鄭樹成,張德江,陳頔,王龍,李玉柱

唐山市人民醫(yī)院 1醫(yī)學影像科,2放療科(河北唐山 063000)

鼻咽癌是惡性腫瘤的一種,其分布特征具有明顯的區(qū)域性[1]。鼻咽癌患者早期癥狀不太明顯,因其癥狀較復雜、位置隱蔽而容易出現(xiàn)誤診和漏診,發(fā)現(xiàn)時已經(jīng)是中晚期,會導致鼻咽腔出現(xiàn)狹窄閉塞,影響患者呼吸和吞咽,還易對周圍組織進行侵襲,嚴重影響患者預(yù)后[2]。因此對患者進行早期診斷尤為關(guān)鍵。鼻咽癌患者多采用放化療的方法進行治療,MRI增強掃描可以對鼻咽癌患者病灶和療效進行檢查,通過對病灶的大小診斷,有利于醫(yī)師對腫瘤進行分期和分級[3]。結(jié)直腸腫瘤差異表達基因(CRNDE)是LncRNA家族成員,是一種促癌基因,其在多種腫瘤組織中呈現(xiàn)過表達。有研究[4-5]發(fā)現(xiàn)CRNDE參與鼻咽癌的發(fā)生、發(fā)展。神經(jīng)膜蛋白2(NRSN2)是一種小分子膜蛋白,可以調(diào)節(jié)神經(jīng),還在不同癌癥中發(fā)揮著重要作用,有研究[6-7]發(fā)現(xiàn)NRSN2參與鼻咽癌的生物學發(fā)展。目前關(guān)于MRI增強掃描聯(lián)合血清CRNDE、NRSN2在鼻咽癌中的研究鮮有報道,因此本研究主要探討MRI增強掃描聯(lián)合血清CRNDE、NRSN2對鼻咽癌分期診斷及療效評估的應(yīng)用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2019年10月至2021年10月我院收治并經(jīng)病理檢測證實為鼻咽癌的患者110例作為研究對象,男68例,女42例,年齡30～78歲,平均(59.20±12.75)歲,腫瘤直徑1.3～4.9 cm,平均(3.01±0.64)cm。根據(jù)《鼻咽癌分期2017版》進行臨床分期[8],Ⅱ期為早期組46例,Ⅲ期和Ⅳ期為中晚期組64例。所有患者進行放化療治療。

納入標準:(1)符合鼻咽癌的診斷標準[9],根據(jù)臨床檢查確診為鼻咽癌;(2)所有患者均進行MRI增強掃描;(3)患者入組前未接受放療或化療;(4)患者知情并簽署承諾書。

排除標準:(1)合并其他惡性腫瘤者;(2)伴有心肝腎等重要內(nèi)臟功能障礙患者;(3)合并鼻竇炎等鼻咽疾病;(4)有MRI檢查禁忌者。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(編號:RMYY-LLKS-2023-031)。

1.2 方法

1.2.1 MRI增強掃描檢查方法 所有患者在入院后均使用美國3.0T MRI掃描儀(購自美國,型號GESignaHDX3.0T)對鼻咽部橫軸面、冠狀面和矢狀面進行常規(guī)序列掃描,主要參數(shù):T1FLAIR:TR為2 500 ms,TE為25 ms,TI為850 ms,NEX為1,矩陣為320×256;FSE/T2WI:TR=5 700 ms,TE=120 ms,NEX=2,矩陣為384×256;T2FLAIR:TR為8 600 ms,TE為180 ms,TI為2 200 ms,NEX為=2,矩陣為320×256,所有序列的層厚為6 mm、層間距為1.5 mm、FOV為24 cm,掃描層數(shù)為18層。先進行平掃,待平掃完成后注入造影劑Gd-DTPA試劑進行增強掃描,圖像數(shù)據(jù)分析:采用GE Omni Kinetic軟件處理MRI增強掃描中的數(shù)據(jù),計算最大上升斜率、達峰時間。

1.2.2 qRT-PCR檢測血清CRNDE、NRSN2表達 采集患者入組第2天及放化療后6個月空腹外周靜脈血5 mL,3 000 r/min 10 min離心,抽取上清液之后迅速轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱保存待測。使用Trizol試劑提取血清中總RNA(北京凱詩源公司,貨號:SH-2366),使用NanoDrop ND-12000分光光度計評估總RNA濃度和純度(美國Thermo公司),使用M-MLV反轉(zhuǎn)錄試劑盒(北京凱詩源公司,貨號:SOS-1046)反轉(zhuǎn)錄成cDNA,以cDNA為模板,采用qRT-PCR儀(美國Bio-Rad公司,型號:CFX384)檢測樣本中CRNDE、NRSN2表達水平,內(nèi)參均為GADPH,引物序列見表1。qRT-PCR反應(yīng)體系共20 μL:cDNA(50 ng/μL)2 μL,SYBR Green Master Mix(2×)(上海北諾公司,貨號為K0253)10 μL,PCR上下游引物(10 μmol/L)各0.5 μL,加ddH2O至20 μL。條件為95℃預(yù)變性15 min,1個循環(huán),然后在95℃變性15 s,65℃退火延伸45 s,共40個循環(huán)。為減小實驗誤差,各樣品重復3次,使用2-ΔΔCt方法計算CRNDE、NRSN2相對表達量。

