半枝蓮抗肝癌活性部位的化學(xué)成分研究

DOI： 10.11931/guihaia.gxzw202306008

方振峰， 曹曉琴， 陳中強(qiáng)， 等， 2024.

半枝蓮抗肝癌活性部位的化學(xué)成分研究 ［Ｊ］.

廣西植物， 44（6）： 1070-1081.

FANG ZF， CAO XQ， CHEN ZQ， et al.， 2024.

Chemical constituents of the anti-liver cancer active site of Scutellaria barbata" ［J］.

Guihaia， 44（6）： 1070-1081.

摘" 要：" 前期研究發(fā)現(xiàn)，半枝蓮（Scutellaria barbata）全草醇提物的乙酸乙酯萃取部位經(jīng)大孔吸附樹脂處理，其70%乙醇洗脫部位具有較好的抗肝癌活性。為明確其活性成分，該研究采用硅膠柱色譜、Sephadex LH-20柱色譜、制備TLC、半制備液相色譜等對(duì)活性部位進(jìn)行分離和純化，運(yùn)用多種波譜分析方法鑒定了單體化合物結(jié)構(gòu)，并利用CCK-8法評(píng)價(jià)了所有單體化合物對(duì)人肝癌HepG2細(xì)胞體外增殖抑制活性，同時(shí)利用分子對(duì)接技術(shù)考察了活性最好的化合物與肝癌靶標(biāo)的結(jié)合情況。結(jié)果表明：（1）從該活性部位共分離得到14個(gè)化合物，包括12個(gè)新克羅烷型二萜類化合物和2個(gè)黃酮類化合物，分別鑒定為scutefolide C （1）、6-乙酰氧基-7-煙酸酰氧基半枝蓮堿G （2）、scutestrigillosin D （3）、 scutehenanine D （4）、半枝蓮堿A （5）、半枝蓮堿B （6）、7-煙酸酰氧基半枝蓮堿H （7）、半枝蓮堿N （8）、半枝蓮堿Y （9）、barbatin A （10）、barbatin B （11）、barbatin D （12）、5， 7， 6′-三羥基-2′-甲氧基黃酮醇（13）和5， 8-二羥基-6， 7-二甲氧基黃酮（14）。其中，化合物1-3、13、14為首次從該植物中分離得到。（2）活性測(cè)試結(jié)果顯示，化合物4、7、10-12表現(xiàn)出較弱的HepG2細(xì)胞增殖抑制活性，化合物6的細(xì)胞增殖抑制活性和陽(yáng)性對(duì)照（順鉑）活性接近，而化合物5表現(xiàn)出比順鉑更強(qiáng)的細(xì)胞增殖抑制活性。（3）分子對(duì)接結(jié)果顯示，化合物5和化合物6與肝癌靶蛋白VEGF-2均具有良好的結(jié)合力。該研究結(jié)果不僅豐富了半枝蓮的化學(xué)物質(zhì)類群，也為進(jìn)一步深入研究活性化合物抗肝癌的作用機(jī)制提供了參考。

關(guān)鍵詞： 半枝蓮， 化學(xué)成分， 二萜， 肝癌， 細(xì)胞增殖

中圖分類號(hào)：" Q946

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：" A

文章編號(hào)：" 1000-3142（2024）06-1070-12

收稿日期： 2023-10-06" 接受日期： 2023-10-29

基金項(xiàng)目：" 湖北省衛(wèi)生健康委員會(huì)科研項(xiàng)目（WJ2019M258）。

第一作者： 方振峰（1980—），博士，副教授，研究方向?yàn)橹兴幖疤烊凰幬锏幕钚猿煞郑‥-mail）zhenfengfang@163.com。

*通信作者

Chemical constituents of the anti-liver cancer

active site of Scutellaria barbata

FANG Zhenfeng*， CAO Xiaoqin， CHEN Zhongqiang， FANG Hui

（ Department of Pharmacy， School of Medicine， Jianghan University， Wuhan 430056， China ）

Abstract：" In previous study， the ethanol extract of Scutellaria barbata was partitioned with petroleum ether and EtOAc， respectively. The ethyl acetate extract site was subjected to column chromatography over macroporous adsorption resin eluting with gradient ethanol. The 70% ethanol elution fraction exhibited good anti-liver cancer activity. To clarify the active ingredients， the active site was separated and purified by silica gel column chromatography， Sephadex LH-20 column chromatography， preparative TLC， and semi preparative liquid chromatography， etc. Multiple spectroscopic analysis methods were used to identify the structure of the monomer compounds， and" CCK-8 method was used to evaluate the inhibitory activity of all compounds on the proliferation of human liver cancer HepG2 cells in vitro. At the same time， molecular docking technology was used to investigate the binding of the most active compounds with target proteins VEGF-2 and FGFR-1， which were obtained from targeted drug for liver cancer. The results were as follows： （1） A total of 14 compounds were isolated from the active site， including 12 neo-clerodane diterpenoids and 2 flavonoids， which were identified as scuefolide C （1）， 6-acetoxy-7-nicotinoyloxyscutebarbatine G （2）， scutestrigillosin D （3）， scutehenanine D （4）， scutebarbatine A （5）， scutebarbatine B （6）， 7-O-nicotinoyloxyscutebarbatine H （7）， scutebarbatine N （8）， scutebarbatine Y （9）， barbatin A （10）， barbatin B （11）， barbatin D （12）， 5， 7， 6′- trihydroxy-2′-methoxyflavonol （13） and 5， 8-dihydroxy-6， 7-dimethoxyflavone （14）. Compounds 1-3 and 13， 14 were isolated from this plant for the first time. （2） The results of cell proliferation inhibition activity test showed that compounds 4， 7， 10-12 exhibited weaker cell proliferation inhibitory activity against HepG2， and Compound 6 exhibited similar cell proliferation inhibitory activity to the positive control （cisplatin）， while Compound 5 exhibited stronger" cell proliferation inhibitory activity than cisplatin. （3） The molecular docking results showed that Compound 5 and Compound 6 had good binding affinity with target protein VEGF-2， which binded to residues such as GLY-841， LEU-840， ASN-923， ARG-1032 in VEGF-2 protein through hydrogen bonding. At the same time， Compound 5 and Compound 6 exhibited poor binding affinity with target protein FGFR-1. The results of this study not only enrich the chemical groups of S. barbata， but also provide a reference for further study on the mechanism of active compounds against liver cancer.

Key words： Scutellaria barbata， chemical constituents， diterpenoids， liver cancer， cell proliferation

半枝蓮（Scutellaria barbata）作為一種傳統(tǒng)的抗癌中藥，自2005版《中華人民共和國(guó)藥典》收載以后，均被各版本《中華人民共和國(guó)藥典》收錄。半枝蓮為全草入藥，具有清熱解毒等功效（國(guó)家藥典委員會(huì)，2020）。由于半枝蓮中黃酮成分豐富，因此對(duì)其總黃酮成分（Li et al.， 2014；陳明等，2017；Zheng et al.， 2018）、單體黃酮成分（曾劍，2018；雷楠等，2020）的抗腫瘤研究一直是半枝蓮研究的熱點(diǎn)。2010年以后，半枝蓮多糖在抗腫瘤方面的作用引起了人們的關(guān)注（高山等，2017；Sun et al.， 2017；Li et al.， 2019；林霄月，2021），逐漸成為半枝蓮抗腫瘤研究的另一個(gè)熱點(diǎn)。近幾年，半枝蓮中陸續(xù)發(fā)現(xiàn)一些二萜（含二萜生物堿）類化合物對(duì)鼻咽癌、口腔表皮樣癌、肺癌等表現(xiàn)出較好的活性，引起了國(guó)內(nèi)外學(xué)者的廣泛關(guān)注（牛淑睿等，2021；顧永哲等，2023）。

