有機(jī)碳(SOM)采用濃硫酸-重鉻酸鉀外加熱法測定;堿解氮(AN)采用堿解擴(kuò)散法。

1.3.4 土壤細(xì)菌的檢測 采用 DNA 抽提試劑盒(E.Z.N.A.?soil)對樣本的DNA 進(jìn)行提取,以稀釋后的基因組 DNA 為模板,根據(jù)測序區(qū)域的選擇,對16SV3～V4 區(qū)進(jìn)行擴(kuò)增,引物序列為 343F(5’-TACGGRAGGCAGCAG-3’)和798R(5’-AGGGTATCTAATCCT-3’)。使用Takara公司的 Takara Ex Taq高保真酶進(jìn)行PCR擴(kuò)增。PCR產(chǎn)物使用電泳檢測,檢測后進(jìn)行純化,純化后作為二輪PCR模板,并進(jìn)行二輪PCR擴(kuò)增,并再次使用電泳檢測,檢測后再次純化,純化后對PCR產(chǎn)物進(jìn)行 Qubit定量,根據(jù) PCR產(chǎn)物濃度進(jìn)行等量混樣,并上機(jī)測序[8]。

1.4 數(shù)據(jù)分析

采用Microsoft Excel 2021分析數(shù)據(jù),用SPSS 26.0軟件分析處理數(shù)據(jù),方差分析采用最小顯著性差異法,主成分分析和細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)弦圖分別用用R語言中的factoextra和 circlize包進(jìn)行繪制。

2 結(jié)果與分析

2.1 生物炭基肥對成熟期烤煙農(nóng)藝性狀的影響

由表1可以看出,施加生物炭基肥,烤煙的農(nóng)藝性狀指標(biāo)顯著提高,與CK處理相比,T1、T2、T3處理的烤煙株高分別增加了11.07%、12.14%和8.21%;T2和T3處理煙株莖圍較CK處理有顯著增加,分別為7.46%和7.96%;T1、T2、T3處理的煙株最大葉葉長分別增加了6.03%、8.29%和3.52%,其中T2處理最大葉葉長較CK顯著增加;T1、T2、T3處理的煙株最大葉葉寬與CK處理均不存在顯著差異,其中T3處理葉寬小于CK處理。

表1 成熟期烤煙農(nóng)藝性狀

2.2 生物炭基肥對成熟期烤煙根際土壤理化性質(zhì)的影響

由表2可以看出,與CK處理相比,T1、T2、T3處理均顯著提高了土壤pH值,且隨著炭基肥施加量的增加,土壤pH值也呈增加的趨勢;T1、T2、T3處理土壤容積質(zhì)量較CK處理降低了6.33%、12.41%和16.46%,均達(dá)到顯著水平。施加生物炭基肥后,土壤有機(jī)質(zhì)、堿解氮、速效磷、速效鉀含量相較于CK處理均顯著增加,增加幅度分別為19.05%～27.64%、5.25%～14.67%、4.99%～15.16%和5.07%～14.83%。

表2 成熟期烤煙根際土壤理化性質(zhì)

2.3 生物炭基肥對烤煙根際土壤細(xì)菌α多樣性的影響

對12個樣本進(jìn)行高通量分析,共獲得有效序列670 548條,從圖1中可以看出,4個處理共有的分類操作單元數(shù)(OTUs:operational taxonomic units)有1 789條,3個生物炭基肥處理所獨(dú)有的OTUs分別為776、617和501。

圖1 土壤細(xì)菌OTUs數(shù)

從表3可以看出,施加生物炭基肥后,土壤細(xì)菌多樣性有降低的趨勢,且隨著炭基肥施加量的增加,細(xì)菌多樣性表現(xiàn)出先升高后降低;除T1處理外,T2、T3處理Chao1指數(shù)和ACE指數(shù)均小于CK處理,隨著生物炭基肥施加量的增加,土壤細(xì)菌豐富度表現(xiàn)出下降的趨勢。本試驗(yàn)中樣本測序覆蓋率均達(dá)到98%以上,滿足后續(xù)分析。