表1 qRT-PCR引物序列

1.2.3 放化療效果評估[10]患者在放化療后6個月進行療效評估,放化療效果根據(jù)WHO實體腫瘤療效評價標準進行,完全緩解:腫瘤完全消失;部分緩解:腫瘤體積縮小>50%,且再無新病灶出現(xiàn);病情穩(wěn)定:腫瘤體積縮小<50%,且再無新病灶出現(xiàn);進展:腫瘤體積增大>25%,出現(xiàn)新的病灶。將完全緩解和部分緩解分為療效良好組,其余為療效不佳組。

2 結(jié)果

2.1 不同分期MRI增強掃描參數(shù)及血清CRNDE、NRSN2的比較 中晚期組最大上升斜率、達峰時間、CRNDE以及NRSN2水平均顯著高于早期組(P<0.05)。見表2。

表2 不同分期MRI增強掃描參數(shù)及血清CRNDE、NRSN2的比較

2.2 血清CRNDE、NRSN2與MRI增強掃描參數(shù)的相關(guān)性分析 根據(jù)Pearson相關(guān)性分析得知,血清CRNDE、NRSN2水平呈正相關(guān)(P<0.05),二者與最大上升斜率、達峰時間均呈正相關(guān)(P<0.05)。見表3。

表3 血清CRNDE、NRSN2與MRI增強掃描參數(shù)的相關(guān)性分析

2.3 MRI增強掃描參數(shù)對鼻咽癌分期的診斷 根據(jù)ROC曲線得知,最大上升斜率診斷鼻咽癌分期的曲線下面積(AUC)為0.798(95%CI:0.715～0.881),截斷值為10.257%,敏感度為76.26%,特異度為80.25%,達峰時間診斷鼻咽癌分期的AUC為0.854(95%CI:0.783～0.926),截斷值為65.315 s,敏感度為77.26%,特異度為82.30%,二者聯(lián)合診斷鼻咽癌分期的AUC為0.918(95%CI:0.865～0.972),敏感度為75.64%,特異度為88.67%。二者聯(lián)合的AUC優(yōu)于各自單獨診斷(Z聯(lián)合 vs.最大上升斜率=2.628、Z聯(lián)合 vs.達峰時間=2.731,P均<0.05),見圖1。

圖1 MRI增強掃描參數(shù)對鼻咽癌分期的診斷

2.4 MRI增強掃描聯(lián)合血清CRNDE、NRSN2對鼻咽癌分期的診斷 根據(jù)ROC曲線得知,CRNDE診斷鼻咽癌分期的AUC為0.841(95%CI:0.766～0.916),截斷值為4.382,敏感度為78.26%,特異度為81.25%,NRSN2診斷鼻咽癌分期的AUC為0.864(95%CI:0.792～0.936),截斷值為7.624,敏感度為80.00%,特異度為81.28%,MRI增強掃描診斷鼻咽癌分期的AUC為0.918(95%CI:0.865～0.972),敏感度為75.64%,特異度為88.67%。三者聯(lián)合診斷鼻咽癌分期的AUC為0.984(95%CI:0.966～1.000),敏感度為75.64%,特異度為88.67%。三者聯(lián)合的AUC優(yōu)于各自單獨診斷(Z聯(lián)合 vs. CRNDE=2.510、Z聯(lián)合 vs. NRSN2=2.685,Z聯(lián)合 vs. MRI增強掃描=2.821,P均<0.05),見圖2。

圖2 MRI增強掃描聯(lián)合血清CRNDE、NRSN2對鼻咽癌分期的診斷

2.5 不同療效MRI增強掃描參數(shù)和血清CRNDE、NRSN2水平的比較 療效不佳組最大上升斜率、達峰時間、CRNDE以及NRSN2水平均顯著高于療效良好組(P<0.05)。見表4。

表4 不同療效MRI增強掃描參數(shù)和血清CRNDE、NRSN2水平的比較

3 討論

鼻咽癌是一種比較常見的頭頸部惡性腫瘤,由于發(fā)病部位比較隱蔽,所以早期無典型癥狀,鼻咽癌患者預(yù)后與分期有關(guān)。早期患者,在治療后可明顯改善患者的生活質(zhì)量,中晚期腫瘤易對周圍淋巴結(jié)和組織進行侵襲,預(yù)后較差[11]。近年來,我國鼻咽癌的發(fā)病率一直處于上升趨勢,因其病死率高,嚴重威脅人類生命健康,其手術(shù)治療效果不理想,多采用放化療進行治療[12],因此,選取生物標志物配合影像學進行檢查對于提高患者分期的診斷以及評估療效具有重要的意義。