目前，對(duì)半枝蓮二萜類化學(xué)成分及其抗肝癌的研究很少。在前期研究中，本課題組發(fā)現(xiàn)半枝蓮全草乙酸乙酯萃取部位大孔樹脂70%乙醇洗脫部位具有較好的抗肝癌活性（劉欣等，2023），并且通過(guò)化學(xué)鑒別反應(yīng)初步推測(cè)其主要化學(xué)成分可能為二萜生物堿類。因此，為進(jìn)一步明確半枝蓮抗肝癌的活性成分，為肝癌藥物研制提供可能的先導(dǎo)化合物，本課題組對(duì)半枝蓮乙酸乙酯萃取部位大孔樹脂70%乙醇洗脫部位進(jìn)行了系統(tǒng)分離，并對(duì)單體化合物進(jìn)行了人肝癌HepG2細(xì)胞增殖抑制活性測(cè)試。同時(shí)，利用分子對(duì)接考察了活性較好的化合物與肝癌靶標(biāo)的結(jié)合情況，為進(jìn)一步深入研究活性化合物抗肝癌的作用機(jī)制提供參考。

1" 材料與方法

1.1 材料

半枝蓮購(gòu)自亳州中藥材市場(chǎng)，產(chǎn)地為河北省，經(jīng)江漢大學(xué)醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系張濤教授鑒定為唇形科黃芩屬植物半枝蓮（Scutellaria barbata）的干燥全草。

1.2 儀器和試劑

Bruker DRX-600 MHz核磁共振儀（德國(guó)布魯克公司）；安捷倫UPLC/Q-TOF 6230型液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀；創(chuàng)新通恒LC 3000半制備型高效液相色譜儀（北京創(chuàng)新通恒色譜技術(shù)有限公司）；CO2培養(yǎng)箱、全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀（Thermo Fisher）；半制備型反相YMC-Pack ODS-A色譜柱 （ 250 mm × 20 mm， 10

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m） 、分析型反相YMC C18色譜柱 （ 250 mm × 4. 6 mm， 5

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m） （日本YMC公司）；Sephadex LH-20（英國(guó)Amersham Pharmacia Biotech AB 公司）；色譜甲醇、乙腈（美國(guó)賽默飛世爾科技公司）；分析純?cè)噭▏?guó)藥集團(tuán)藥業(yè)股份有限公司）。順鉑（Pt，65%）購(gòu)自上海源葉生物科技有限公司；人肝癌細(xì)胞HepG2細(xì)胞株由江漢大學(xué)醫(yī)學(xué)院提供；胎牛血清、同仁化學(xué)CCK-8試劑盒購(gòu)自賽因百奧生物技術(shù)（北京）有限公司；DMEM高糖培養(yǎng)基、0.01 mol·L-1 PBS、0.25%胰蛋白酶消化液均購(gòu)自北京索萊寶生物科技有限公司。

1.3 提取和分離

取干燥半枝蓮全草約10 kg， 粉碎后用95%乙醇回流提取3次，合并提取液，減壓濃縮得浸膏約1 279 g。浸膏加適量水使其混懸分散，依次用石油醚（60～90

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C）、乙酸乙酯等體積萃取，回收溶劑得到石油醚、乙酸乙酯2個(gè)萃取部位。取乙酸乙酯萃取部位（約232 g）加入適量水超聲溶解，使溶液中無(wú)明顯顆粒狀，過(guò)AB-8型大孔吸附樹脂（約2.5 kg），用大量水洗至水溶液無(wú)明顯渾濁，隨后用10%

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90%的乙醇進(jìn)行梯度洗脫，每次增加10%乙醇，每個(gè)梯度洗脫3個(gè)柱床體積，收集各濃度洗脫溶液并減壓回收溶劑得到9個(gè)部分（Fr.A-Fr.I）。根據(jù)前期活性測(cè)試結(jié)果，選定70%乙醇洗脫部位（Fr.G）作為研究對(duì)象。Fr.G（約8.52 g）經(jīng)硅膠柱色譜，以石油醚-丙酮（18∶1、12∶1、7∶1、3∶1、1∶1，V/V）進(jìn)行梯度洗脫，得到5個(gè)流分（G1-G5）。G1（約0.75 g）經(jīng)過(guò)硅膠柱色譜，以二氯甲烷-乙酸乙酯（12∶1、7∶1、3∶1，V/V）進(jìn)行梯度洗脫，合并得3個(gè)流分（G1.1-G1.3），其中流分G1.2（110 mg）經(jīng)半制備液相色譜分離，以MeCN-H2O（78∶22，V/V）洗脫，得到化合物1（13 mg）。流分G2（0.85 g）經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜（100 g），以CH2Cl2-MeOH （3∶1，V/V）洗脫，得到3個(gè)流分（G2.1-G2.3）。其中流分G2.2（約0.12 g）經(jīng)制備TLC［V（氯仿）∶V（丙酮）=9∶2］分離得到化合物2（14 mg）；流分G2.3（約0.11 g）經(jīng)制備TLC［V（氯仿）∶V（丙酮）=9∶2］分離得到化合物3（23 mg）。流分G3（2.3 g）經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜（200 g），以CH2Cl2-MeOH （1∶1，V/V）洗脫，得到G3.1-G3.7共7個(gè)部分。G3.1（約90 mg）經(jīng)反相半制備HPLC分離，以MeOH-H2O（53∶47，V/V）洗脫，得到化合物10（8 mg）；G3.2（約112 mg）經(jīng)反相半制備HPLC分離，以MeOH-H2O（54∶46，V/V）洗脫，得到化合物11（19 mg）；G3.3（約235 mg）經(jīng)反相半制備HPLC分離，以MeOH-H2O（55∶45，V/V）洗脫，得到化合物4（39 mg）和化合物7（14 mg）；G3.4（約0.36 g）經(jīng)反相半制備HPLC分離，以MeOH-H2O（55∶45，V/V）洗脫，得到化合物6（19 mg）和化合物12（24 mg）；G3.5（約80 mg）經(jīng)反相半制備HPLC分離，以MeOH-H2O（54∶46，V/V）洗脫，得到化合物8（11 mg）。流分G3（約0.91 g）經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜（100 g），以CH2Cl2-MeOH （1∶1，V/V）洗脫，得到3個(gè)流分（G3.1-G3.3）。G3.1（約0.18 g）經(jīng)反相制備HPLC分離，以MeOH-0.1% TFA（52∶46，V/V）洗脫，得到化合物13（2.1 mg）和化合物14（2.9 mg）；G3.2（約0.29 g）經(jīng)反相制備HPLC分離，以MeOH-H2O（54∶46

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60∶40，V/V）進(jìn)行梯度洗脫，得到化合物5（27 mg）和化合物9（19 mg）。

1.4 人肝癌HepG2細(xì)胞增殖抑制活性

參考音金萍和卓少元（2021）的方法，取對(duì)數(shù)期的HepG2細(xì)胞按每孔5×103個(gè)的密度接種在96孔板中并孵育過(guò)夜。待細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)完整后，除去培養(yǎng)基，用不同濃度的單體化合物和陽(yáng)性對(duì)照物（順鉑）（0.625、1.25、2.5、5、10、20、40、80、160 μmol·L-1）處理細(xì)胞48 h。再向每個(gè)孔中加入10 μL CCK-8試劑，并將細(xì)胞在37 ℃下孵育1 h。另設(shè)對(duì)照組（含細(xì)胞、純培養(yǎng)基和CCK-8溶液）、空白組（含純培養(yǎng)基和CCK-8溶液），每組平行6次。按照CCK-8試劑盒說(shuō)明書檢測(cè)細(xì)胞增殖抑制活性，采用酶標(biāo)儀在450 nm處記錄OD值，計(jì)算細(xì)胞增殖抑制率，并據(jù)此計(jì)算藥物對(duì)細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度（IC50）值。

