李琳琳，張燕華，李美霖

(北京市通州區(qū)中心血站，北京 通州 101100)

Kidd(JK)血型系統(tǒng)含有3個(gè)抗原：Jka(JK1)、Jkb(JK2)和Jk3(JK3)，共4種表現(xiàn)型：Jk(a+b+)、Jk(a-b-)、Jk(a+b-)、Jk(a-b+)。Kidd系統(tǒng)抗體通常在輸血或懷孕后才能被發(fā)現(xiàn)，偶爾可引起新生兒溶血(HDN)，嚴(yán)重的遲發(fā)性溶血性輸血反應(yīng)中Jk抗體常是主要原因。2012年國(guó)內(nèi)13個(gè)省級(jí)血液中心聯(lián)合開展針對(duì)多個(gè)稀有血型系統(tǒng)中高頻抗原的篩選，通過尿素篩選實(shí)驗(yàn)獲得50多名Jk(a-b-)表型獻(xiàn)血者[1]。建全全國(guó)聯(lián)網(wǎng)的中國(guó)稀有血型資料庫(kù)和血液庫(kù)，有助于提高稀有血型患者治愈率。我們開展了MNS(Mur)、Kell、Kidd、Lutheran、Diego、Colton、Yt等稀有血型檢測(cè)，現(xiàn)將15 984名漢族獻(xiàn)血者JK(a-b-)表型篩查結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來源

隨機(jī)選取北京市通州區(qū)中心血站2020-01—2022-12月采集的15 984名漢族獻(xiàn)血者EDTA-K2抗凝血液標(biāo)本(5mL/份)。

1.2 儀器和試劑

全自動(dòng)加樣器(瑞士HAMILTON，STAR)、血樣本離心機(jī)(德國(guó)Hettich，ROTIXA50S)、U型板(煙臺(tái)摩爾，96孔板)、振蕩孵育器(奧地利，Anthos)、KA-2200血清學(xué)離心機(jī)(日本KUBOTA公司)、醫(yī)用低速離心機(jī)(河北省安新縣白洋離心機(jī)廠，52A型)、GPD型觀片燈(北京京東公司)。單克隆IgM抗-Jka和抗-Jkb(荷蘭Sanquin，批號(hào)：8000230598、8000230759)、分析純尿素(北京嘉世玉禾化工技術(shù)研究院，批號(hào)H6921)、基因組DNA提取試劑盒(杭州博日，批號(hào)：20170601)、核酸提取試劑(短代碼T141，西安天隆，批號(hào)：21070510T146)、人類紅細(xì)胞Diego，Kidd血型基因分型試劑盒、人類紅細(xì)胞15個(gè)血型系統(tǒng)基因分型試劑盒(PCR-SSP法)(天津秀鵬，批號(hào)：171021001，K210607001)。

1.3 方法

1.3.1 尿素溶解試驗(yàn) 取獻(xiàn)血者EDTA-K2抗凝血液標(biāo)本紅細(xì)胞，用生理鹽水配成2%紅細(xì)胞鹽水懸液，使用STAR加樣器將20 μL 2%紅細(xì)胞+2 mol·L-1尿素溶液100 μL分別加入96孔U型板中，在振蕩器上輕微振蕩混勻后靜置1～2 min，在平板離心機(jī)上2 000 r·min-1離心1 min，出現(xiàn)溶血者為陽性，未溶血者為Jk(a-b-)表型標(biāo)本。

1.3.2 血清學(xué)確認(rèn)試驗(yàn) 取兩支潔凈試管，管1、2分別加入單克隆IgM抗-Jka血清和抗-Jkb血清50 μL，再加入50 μL 2%獻(xiàn)血者紅細(xì)胞懸液，混勻后3 500 r·min-1離心18 s，觀察結(jié)果。

1.3.3 PCR-SSP法基因分型 委托天津秀鵬生物技術(shù)開發(fā)有限公司對(duì)表型為Jk(a-b-)的獻(xiàn)血者提取血液標(biāo)本基因組DNA，對(duì)Jk基因編碼外顯子進(jìn)行PCR擴(kuò)增和基因分型檢測(cè)。

2 結(jié) 果

尿素溶解試驗(yàn)和血清學(xué)確認(rèn)試驗(yàn)結(jié)果：從15 984名漢族獻(xiàn)血者篩選出1例未溶血標(biāo)本，血清學(xué)試驗(yàn)確認(rèn)為Jk(a-b-)表型(圖1)。

圖1 Jk(a-b-)尿素溶解試驗(yàn)和血清學(xué)確認(rèn)試驗(yàn)結(jié)果

PCR-SSP法基因分型結(jié)果：該獻(xiàn)血者基因分型為Jkb/Jkb(圖2)。

圖2 Jk(a-b-)標(biāo)本分型結(jié)果

3 討 論

在不同種族中，Kidd血型分布有一定差異，高加索人和黑人中Jk(a-b-)罕見，Jka基因頻率較高。亞洲人中Jk(a-b-)的基因頻率為0.9%，Jkb一般高于Jka。我國(guó)1989年首次在河南漢族中應(yīng)用間接抗人球蛋白法確認(rèn)2例稀有的Jk(a-b-)紅細(xì)胞血型，由于地域和民族的不同，Jk(a-b-)表型的基因頻率也存在差異，已知研究表明上海地區(qū)為0.0039%[2]、重慶0.0203%[3]、溫州0.014%[4]、廣州0.02%[5]、成都0.022%[6]、長(zhǎng)春0.005%[7]、上饒0.0025%[8]。本研究發(fā)現(xiàn)北京地區(qū)漢族中分布頻率為0.0167%，與溫州、廣州地區(qū)相近。由于JK蛋白多肽為尿素轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白分子，在濃度為2 mol·L-1的尿素溶液中，Jka或Jkb紅細(xì)胞可以主動(dòng)通過細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)尿素，但Jk(a-b-)表型不能主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)尿素，在同樣條件下至少15 min甚至能夠長(zhǎng)時(shí)間抵抗溶血[9]?；谶@種特性，使用96孔U形板篩選Jk(a-b-)表型適用于血站大批量檢測(cè)，經(jīng)濟(jì)實(shí)用且方法簡(jiǎn)便，易于推廣。

目前,稀有血型患者用血主要有自身輸血、親屬互助獻(xiàn)血和稀有血型庫(kù)3種備血方式,前兩種方式不適用于緊急手術(shù)或失血量較大的患者,只能在稀有血型庫(kù)中尋找同型血液[10]。稀有血型篩選對(duì)提供臨床搶救用血、提高稀有血型患者輸血療效具有重要意義。