MRI在診斷鼻咽癌時獲得較好的效果,可對患者病灶大小,以及壞死情況進行判斷,還能診斷患者臨床分期,評估病情有無改善,對軟組織分辨率較高,可以清晰的將病灶范圍顯示出來[13],MRI增強掃描可通過造影劑來反應(yīng)組織間的血流動力學差異,可檢測放化療治療效果[14]。有研究發(fā)現(xiàn)MRI增強掃描可真實反映鼻咽癌患者在放射性治療后的病情變化情況[15]。還有研究發(fā)現(xiàn)MRI增強掃描與臨床分期有關(guān),可作為臨床治療的依據(jù)[16]。本研究發(fā)現(xiàn)中晚期組最大上升斜率、達峰時間均顯著高于早期組,且療效不佳組最大上升斜率、達峰時間顯著高于療效良好組,說明MRI增強掃描可通過判斷腫瘤內(nèi)的變化,明確腫瘤侵犯范圍和邊界情況,從而診斷臨床分期和療效評估,最大上升斜率診斷鼻咽癌分期的AUC為0.798,敏感度為76.26%,特異度為80.25%,達峰時間診斷鼻咽癌分期的AUC為0.854,敏感度為77.26%,特異度為82.30%,說明MRI增強掃描可以比較準確地診斷鼻咽癌分期,但也會因為樣本數(shù)據(jù)和個體差異性,其診斷符合率會有所差異。

CRNDE是在結(jié)直腸癌組織中發(fā)現(xiàn)的一種LncRNA,之后在多種癌組織中也發(fā)現(xiàn)呈現(xiàn)異常表達,CRNDE在膀胱癌組織中異常升高,表達水平還與TNM分期有關(guān),會促進膀胱癌細胞的侵襲和遷移[17]。CRNDE還在鼻咽癌中過表達,還與鼻咽癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)[18]。CRNDE水平升高與腫瘤分期、腫瘤體積大小以及遠處轉(zhuǎn)移密切相關(guān),其降低會抑制鼻咽癌細胞增殖和遷移能力,說明CRNDE是治療鼻咽癌的潛在靶向指標[19]。NRSN2主要存在于神經(jīng)元囊泡中,是表達于脊椎動物中樞神經(jīng)細胞中的一種膜蛋白,主要由202個氨基酸組成,參與機體神經(jīng)系統(tǒng)軸突末端分化生長,還在多種腫瘤細胞中起作用,調(diào)節(jié)腫瘤細胞的侵襲增殖等[20]。有研究發(fā)現(xiàn)NRSN2在鼻咽癌中顯著增加,與TNM分期等密切相關(guān)[7],還有研究發(fā)現(xiàn)NRSN2在鼻咽癌患者血清中顯著升高,可為鼻咽癌的診斷和治療提供參考[20]。本研究發(fā)現(xiàn)中晚期組CRNDE和NRSN2水平均顯著高于早期組,療效不佳組CRNDE和NRSN2水平均顯著高于療效良好組,說明二者參與鼻咽癌的發(fā)生、發(fā)展,會促進其轉(zhuǎn)移,還與療效密切相關(guān)。根據(jù)Pearson相關(guān)性分析得知,血清CRNDE、NRSN2與最大上升斜率、達峰時間呈正相關(guān),說明CRNDE、NRSN2水平升高會促進鼻咽癌的進展,也會影響MRI參數(shù)產(chǎn)生波動,會隨著血清水平影響MRI參數(shù)使其逐漸升高,為臨床診治提供新的參考。根據(jù)ROC曲線得知,CRNDE診斷鼻咽癌分期的AUC為0.841,敏感度為78.26%,特異度為81.25%,NRSN2診斷鼻咽癌分期的AUC為0.864,敏感度為80.00%,特異度為81.28%,說明二者可以診斷鼻咽癌分期。四者聯(lián)合診斷鼻咽癌分期的AUC為0.985,敏感度為75.64%,特異度為88.67%,而且四者聯(lián)合的AUC及敏感度明顯優(yōu)于各自單獨診斷。

綜上所述,MRI增強掃描聯(lián)合血清CRNDE、NRSN2在鼻咽癌的分期診斷中具有較高的臨床價值,還與患者放化療療效密切相關(guān)。本研究選取的樣本量較少,可能導致研究結(jié)果出現(xiàn)一定偏倚,后續(xù)會擴大樣本量,對其進一步驗證。

利益相關(guān)聲明:所有作者均聲明無利益沖突。

作者貢獻說明:鄭樹成:研究方案設(shè)計、實驗操作、論文撰寫;張德江:研究方案可行性分析、修訂論文;陳頔、王龍:指標檢測、原始結(jié)果的整理與分析;李玉柱:研究指導、論文修改、經(jīng)費支持。