1.5 分子對(duì)接

在蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//www.rcsb.org/）中選取肝癌靶標(biāo)VEGF-2蛋白（ID：3WZD）、FGFR-1（ID：5ZV2），用pymol進(jìn)行蛋白和特異性配體樂(lè)伐替尼（lenvatinib，LEV）的分離，并去掉蛋白里的水分子，利用AutoDock 1.5.6對(duì)蛋白和特異性配體進(jìn)行加氫、加電荷處理，并轉(zhuǎn)換格式為PDBQT格式，同時(shí)確定蛋白VEGF-2和FGFR-1的活性口袋，記錄“grid”參數(shù)。在PubChem數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//pubchem.ncbi.nlm.nih.gov）中下載活性化合物的3D結(jié)構(gòu)，通過(guò)AutoDock 1.5.6進(jìn)行加氫、加電荷處理，并轉(zhuǎn)換為PDBQT格式。利用Autodock Vina 1.0對(duì)活性化合物、特異性配體和肝癌靶標(biāo)進(jìn)行分子對(duì)接，考察化合物和肝癌靶標(biāo)的結(jié)合情況。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

利用SPSS 22.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，半數(shù)抑制濃度（IC50）數(shù)值均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（ｘ±ｓ）形式表示。

2" 結(jié)果與分析

2.1 化合物的結(jié)構(gòu)鑒定

利用各種色譜分離手段，從半枝蓮抗肝癌活性部位共分離得到14個(gè)化合物。通過(guò)1H-NMR、13C-NMR、MS等波譜分析方法及文獻(xiàn)數(shù)據(jù)對(duì)比鑒定了所有化合物結(jié)構(gòu)，化合物1-14的結(jié)構(gòu)式如圖1所示。

化合物1" 白色粉末。ESI-MS m/z： 505.3" ［M+H］+， 推測(cè)化合物1的分子量為504，結(jié)合氫譜和碳譜數(shù)據(jù)，推測(cè)其分子式為C28H40O8。1H-NMR （CDCl3， 600 MHz） δH： 1.18 （1H， m， H-1a）， 1.55 （1H， m， H-1b）， 1.28 （1H， m， H-2a）， 1.66 （1H， m， H-2b）， 2.13 （1H， m， H-3a）， 2.55 （1H， br d， J=18.1 Hz， H-3b）， 6.22 （1H， d， J=10.5 Hz， H-6）， 5.57 （1H， d， J=10.5 Hz， H-7）， 3.14 （1H， br t， J=8.4 Hz， H-10）， 1.41 （1H， m， H-11a）， 1.66 （1H， m， H-11b）， 1.64 （1H， m， H-12a）， 1.81 （1H， m， H-12b）， 2.60 （1H， d， J=16.8 Hz， H-14a）， 3.02 （1H， d， J=16.8 Hz， H-14b）， 4.28 （1H， d， J=9.0 Hz， H-16a）， 4.36 （1H， d， J = 9.0 Hz， H-16b）， 1.26 （3H， s， H-17）， 4.67 （2H， br s， H-18）， 0.68 （3H， s， H-20）， 7.07 （1H， m， H-3′）， 1.56 （1H， br d， J=7.3 Hz， H-4′）， 1.94 （1H， br s， H-5′）， 2.63 （1H， m， H-2″）， 1.19 （1H， br d， J=7.2 Hz， H-3″）， 1.14 （1H， br d， J=7.2 Hz， H-4″）。13C-NMR （CDCl3， 150 MHz） δC： 23.9 （C-1）， 22.9 （C-2）， 30.1 （C-3）， 137.5 （C-4）， 127.7 （C-5）， 74.3 （C-6）， 76.5 （C-7）， 81.2 （C-8）， 40.9 （C-9）， 36.8 （C-10）， 25.9 （C-11）， 28.5 （C-12）， 77.5 （C-13）， 44.8 （C-14）， 174.5 （C-15）， 77.3 （C-16）， 21.1 （C-17）， 61.6 （C-18）， 17.9 （C-20）， 166.8 （C-1′）， 129.1（C-2′）， 138.6 （C-3′）， 14.2 （C-4′）， 12.5 （C-5′）， 176.5 （C-1″）， 34.8 （C-2″）， 19.6 （C-3″）， 19.1 （C-4″）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)（Kurimoto et al.， 2015）報(bào)道的基本一致，故鑒定化合物1為scutefolide C。

化合物2" 白色粉末。ESI-MS m/z： 619.2" ［M+H］+， 641.3" ［M + Na］+，推測(cè)化合物2的分子量為618，結(jié)合氫譜和碳譜數(shù)據(jù)，推測(cè)其分子式為C34H38N2O9。1H-NMR （CDCl3， 600 MHz） δH： 1.72 （1H， m， H-1a）， 2.06 （1H， m， H-1b）， 2.72 （2H， m， H-2）， 5.45 （1H， br s， H-3）， 5.73 （1H， d， J=10.5 Hz， H-6）， 5.47 （1H， d， J=10.5 Hz， H-7）， 2.76 （1H， dd， J=12.5， 3.0 Hz， H-10）， 5.94（1H， dd， J=12.4， 4.5 Hz， H-11）， 1.78 （1H， m， H-12a）， 2.30 （1H， m， H-12b）， 2.61（1H， d， J=16.5 Hz， H-14a）， 3.16 （1H， d， J=16.5 Hz， H-14b）， 4.13 （1H， d， J=8.9 Hz， H-16a）， 4.19 （1H， d， J = 8.9 Hz， H-16b）， 1.21 （3H， s， H-17）， 1.75 （3H， s， H-18）， 1.53 （3H， s， H-19）， 1.26 （3H， s， H-20）， 9.24 （1H， br s， H-3′）， 8.80 （1H， br d， J=4.8 Hz， H-5′）， 7.48 （1H， dd， J=7.8， 4.8 Hz， H-6′）， 8.33 （1H， br d， J=7.8 Hz， H-7′）， 9.19 （1H， br s， H-3″）， 8.78 （1H， br d， J=4.8 Hz， H-5″）， 7.41 （1H， dd， J=7.8， 4.8 Hz， H-6″）， 8.28 （1H， br d， J=7.8 Hz， H-7″）， 1.81 （3H， s， CH3-CO-）。13C-NMR （CDCl3， 150 MHz） δC： 28.9 （C-1）， 32.9 （C-2）， 121.1 （C-3）， 145.5 （C-4）， 45.7 （C-5）， 73.3 （C-6）， 75.5 （C-7）， 81.7 （C-8）， 38.9 （C-9）， 44.3 （C-10）， 71.9 （C-11）， 29.5 （C-12）， 77.8 （C-13）， 44.9 （C-14）， 173.5 （C-15）， 76.9 （C-16）， 21.2 （C-17 ）， 20.6 （C-18）， 17.3 （C-19）， 20.3 （C-20）， 164.5 （C-1′）， 126.1（C-2′）， 150.9 （C-3′）， 155.2 （C-5′）， 123.5 （C-6′）， 137.5 （C-7′）， 164.3 （C-1″）， 126.4 （C-2″）， 151.6 （C-3″）， 155.1 （C-5″）， 123.8 （C-6″）， 138.5 （C-7″）， 171.8 （CH3-CO-）， 22.3 （CH3-CO-）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)（李桂生等，2015）報(bào)道的基本一致，故鑒定化合物2為6-乙酰氧基-7-煙酸酰氧基半枝蓮堿G。