表3 成熟期烤煙根際土壤細(xì)菌α多樣性

2.4 生物炭基肥對烤煙根際土壤細(xì)菌群落多樣性的影響

2.4.1 生物炭基肥對門水平細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)的影響 由圖2可知,門水平上土壤優(yōu)勢細(xì)菌群落為變形菌門(Proteobacteria)、厚壁菌門(Firmicutes)、放線菌門(Actinobacteriota)、綠彎菌門(Chloroflexi)、擬桿菌門(Bacteroidota)和酸桿菌門(Acidobacteriota)。T1和T2處理變形菌門(Proteobacteria)相對豐度高于CK處理,T3處理變形菌門(Proteobacteria)相對豐度低于CK處理。3個生物炭基肥處理的厚壁菌門(Firmicutes)相對豐度均大于CK處理,分別增加了388.87%、7.75%和143.22%;放線菌門(Actinobacteriota)和綠彎菌門(Chloroflexi)的相對豐度的變化在4個處理中較為一致,均為T2>T3>T1>CK。3個生物炭基肥處理的擬桿菌門(Bacteroidota)和酸桿菌門(Acidobacteriota)相對豐度均小于CK處理,降低的幅度分別為39.60%～72.85%和10.43%～45.08%。

注:圖中數(shù)值代表一個菌在4個處理中的豐度之和。下同。

2.4.2 生物炭基肥對綱水平細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)的影響 從圖3中可以看出,烤煙根際土壤優(yōu)勢門水平細(xì)菌群落為芽孢桿菌綱(Bacilli)、γ-變形菌綱(Gammaproteobacteria)、擬桿菌綱(Bacteroidia)、纖線桿菌綱(Ktedonobacteria)、α-變形桿菌綱(Alphaproteobacteria)和放線菌綱(Actinobacteria)。T1處理芽孢桿菌綱(Bacilli)相對豐度顯著高于其余處理,較CK處理提高543.69%,γ-變形菌綱(Gammaproteobacteria)相對分度為T1>T3>CK>T2,T1處理較CK處理提高了33.82%。擬桿菌綱(Bacteroidia)隨著施加生物炭的量增加而降低,較CK處理分別降低了70.58%、47.81%和46.74%。施加生物炭后,纖線桿菌綱(Ktedonobacteria)相對豐度變化量較大,T1、T2和T3處理分別提高了434.45%、662.01%和631.15%。除T2處理外,其余兩處理的α-變形桿菌綱(Alphaproteobacteria)豐度相較于CK處理均降低,分別為33.23%和27.54%。

圖3 綱水平細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)

2.5 根際土壤細(xì)菌群落LEfSe分析

利用LEfSe差異分析,篩選出4種土壤中具有顯著差異的微生物(LDA閾值為2)。由圖4可知,CK處理硝化螺旋菌門(Nitrospirota)、硝化螺旋菌目(Nitrospirales)和梭菌科(Pyrinomonadaceae)顯著富集;T1處理腸球菌科(Enterococcaceae)和腸球菌屬(Enterococcus)顯著富集;T2處理弧菌(Vibrio)、α-變形菌綱(Alphaproteobacteria)、纖線桿菌綱(Ktedonobacteria)顯著富集;T3處理綠彎菌門(Chloroflexi)顯著富集。

2.6 生物炭基肥對細(xì)菌β多樣性的影響

如圖5所示,樣本組成差異在PC1軸和PC2軸上的值分別為57.5%和31.5%。從圖5中可以看出,CK處理與施加生物炭處理在PC1軸上分離,說明施加生物炭對土壤細(xì)菌群落有明顯的影響。T1、T2和T3處理樣本點(diǎn)依次在PC2軸上分布,T1和T3處理樣本點(diǎn)距離較近,說明T1和T3處理的土壤細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)相似,T2處理與其他3個處理樣本點(diǎn)距離較遠(yuǎn)。

圖5 基于OTUs的土壤細(xì)菌群落PCA分析

2.7 土壤門水平細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)與土壤理化性質(zhì)相關(guān)性分析