化合物3" 白色粉末。ESI-MS m/z： 576.3" ［M+H］+， 推測(cè)化合物3的分子量為575，結(jié)合氫譜和碳譜數(shù)據(jù)，推測(cè)其分子式為C33H37NO8。1H-NMR （CDCl3， 600 MHz） δH： 1.81 （1H， m， H-1a）， 2.55 （1H， m， H-1b）， 2.15 （2H， m， H-2）， 5.33 （1H， br s， H-3）， 5.33 （1H， d， J=10.2 Hz， H-6）， 3.62 （1H， d， J=10.2 Hz， H-7）， 2.51 （1H， d， J=12.5 Hz， H-10）， 5.69 （1H， dd， J=12.6， 4.2 Hz， H-11）， 2.15 （1H， m， H-12a）， 2.26 （1H， m， H-12b）， 2.87 （1H， d， J=18.1 Hz， H-14a）， 2.94 （1H， d， J=18.1 Hz， H-14b）， 4.23 （1H， d， J=9.6 Hz， H-16a）， 4.42 （1H， d， J = 9.6 Hz， H-16b）， 1.53 （3H， s， H-17）， 1.64 （3H， s， H-18）， 1.39 （3H， s， H-19）， 1.18 （3H， s， H-20）， 9.24 （1H， br s， H-3′）， 8.84 （1H， br d， J=4.8 Hz， H-5′）， 7.54 （1H， dd， J=7.8， 4.8 Hz， H-6′）， 8.33 （1H， br d， J=7.8 Hz， H-7′）， 8.04 （2H， br d， J=7.8 Hz， H-3″， 7″）， 7.41 （2H， br d， J=7.8 Hz， H-4″， 6″）， 7.51 （1H， dd， J=7.8， 4.8 Hz， H-5″）。13C-NMR （150 MHz， CDCl3） δC： 18.7 （C-1）， 26.9 （C-2）， 123.1 （C-3）， 141.7 （C-4）， 42.7 （C-5）， 77.5 （C-6）， 75.5 （C-7）， 84.7 （C-8）， 43.9 （C-9）， 40.8 （C-10）， 75.9 （C-11）， 35.5 （C-12）， 77.2 （C-13）， 42.9 （C-14）， 173.5 （C-15）， 78.9 （C-16）， 21.0 （C-17 ）， 17.4 （C-18）， 17.7 （C-19）， 17.9 （C-20）， 165.5 （C-1′）， 126.3（C-2′）， 150.9 （C-3′）， 154.2 （C-5′）， 123.6 （C-6′）， 137.9 （C-7′）， 167.6 （C-1″）， 130.4 （C-2″）， 130.3 （C-3″， 7″）， 128.8 （C-4″， 6″）， 133.5 （C-5″）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)（Dai et al.， 2016）報(bào)道的基本一致，故鑒定化合物3為scutestrigillosin D。

化合物4" 黃色粉末。ESI-MS： m/z： 574.2" ［M+H］+， 596.4" ［M + Na］+， 推測(cè)化合物4的分子量為573，結(jié)合氫譜和碳譜數(shù)據(jù)，推測(cè)其分子式為C33H35NO8。1H-NMR （CDCl3， 600 MHz） δH： 1.84 （1H， m， H-1a）， 2.11 （1H， m， H-1b）， 2.19 （2H， m， H-2）， 5.31 （1H， br s， H-3）， 5.81 （1H， d， J=10.4 Hz， H-6）， 5.68 （1H， d， J=10.4 Hz， H-7）， 2.56 （1H， dd， J=12.6， 2.2 Hz， H-10）， 5.58 （1H， br d， J=10.4 Hz， H-11）， 2.74 （1H， dd， J=13.8， 10.4 Hz， H-12a）， 3.36 （1H， br d， J=13.8 Hz， H-12b）， 4.50 （1H， d， J=16.8 Hz， H-16a）， 4.75 （1H， d， J=16.8 Hz， H-16b）， 1.34 （3H， s， H-17）， 1.62 （3H， s， H-18）， 1.48 （3H， s， H-19）， 1.06 （3H， s， H-20）， 8.97 （1H， br s， H-3′）， 8.69 （1H， br d， J=4.2 Hz， H-5′）， 7.26 （1H， dd， J=8.2， 4.2 Hz， H-6′）， 8.09 （1H， br d， J=8.2 Hz， H-7′）， 7.36 （2H， m， H-3″， 7″）， 7.26 （2H， m， H-4″， 6″）， 7.40 （1H， br t， J = 8.1 Hz， H-5″）。13C-NMR （CDCl3， 150 MHz） δC： 19.7 （C-1）， 25.9 （C-2）， 123.5 （C-3）， 141.2 （C-4）， 43.6 （C-5）， 75.4 （C-6）， 77.5 （C-7）， 78.5 （C-8）， 47.5 （C-9）， 41.1 （C-10）， 75.5 （C-11）， 29.0 （C-12）， 130.5 （C-13）， 138.9 （C-14）， 171.3 （C-15）， 70.3 （C-16）， 22.3 （C-17 ）， 21.2 （C-18）， 17.7 （C-19）， 17.1 （C-20）， 164.5 （C-1′）， 126.0 （C-2′）， 150.7 （C-3′）， 152.2 （C-5′）， 123.1 （C-6′）， 138.2 （C-7′）， 166.3 （C-1″）， 130.2 （C-2″）， 129.5 （C-3″， 7″）， 128.7 （C-4″， 6″）， 133.5 （C-5″）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)（Dai et al.， 2009）報(bào)道的基本一致，故鑒定化合物4為scutehenanine D。

化合物5" 黃色粉末。ESI-MS m/z： 559.2" ［M+H］+， 推測(cè)化合物5的分子量為558，結(jié)合氫譜和碳譜數(shù)據(jù)，推測(cè)其分子式為C32H34N2O7。1H-NMR （CDCl3， 600 MHz） δH： 1.39 （1H， m， H-1a）， 1.71 （1H， m， H-1b）， 2.07 （2H， m， H-2）， 5.27 （1H， s， H-3）， 5.96 （1H， d， J=10.4 Hz， H-6）， 5.77 （1H， d， J=10.4 Hz， H-7）， 2.42 （1H， d， J=17.3 Hz， H-10）， 6.43 （1H， d， J=17.3 Hz， H-11）， 6.46 （1H， d， J=16.8 Hz， H-12）， 5.94 （1H， s， H-14）， 5.04 （1H， s， H-16）， 1.08 （3H， s， H-17）， 1.59 （3H， s， H-18）， 1.47 （3H， s， H-19）， 1.30 （3H， s， H-20）， 8.97 （1H， d， J=1.8 Hz， H-3′）， 8.66 （1H， dd， J=4.6， 1.8 Hz， H-5′）， 7.25 （1H， dd， J=8.2， 4.6 Hz， H-6′）， 8.02 （1H， dt， J=8.2， 1.8 Hz， H-7′）， 9.03 （1H， d， J=1.8 Hz， H-3″）， 8.68 （1H， dd， J=4.6， 1.8 Hz， H-5″）， 7.29 （1H， dd， J=8.2， 4.9 Hz， H-6″）， 8.09 （1H， dt， J=8.2， 1.8 Hz， H-7″）。13C-NMR （CDCl3， 150 MHz） δC： 19.5 （C-1）， 26.5 （C-2）， 123.4 （C-3）， 140.8 （C-4）， 43.3 （C-5）， 76.1 （C-6）， 76.5 （C-7）， 77.1 （C-8）， 48.5 （C-9）， 42.6 （C-10）， 146.6 （C-11）， 122.3 （C-12）， 162.4 （C-13）， 115.3 （C-14）， 174.3 （C-15）， 70.2 （C-16）， 22.7 （C-17）， 20.2 （C-18）， 17.8 （C-19）， 15.9 （C-20）， 165.2 （C-1′）， 125.9 （C-2′）， 151.1 （C-3′）， 153.6 （C-5′）， 123.6 （C-6′）， 137.0 （C-7′）， 165.4 （C-1″）， 124.5 （C-2″）， 151.5 （C-3″）， 153.6 （C-5″）， 123.3 （C-6″）， 137.9 （C-7″）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)（Nguyen et al.， 2009）報(bào)道的基本一致，故鑒定化合物5為半枝蓮堿A。

化合物6" 白色粉末。ESI-MS m/z： 558.2" ［M+H］+， 556.1" ［M-H ］-， 推測(cè)化合物6的分子量為557，結(jié)合氫譜和碳譜數(shù)據(jù)，推測(cè)其分子式為C33H35NO7。1H-NMR （CDCl3， 600 MHz） δH： 1.36 （1H， m， H-1a）， 1.67 （1H， m， H-1b）， 2.06 （2H， m， H-2）， 5.27 （1H， br s， H-3）， 5.91 （1H， d， J=10.7 Hz， H-6）， 5.75（1H， d， J=10.7 Hz， H-7）， 2.37（1H， br d， J=12.0 Hz， H-10）， 6.49 （1H， d， J=16.8 Hz， H-11）， 6.39 （1H， d， J=16.8 Hz， H-12）， 5.98 （1H， br s， H-14）， 5.02 （2H， br s， H-16）， 1.09 （3H， s， H-17）， 1.59 （3H， s， H-18）， 1.46 （3H， s， H-19）， 1.29 （3H， s， H-20）， 8.99 （1H， br s， H-3′），8.66 （1H， br d， J=4.7 Hz， H-5′）， 7.29 （1H， dd， J=7.9， 4.7 Hz， H-6′）， 8.07 （1H， br d， J=7.9 Hz， H-7′）， 7.86 （2H， m， H-3″， 7″）， 7.35 （2H， m， H-4″， 6″）， 7.49 （1H， br t， J=7.8 Hz， H-5″）。13C-NMR （CDCl3， 150 MHz） δC： 19.1 （C-1）， 26.7 （C-2）， 123.6 （C-3）， 140.9 （C-4）， 43.5 （C-5）， 76.5 （C-6）， 75.9 （C-7）， 77.2 （C-8）， 48.5 （C-9）， 42.7 （C-10）， 146.6 （C-11）， 122.1 （C-12）， 162.1 （C-13）， 115.3 （C-14）， 174.4 （C-15）， 70.8 （C-16）， 22.9 （C-17）， 20.6 （C-18）， 17.7 （C-19）， 15.3 （C-20）， 164.9 （C-1′）， 125.7 （C-2′）， 150.1 （C-3′）， 153.5 （C-5′）， 123.4 （C-6′）， 137.1 （C-7′）， 165.5 （C-1″）， 128.9 （C-2″）， 130.3 （C-3″， 7″）， 128.4 （C-4″， 6″）， 133.6 （C-5″）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)（Dai et al.， 2006）報(bào)道的基本一致，故鑒定化合物6為半枝蓮堿B。

化合物7" 白色粉末。ESI-MS m/z： 575.2" ［M+H］+， 推測(cè)化合物7的分子量為574，結(jié)合氫譜和碳譜數(shù)據(jù)，推測(cè)其分子式為C32H34N2O8。1H-NMR （CDCl3， 600 MHz） δH： 1.85 （1H， m， H-1a）， 2.13 （1H， m， H-1b）， 2.21 （2H， m， H-2）， 5.29 （1H， br s， H-3）， 5.91 （1H， d， J=10.4 Hz， H-6）， 5.73 （1H， d， J=10.4 Hz， H-7）， 2.53 （1H， dd， J=12.0， 1.8 Hz， H-10）， 5.57 （1H， br d， J=10.4 Hz， H-11）， 2.72 （1H， dd， J=14.4， 10.4 Hz， H-12a）， 3.42 （1H， br d， J=14.4 Hz， H-12b）， 4.57 （1H， d， J=16.8 Hz， H-16a）， 4.78 （1H， d， J=16.8 Hz， H-16b）， 1.36 （3H， s， H-17）， 1.59 （3H， s， H-18）， 1.48 （3H， s， H-19）， 1.05 （3H， s， H-20）， 9.06 （1H， br s， H-3′）， 8.71 （1H， br d， J=4.8 Hz， H-5′）， 7.29 （1H， dd， J=8.1， 4.8 Hz， H-6′）， 8.11 （1H， br d， J=8.1 Hz， H-7′）， 8.99（1H， br s， H-3″）， 8.69 （1H， br d， J=4.8 Hz， H-5″）， 7.29 （1H， dd， J=7.8， 4.6 Hz， H-6″）， 8.09 （1H， br d， J=7.8 Hz， H-7″）。13C-NMR （CDCl3， 150 MHz） δC： 19.5 （C-1）， 26.5 （C-2）， 123.6 （C-3）， 141.1 （C-4）， 43.1 （C-5）， 76.5 （C-6）， 77.4 （C-7）， 78.2 （C-8）， 47.5 （C-9）， 40.7 （C-10）， 75.9 （C-11）， 29.1 （C-12）， 130.1 （C-13）， 139.3 （C-14）， 171.7 （C-15）， 70.3 （C-16）， 21.9 （C-17）， 20.6 （C-18）， 17.4 （C-19）， 16.6 （C-20）， 164.8 （C-1′）， 126.7 （C-2′）， 150.4 （C-3′）， 153.5 （C-5′）， 123.5 （C-6′）， 137.8 （C-7′）， 164.8 （C-1″）， 125.9 （C-2″）， 150.3 （C-3″）， 153.4 （C-5″）， 123.6 （C-6″）， 137.6 （C-7″）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)（Dai et al.， 2007）報(bào)道的基本一致，故鑒定化合物7為7-煙酸酰氧基半枝蓮堿H。

化合物8" 黃色粉末。ESI-MS m/z： 535.2" ［M+H］+， 533.1" ［ M-H ］-， 推測(cè)化合物8的分子量為534，結(jié)合氫譜和碳譜數(shù)據(jù)，推測(cè)其分子式為C30H34N2O7。1H-NMR （CDCl3， 600 MHz） δH： 1.36 （1H， m， H-1a）， 1.68 （1H， m， H-1b）， 2.08 （2H， m， H-2）， 5.25 （1H， br s， H-3）， 5.94 （1H， d， J=10.2 Hz， H-6）， 5.63 （1H， d， J=10.2 Hz， H-7）， 2.51 （1H， dd， J=12.6， 2.1 Hz， H-10）， 7.26 （1H， br d， J=16.8 Hz， H-11）， 6.21 （1H， d， J=16.8 Hz， H-12）， 1.59 （3H， s， H-14）， 1.45 （1H， s， H-15）， 1.26 （3H， s， H-16）， 1.09 （3H， s， H-17）， 4.54 （2H， br s， H-18）， 9.06 （1H， br s， H-3′）， 8.69 （1H， br d， J=4.8 Hz， H-5′）， 7.27 （1H， dd， J=7.9， 4.8 Hz， H-6′）， 8.14 （1H， br d， J=7.9 Hz， H-7′）， 9.02 （1H， br s， H-3″）， 8.68 （1H， br d， J=4.8 Hz， H-5″）， 7.28 （1H， dd， J=7.8， 4.8 Hz， H-6″）， 8.08 （1H， br d， J=7.8 Hz， H-7″）。13C-NMR （CDCl3， 150 MHz） δC： 19.4 （C-1）， 26.3 （C-2）， 123.5 （C-3）， 140.7 （C-4）， 43.3 （C-5）， 76.2 （C-6）， 76.4 （C-7）， 77.2 （C-8）， 48.5 （C-9）， 42.7 （C-10）， 154.9 （C-11）， 126.7 （C-12）， 198.5 （C-13）， 20.3 （C-14）， 17.5 （C-15）， 15.3 （C-16）， 22.9 （C-17）， 66.8 （C-18）， 164.8 （C-1′）， 124.7 （C-2′）， 150.7 （C-3′）， 153.5 （C-5′）， 123.9 （C-6′）， 137.2 （C-7′）， 164.7 （C-1″）， 125.9 （C-2″）， 150.7 （C-3″）， 153.5 （C-5″）， 123.6 （C-6″）， 137.5 （C-7″）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)（Dai et al.， 2011）報(bào)道的基本一致，故鑒定化合物8為半枝蓮堿N。