表4為門水平上優(yōu)勢菌群與土壤理化性質(zhì)之間的關(guān)系。從表4中可以看出,綠彎菌門(Chloroflexi)與土壤速效磷和速效鉀有顯著正相關(guān)(p<0.05),與土壤pH和有機(jī)質(zhì)呈極顯著正相關(guān)(p<0.01),與土壤容積質(zhì)量呈顯著負(fù)相關(guān)(p<0.05)。變形菌門(Proteobacteria)與土壤容積質(zhì)量呈正相關(guān),與土壤pH值、有機(jī)質(zhì)、堿解氮、速效磷和速效鉀呈負(fù)相關(guān)。厚壁菌門(Firmicutes)與土壤pH值和有機(jī)質(zhì)呈正相關(guān)關(guān)系,與土壤容積質(zhì)量、堿解氮、速效磷和速效鉀呈負(fù)相關(guān)。

表4 細(xì)菌優(yōu)勢門類與土壤理化性質(zhì)的相關(guān)關(guān)系

3 結(jié)論與討論

3.1 生物炭基肥對烤煙土壤理化性質(zhì)的影響

已有研究表明,在土壤中施加炭基肥后,土壤速效養(yǎng)分和有機(jī)碳含量有顯著的提高,作物生長發(fā)育得到促進(jìn),從而作物的產(chǎn)量也有顯著的增加[22]。本研究發(fā)現(xiàn),在土壤中施加生物炭基肥可以顯著的提高土壤pH值,且土壤pH值隨著生物炭基肥施加量的增加而增加,這是因?yàn)樯锾科浔旧沓蕢A性,pH值在7至10.5之間[23],以生物炭為載體的生物炭基肥在很大程度上保留了生物炭的特性,因此可以顯著的增加土壤的pH值,對于酸性土壤改良具有良好的效果。本研究發(fā)現(xiàn),施加生物炭后,土壤堿解氮等速效養(yǎng)分含量相較于CK處理有較明顯的增加,但隨著生物炭基肥施加量的增加,土壤中的養(yǎng)分的含量沒有明顯的變化,這可能是由于生物炭本身具有吸附的性質(zhì),減緩了生物炭基肥料中養(yǎng)分的釋放,這可以為煙草中后期的生長發(fā)育提供良好的肥效,這與陳懿等[24]研究結(jié)果一致,施加炭基肥顯著的提高了土壤pH和速效養(yǎng)分含量,同時(shí)研究發(fā)現(xiàn)生物炭對肥料的養(yǎng)分具有良好的吸持效果,可以有效的促進(jìn)土地肥力。宋大利等[25]和DEMISIE等[26]研究發(fā)現(xiàn),將生物炭和無機(jī)肥粒配施顯著的增加了土壤有機(jī)碳及其組分含量,可以更好地改善土壤質(zhì)量。本研究發(fā)現(xiàn),施加炭基肥后土壤有機(jī)質(zhì)含量有著明顯的增加趨勢,這和馮慧琳等[27]研究結(jié)果相似。這是由于生物炭基肥本身含有的有機(jī)質(zhì)釋放到了土壤中,增加了土壤中有機(jī)質(zhì)的含量。WANG等[28]研究發(fā)現(xiàn),施加化肥和生物炭均能顯著增加土壤的碳氮組分,施加生物炭可以顯著的提高土壤碳氮比,但是單施化肥會對土壤碳氮比產(chǎn)生不利的影響。本研究發(fā)現(xiàn),土壤有機(jī)質(zhì)和速效養(yǎng)分含量隨著生物炭基肥施加量的增加,呈現(xiàn)先上升后趨向穩(wěn)定的趨勢;烤煙株高和最大葉長寬也是隨著炭基肥施加量的增加呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢,其中T2處理的各個指標(biāo)均為最高。本試驗(yàn)為生物炭基肥和化肥混合施用,隨著生物炭基肥施加量的增加,土壤中生物炭和氮肥、鉀肥的比例升高,生物炭表面較活躍的離子交換量和活躍的基團(tuán)對速效養(yǎng)分的吸附效果增強(qiáng),限制了肥料養(yǎng)分的釋放[29]。因此,施加適量的生物炭基肥更有利于土壤養(yǎng)分的提高和植株的生長發(fā)育。