化合物9" 白色粉末。ESI-MS m/z： 558.1" ［M+H］+， 580.2" ［ M+Na ］+， 推測(cè)化合物9的分子量為557，結(jié)合氫譜和碳譜數(shù)據(jù)，推測(cè)其分子式為C33H35NO7。1H-NMR （CDCl3， 600 MHz） δH： 1.36 （1H， m， H-1a）， 1.67 （1H， m， H-1b）， 2.07 （2H， m， H-2）， 5.25 （1H， br s， H-3）， 5.91 （1H， d， J=10.2 Hz， H-6）， 5.75（1H， d， J=10.2 Hz， H-7）， 2.39 （1H， br d， J=12.4 Hz， H-10）， 6.44 （1H， d， J=16.8 Hz， H-11）， 6.48 （1H， d， J=16.8 Hz， H-12 ）， 5.96 （1H， br s， H-14）， 5.02 （2H， br s， H-16）， 1.06 （3H， s， H-17）， 1.59 （3H， s， H-18）， 1.47 （3H， s， H-19）， 1.28 （3H， s， H-20）， 9.02 （1H， br d， J=1.8 Hz， H-3′），8.64 （1H， dd， J=4.8， 1.8 Hz， H-5′）， 7.24 （1H， dd， J=7.8， 4.7 Hz， H-6′）， 8.07 （1H， br d， J=7.8 Hz， H-7′）， 7.81 （2H， d， J=8.2 Hz， H-3″， 7″）， 7.28 （2H， dd， J=8.2， 7.4 Hz， H-4″， 6″）， 7.39 （1H， br t， J=7.4 Hz， H-5″）。13C-NMR （CDCl3， 150 MHz） δC： 19.5 （C-1）， 26.3 （C-2）， 123.3 （C-3）， 140.9 （C-4）， 43.5 （C-5）， 75.5 （C-6）， 76.9 （C-7）， 77.1 （C-8）， 48.5 （C-9）， 42.9 （C-10）， 146.9 （C-11）， 122.3 （C-12）， 162.5 （C-13）， 115.1 （C-14）， 174.6 （C-15）， 70.4 （C-16）， 22.8 （C-17）， 20.5 （C-18）， 17.6 （C-19）， 15.3 （C-20）， 164.9 （C-1′）， 125.4 （C-2′）， 150.7 （C-3′）， 153.6 （C-5′）， 123.5 （C-6′）， 137.5 （C-7′）， 165.8 （C-1″）， 129.9 （C-2″）， 129.5 （C-3″， 7″）， 128.5 （C-4″， 6″）， 133.3 （C-5″）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)（Wang et al.， 2010）報(bào)道的基本一致，故鑒定化合物9為半枝蓮堿Y。

化合物10" 白色粉末。ESI-MS m/z： 575.3" ［M+H］+， 推測(cè)化合物10的分子量為574，結(jié)合氫譜和碳譜數(shù)據(jù)，推測(cè)其分子式為C34H38O8。1H-NMR （CDCl3， 600 MHz） δH： 1.66 （1H， m， H-1a）， 2.06 （1H， m， H-1b）， 2.19 （2H， m， H-2）， 5.34 （1H， br s， H-3）， 5.68 （1H， d， J=10.1 Hz， H-6）， 3.75 （1H， d， J=10.1 Hz， H-7）， 2.88 （1H， dd， J=12.6， 2.6 Hz， H-10）， 5.83 （1H， dd， J=12.0， 4.3 Hz， H-11）， 1.75 （1H， m， H-12a）， 2.55 （1H， m， H-12b）， 2.56 （1H， d， J=17.8 Hz， H-14a）， 3.17 （1H， d， J=17.8 Hz， H-14b）， 4.05 （1H， d， J=8.8 Hz， H-16a）， 4.22 （1H， d， J=8.8 Hz， H-16b）， 1.12 （3H， s， H-17）， 1.69 （3H， s， H-18）， 1.37 （3H， s， H-19）， 1.09 （3H， s， H-20）， 7.84 （2H， m， H-3′， 7′）， 7.37 （2H， m， H-4′， 6′）， 7.42 （1H， br t， J=7.8 Hz， H-5′）， 7.77 （2H， m， H-3″， 7″）， 7.48 （2H， m， H-4″， 6″）， 7.45 （1H， br t， J=7.8 Hz， H-5″）。13C-NMR （CDCl3， 150 MHz） δC： 29.1 （C-1）， 33.5 （C-2）， 121.6 （C-3）， 143.9 （C-4）， 44.5 （C-5）， 73.3 （C-6）， 70.4 （C-7）， 83.2 （C-8）， 39.5 （C-9）， 43.7 （C-10）， 72.6 （C-11）， 29.7 （C-12）， 77.1 （C-13）， 43.6 （C-14）， 174.4 （C-15）， 76.8 （C-16）， 19.9 （C-17）， 20.5 （C-18）， 16.7 （C-19）， 22.4 （C-20）， 166.9 （C-1′）， 128.7 （C-2′）， 130.1 （C-3′， 7′）， 129.5 （C-4′， 6′）， 133.5 （C-5′）， 168.5 （C-1″）， 129.6 （C-2″）， 130.2 （C-3″， 7″）， 128.5 （C-4″， 6″）， 133.8 （C-5″）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)（Dai et al.， 2006）報(bào)道的基本一致，故鑒定化合物10為barbatin A。

化合物11" 白色粉末。ESI-MS m/z： 575.3" ［M+H］+， 推測(cè)化合物11的分子量為574，結(jié)合氫譜和碳譜數(shù)據(jù)，推測(cè)其分子式為C34H38O8。1H-NMR （CDCl3， 600 MHz） δH： 1.86 （1H， m， H-1a）， 2.47 （1H， m， H-1b）， 1.46 （1H， m， H-2a）， 2.08 （1H， m， H-2b）， 2.15 （1H， m， H-3a）， 2.31 （1H， m， H-3b）， 5.71 （1H， d， J=10.8 Hz， H-6）， 5.65（1H， d， J=10.8 Hz， H-7）， 2.37 （1H， dd， J=12.6， 2.0 Hz， H-10）， 4.37 （1H， dd， J=12.4， 4.1 Hz， H-11）， 1.59 （1H， m， H-12a）， 2.16 （1H， m， H-12b）， 2.87 （1H， d， J=17.0 Hz， H-14a）， 3.05 （1H， d， J=17.0 Hz， H-14b）， 4.25 （1H， d， J=9.0 Hz， H-16a）， 4.41 （1H， d， J=9.0 Hz， H-16b）， 1.11 （3H， s， H-17）， 4.64 （2H， br s， H-18）， 1.45 （3H， s， H-19）， 1.59 （3H， s， H-20）， 7.94 （2H， m， H-3′， 7′）， 7.56 （2H， m， H-4′， 6′）， 7.44 （1H， br t， J=7.8 Hz， H-5′）， 7.96 （2H， m， H-3″， 7″）， 7.65 （2H， m， H-4″， 6″）， 7.49 （1H， br t， J=7.8 Hz， H-5″）。13C-NMR （CDCl3， 150 MHz） δC： 22.3 （C-1）， 28.5 （C-2）， 32.6 （C-3）， 154.7 （C-4）， 45.9 （C-5）， 74.3 （C-6）， 70.1 （C-7）， 84.8 （C-8）， 43.7 （C-9）， 43.4 （C-10）， 74.6 （C-11）， 31.6 （C-12）， 77.7 （C-13）， 42.6 （C-14）， 174.2 （C-15）， 79.4 （C-16）， 16.7 （C-17）， 104.5 （C-18）， 17.7 （C-19）， 20.4 （C-20）， 166.7 （C-1′）， 128.8 （C-2′）， 130.3 （C-3′， 7′）， 129.2 （C-4′， 6′）， 133.2 （C-5′）， 167.9 （C-1″）， 129.5 （C-2″）， 129.9 （C-3″， 7″）， 128.3 （C-4″， 6″）， 133.7 （C-5″）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)（Dai et al.， 2006）報(bào)道的基本一致，故鑒定化合物11為barbatin B。

化合物12" 白色粉末。ESI-MS m/z： 557.3" ［M+H］+， 推測(cè)化合物12的分子量為556，結(jié)合氫譜和碳譜數(shù)據(jù)，推測(cè)其分子式為C34H36O7。1H-NMR （CDCl3， 600 MHz） δH： 1.36 （1H， m， H-1a）， 1.66 （1H， m， H-1b）， 2.06 （2H， m， H-2）， 5.25 （1H， br s， H-3）， 5.73 （1H， d， J=10.4 Hz， H-6）， 5.91（1H， d， J=10.4 Hz， H-7）， 2.37（1H， dd， J=12.8， 2.1 Hz， H-10）， 6.47 （1H， d， J=16.8 Hz， H-11）， 6.43 （1H， d， J=16.8 Hz， H-12）， 5.95 （1H， br s， H-14）， 5.01 （1H， dd， J=16.8， 1.8 Hz， H-16a）， 5.04 （1H， dd， J=16.8， 1.8 Hz， H-16b）， 1.06 （3H， s， H-17）， 1.59 （3H， s， H-18）， 1.47 （3H， s， H-19）， 1.28 （3H， s， H-20）， 7.83 （2H， m， H-3′， 7′）， 7.31 （2H， m， H-4′， 6′）， 7.43 （1H， br t， J=7.8 Hz， H-5′）， 7.86 （2H， m， H-3″， 7″）， 7.34 （2H， m， H-4″， 6″）， 7.47 （1H， br t， J=7.8 Hz， H-5″）。13C-NMR （CDCl3， 150 MHz） δC： 19.5 （C-1）， 26.5 （C-2）， 123.5 （C-3）， 139.9 （C-4）， 43.5 （C-5）， 75.8 （C-6）， 75.9 （C-7）， 77.2 （C-8）， 48.4 （C-9）， 42.7 （C-10）， 146.8 （C-11）， 121.7 （C-12）， 162.1 （C-13）， 115.1 （C-14）， 174.0 （C-15）， 70.8 （C-16）， 22.8 （C-17）， 20.2 （C-18）， 17.5 （C-19）， 15.3 （C-20）， 166.2 （C-1′）， 129.8 （C-2′）， 130.5 （C-3′， 7′）， 128.2 （C-4′， 6′）， 133.3 （C-5′）， 166.3 （C-1″）， 129.5 （C-2″）， 129.3 （C-3″， 7″）， 128.3 （C-4″， 6″）， 132.8 （C-5″）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)（Dai et al.， 2008）報(bào)道的基本一致，故鑒定化合物12為barbatin D。

化合物13 ""黃色粉末。ESI-MS m/z： 317.1" ［M+H］+， 339.2" ［M + Na］+，推測(cè)化合物13的分子量為316，結(jié)合氫譜和碳譜數(shù)據(jù)，推測(cè)其分子式為C16H12O7。1H-NMR （DMSO-d6， 600 MHz） δH： 6.21 （1H， d， J=1.9 Hz， H-6）， 6.32（1H， d， J=1.9 Hz， H-8）， 6.58 （1H， d， J=8.2 Hz， H-3′）， 7.29 （1H， dd， J=8.2， 8.1 Hz， H-4′）， 6.57 （1H， d， J=8.1 Hz， H-5′）， 12.52 （5-OH）， 10.76 （7-OH）， 9.79 （5-OH）， 3.75 （3H， s， 2′-OMe）。13C-NMR （DMSO-d6， 150 MHz） δC： 145.9 （C-2）， 138.1 （C-3）， 176.7 （C-4）， 161.4 （C-5）， 98.3 （C-6）， 164.0 （C-7）， 93.6 （C-8）， 157.6 （C-9）， 103.9 （C-10）， 107.4 （C-1′）， 158.8 （C-2′）， 102.1 （C-3′）， 131.9 （C-4′）， 108.7 （C-5′）， 156.7 （C-6′）， 55.8 （2′-OMe）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)（Long et al.， 2015）報(bào)道的基本一致，故鑒定化合物13為5， 7， 6′-三羥基-2′-甲氧基黃酮醇。

化合物14 ""黃色粉末。ESI-MS m/z： 315.1" ［M+H］+， 推測(cè)化合物14的分子量為314，結(jié)合氫譜和碳譜數(shù)據(jù)，推測(cè)其分子式為C17H14O6。1H-NMR （DMSO-d6， 600 MHz） δH： 6.98 （1H， s， H-3）， 7.53～7.67 （3H， m， H-3′， 4′， 5′）， 7.96～8.09 （2H， m， H-2′， 6′）， 12.71 （1H， s， 5-OH）， 3.88 （3H， s， 6-OMe）， 3.79 （7-OMe）。13C-NMR （DMSO-d6， 150 MHz） δC： 164.1 （C-2）， 105.2 （C-3）， 182.7 （C-4）， 146.3 （C-5）， 132.8 （C-6）， 152.0 （C-7）， 129.1 （C-8）， 148.9 （C-9）， 103.8 （C-10）， 131.4 （C-1′）， 126.8 （C-2′， 6′）， 130.0 （C-3′， 5′）， 132.5 （C-4′）， 60.5， 61.5 （-OMe × 2）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)（Tomimori et al.， 1982）報(bào)道的基本一致， 故鑒定化合物14為5， 8-二羥基-6， 7-二甲氧基黃酮。

2.2 人肝癌HepG2細(xì)胞增殖抑制活性

采用CCK-8法評(píng)價(jià)了化合物1-14對(duì)人肝癌活性HepG2細(xì)胞體外增殖抑制活性，其IC50值見(jiàn)表1。由表1可知，化合物1-3、8、9、13、14均表現(xiàn)出無(wú)明顯活性，化合物4、7、10-12表現(xiàn)出較弱的腫瘤細(xì)胞增殖抑制活性，化合物6" ［IC50值為（15.62 ± 2.07）μmol·L-1］細(xì)胞增殖抑制活性和陽(yáng)性對(duì)照 ［順鉑，IC50值為（13.74 ± 1.04）μmol·L-1］活性接近，而化合物5" ［IC50值為（1.25 ± 0.39）μmol·L-1］表現(xiàn)出比順鉑更強(qiáng)的腫瘤細(xì)胞增殖抑制活性。