3.2 生物炭基肥對烤煙土壤細(xì)菌多樣性及群落結(jié)構(gòu)的影響

生物炭基肥的施用會驅(qū)動土壤生物化學(xué)環(huán)境發(fā)生變化,影響土壤微生物的生存條件,從而改變土壤微生物群落的組成和多樣性[30]。生物炭含有大量的孔隙,是微生物生存的適宜場所[31],同時(shí)生物炭具有的一些有機(jī)質(zhì)也為微生物的繁殖提供了一定的養(yǎng)分,對微生物的生長、發(fā)育和代謝具有促進(jìn)作用[32]。在本試驗(yàn)中,與常規(guī)施肥相比,施加炭基肥增加了放線菌門的豐度,這與REN等[33]的研究一致。放線菌適宜在堿性環(huán)境下生存,施加生物炭基肥后,土壤pH值上升,更加適合放線菌生長發(fā)育。研究發(fā)現(xiàn),施加生物炭基肥后,擬桿菌門和酸桿菌門豐度降低,與放線菌門相反,酸桿菌門是嗜酸性細(xì)菌,酸性土壤更有利于其生存,施加生物炭后,土壤pH值上升,導(dǎo)致酸桿菌門豐度降低。

本研究表明,施加炭基肥促進(jìn)了土壤變形菌門(Proteobacteria)和厚壁菌門(Firmicutes)的生長,生物炭獨(dú)特的孔隙結(jié)構(gòu)為微生物的生長發(fā)育提供了生存基礎(chǔ),從而影響了細(xì)菌的群落結(jié)構(gòu)。同時(shí),生物炭基肥可以調(diào)節(jié)土壤的理化性狀,如降低土壤容積質(zhì)量等,間接影響了微生物在土壤中的生存模式,對微生物的生長、發(fā)育和代謝起到了一定的調(diào)節(jié)作用[34]。細(xì)菌群落主成分分析結(jié)果表明,生物炭基肥驅(qū)動了土壤中的細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)發(fā)生改變,并具有一定的趨向性,這與蘇鑫等[35]研究結(jié)果一致。相關(guān)性分析表明,土壤中優(yōu)勢細(xì)菌與土壤pH值,有機(jī)碳、速效鉀等理化特性均存在相關(guān)性。其中,變形菌門與土壤容積質(zhì)量呈正相關(guān)關(guān)系,與土壤pH值、有機(jī)質(zhì)、堿解和速效鉀呈負(fù)相關(guān)綠彎菌門與土壤pH值、速效磷和速效鉀有顯著正相關(guān)關(guān)系,與土壤容積質(zhì)量呈顯著負(fù)相關(guān)。這與桑文等[36]研究結(jié)果一致,但胡坤等[1]研究發(fā)現(xiàn),綠彎菌門會隨著土壤pH值的上升呈下降的趨勢,這可能是由于研究對象的不同,生物炭基肥對土壤中的微生物產(chǎn)生了不同的驅(qū)動效應(yīng)。

生物炭基肥顯著增加了土壤pH和有機(jī)質(zhì)含量,提升土壤肥力,促進(jìn)煙株的生長發(fā)育。低施肥量可以增加土壤細(xì)菌豐富度,施加生物炭基肥顯著的影響了細(xì)菌群落結(jié)構(gòu),提高了變形菌門(Proteobacteria)、厚壁菌門(Firmicutes)相對豐度,降低了擬桿菌門(Bacteroidota)和酸桿菌門(Acidobacteriota)的相對豐度。相關(guān)性分析結(jié)果表明,綠彎菌門(Chloroflexi)受土壤理化性質(zhì)的驅(qū)動較為明顯,與多種土壤理化指標(biāo)均顯著相關(guān)。綜上所述,生物炭基肥對土壤pH值、有機(jī)質(zhì)、速效養(yǎng)分含量和土壤微生物有著積極的影響,對西南高海拔煙區(qū)烤煙栽培減氮施肥和土壤改良具有重要意義。