2.3 分子對(duì)接

利用Autodock Vina 1.1.2軟件將活性最好的單體化合物半枝蓮堿A（5）和半枝蓮堿B（6）與肝癌靶標(biāo)VEGF-2蛋白、FGFR-1蛋白進(jìn)行分子對(duì)接，化合物與受體的結(jié)合情況通過(guò)結(jié)合能（kcal·mol-1）衡量，通常結(jié)合能低于0 kcal·mol-1，表明化合物和蛋白可以結(jié)合，而結(jié)合能低于-5 kcal·mol-1，表明結(jié)合良好（黃俊鑫等，2022）。分子對(duì)接結(jié)果表明，肝癌靶標(biāo)VEGF-2蛋白與其特異性配體樂(lè)伐替尼（LEV）的結(jié)合能為-9.2 kcal·mol-1，而與半枝蓮堿A（5）、半枝蓮堿B（6）的結(jié)合能分別為-8.5、-8.4 kcal·mol-1；FGFR-1蛋白與其特異性配體LEV的結(jié)合能為-10.6 kcal·mol-1，而與半枝蓮堿A（5）、半枝蓮堿B（6）的結(jié)合能分別為0.7、1.1 kcal·mol-1。因此，化合物5和化合物6與VEGF-2具有良好的結(jié)合力，其分子對(duì)接圖見(jiàn)圖2。由圖2可知，半枝蓮堿A（5）和半枝蓮堿B（6）通過(guò)氫鍵與GLY-841、LEU-840、ASN-923、ARG-1032等殘基結(jié)合。

3" 討論與結(jié)論

半枝蓮為我國(guó)常見(jiàn)中草藥，其在抗腫瘤領(lǐng)域應(yīng)用較廣泛，常使用半枝蓮及其藥治療或輔助治療惡性腫瘤（張洪石等，2022）。目前，半枝蓮的研究主要集中在黃酮類成分和多糖類成分抗腫瘤及作用機(jī)制的研究。近幾年，對(duì)于半枝蓮二萜及二萜生物堿類化學(xué)成分的研究逐漸增多，得到了一些具有較好活性的化合物。Wu等（2015）研究發(fā)現(xiàn)化合物scutolide A-L、（14R）-14β-hydroxyscutolide K等13個(gè)化合物對(duì)EB病毒裂解復(fù)制有不同的抑制作用，其中化合物scutolide D的EC50（半最大效應(yīng)濃度）和SI（選擇指數(shù)）值分別為3.2 μmol·L-1和46.1，表明其對(duì)EB病毒具有較強(qiáng)活性和高安全性；Xue等（2016）研究發(fā)現(xiàn)半枝蓮中二萜或二萜生物堿類化合物scutebatin A、6， 7-二煙酸酰氧基半枝蓮堿G（6， 7-di-O-nicotinoylscutebarbatine G）、6-煙酸酰氧基-7-乙酰氧基半枝蓮堿G（6-O-nicotinoyl-7-O-acetylscutebarbatine G）、半枝蓮堿W（scutebarbatine W）表現(xiàn)出比維拉帕米（經(jīng)典P-gp 抑制劑）具有更好的對(duì)抗多藥耐藥（MDR）能力，其中作用最強(qiáng)化合物為scutebatin A，其通過(guò)抑制P-gp活性和抑制p糖蛋白表達(dá)逆轉(zhuǎn)多藥耐藥；Yuan等（2017）研究發(fā)現(xiàn)半枝蓮中化合物scubatine F對(duì)A549（人肺腺癌）細(xì)胞和HL-60（人早幼粒細(xì)胞白血?。┘?xì)胞表現(xiàn)出一定的細(xì)胞毒活性，IC50分別為10.4 μmol·L-1和15.3 μmol·L-1。綜上可知，目前半枝蓮中二萜類化合物的活性研究較少，主要集中在抗病毒、抗多藥耐藥等方面，而在抗腫瘤活性方面研究較少，尤其是在抗肝癌方面。

前期對(duì)半枝蓮95%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位進(jìn)行了大孔樹脂梯度洗脫，發(fā)現(xiàn)50%乙醇洗脫部位具有很好的抗乳腺癌活性，其主要活性成分為黃酮類化合物，而70%～90%乙醇洗脫部位對(duì)乳腺癌無(wú)明顯活性（嚴(yán)緒華等，2023）。同時(shí)，對(duì)60%～90%大孔樹脂乙醇洗脫部位進(jìn)行抗肝癌活性篩選（劉欣等，2023）。本研究則在前期抗肝癌活性研究基礎(chǔ)上，選取活性最好的70%乙醇洗脫部位作為對(duì)象。利用多種色譜手段從70%乙醇洗脫部位中分離得到14個(gè)單體化合物，包括12個(gè)二萜類化合物和2個(gè)黃酮類化合物，其中化合物1-3、13、14為首次從該植物中分離得到。同時(shí)，利用CCK-8法評(píng)價(jià)了14個(gè)單體化合物對(duì)人肝癌HepG2細(xì)胞株體外增殖活性的影響，其中化合物1-3、8、9、13、14無(wú)明顯抑制活性，化合物4、7、10-12表現(xiàn)出較弱的抑制活性，化合物6對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖抑制活性（IC50值為15.62 μmol·L-1）與陽(yáng)性對(duì)照活性接近，而化合物5表現(xiàn)出比順鉑更好的腫瘤細(xì)胞增殖抑制活性（IC50值為1.25 μmol·L-1）。由于所得的具有抗肝癌活性二萜類化合物數(shù)量較少且化合物分屬不同的新克羅烷結(jié)構(gòu)類型，因此其構(gòu)效關(guān)系目前還不明確。通過(guò)文獻(xiàn)查閱發(fā)現(xiàn)化合物4、6、7、8、10、11對(duì)HONE-1人鼻咽癌細(xì)胞株、KB人口腔表皮樣癌細(xì)胞株和HT-29人結(jié)腸癌細(xì)胞株均具有較好的生長(zhǎng)抑制活性，IC50值為2.8～8.1 μmol·L-1（Dai et al.， 2006， 2007， 2009， 2011），表明半枝蓮二萜類化合物在其他腫瘤方面也能表現(xiàn)出較好的活性，值得進(jìn)一步研究。本研究同時(shí)利用分子對(duì)接法探討化合物半枝蓮堿A（5）和半枝蓮堿B（6）與肝癌靶標(biāo)的結(jié)合情況。通過(guò)一線抗肝癌藥物樂(lè)伐替尼（或侖伐替尼）明確的靶標(biāo)結(jié)合蛋白銀行數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//www.rcsb.org/）中特異性配體樂(lè)伐替尼對(duì)應(yīng)的蛋白，篩選出2個(gè)肝癌靶標(biāo)VEGF-2（ID：3WZD）、FGFR-1（ID：5ZV2）蛋白作為目標(biāo)蛋白。利用autodock vina 1.1.2將化合物5和化合物6與目標(biāo)蛋白進(jìn)行分子對(duì)接。結(jié)果顯示，半枝蓮堿A（5）和半枝蓮堿B（6）與VEGF-2蛋白均有良好的結(jié)合能力，比樂(lè)伐替尼稍弱，但與FGFR-1蛋白結(jié)合能力差，表明化合物5和化合物6的抗肝癌作用靶標(biāo)之一可能為VEGF-2蛋白，靶標(biāo)驗(yàn)證及后續(xù)作用機(jī)制還需要進(jìn)一步深入研究。

綜上所述，本研究不僅豐富了半枝蓮的化學(xué)物質(zhì)類群， 也為半枝蓮抗肝癌物質(zhì)的基礎(chǔ)研究做出了一定貢獻(xiàn)。

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（責(zé)任編輯" 鄧斯麗）