雙向電泳
- 萬(wàn)壽菊不定根發(fā)生中全蛋白雙向電泳體系構(gòu)建※
行了改善，對(duì)雙向電泳的上樣量、等電聚焦參數(shù)及分離膠濃度等條件進(jìn)行了優(yōu)化，得到適于萬(wàn)壽菊全蛋白分析的提取方法和雙向電泳技術(shù)體系。1 材料與方法1.1 試驗(yàn)材料試驗(yàn)所用萬(wàn)壽菊種子為泛美奇跡系列黃色，2021年2月購(gòu)自蘭州市甘肅新時(shí)代園林工程公司。參考Liao等[5]的方法，將萬(wàn)壽菊種子進(jìn)行消毒，萌發(fā)5 d?？刂坪铆h(huán)境因子，萌發(fā)期間培養(yǎng)箱溫度為（25±1）℃，每天光照14 h，光強(qiáng)為200 μmol/（s·m2）。培養(yǎng) 5 d 后的萬(wàn)壽菊幼苗，在下胚軸基部切去乳
特種經(jīng)濟(jì)動(dòng)植物 2022年9期2022-09-16
- 雙向電泳分離水稻葉片蛋白實(shí)驗(yàn)教學(xué)的探索
要] 采用雙向電泳法分離水稻葉片蛋白，比較和分析了考馬斯亮藍(lán)染色方法和硝酸銀染色方法對(duì)掃描得到的雙向電泳圖譜的影響。通過(guò)改進(jìn)水稻葉片蛋白的雙向電泳分離方法，可以得到更清晰的雙向電泳圖譜。結(jié)果表明，改進(jìn)后的硝酸銀染色方法靈敏度更高，分離蛋白點(diǎn)更多且清晰。由此可知，改進(jìn)的實(shí)驗(yàn)方法可以得到更為靈敏、清晰的雙向電泳圖譜，能更好地適應(yīng)和促進(jìn)雙向電泳分離水稻葉片蛋白的實(shí)驗(yàn)教學(xué)工作。[關(guān)鍵詞] 實(shí)驗(yàn)教學(xué);改進(jìn);雙向電泳;葉片蛋白;水稻[基金項(xiàng)目] 2018年度揚(yáng)州大學(xué)
教育教學(xué)論壇 2021年51期2021-03-21
- 雙向電泳分離水稻葉片蛋白實(shí)驗(yàn)教學(xué)的改進(jìn)
稻葉片蛋白的雙向電泳分離方法，采用雙向電泳法分離水稻葉片蛋白，比較和分析了兩種上樣量對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響。改進(jìn)的上樣量靈敏度高，分離條帶多且清晰，表明改進(jìn)的實(shí)驗(yàn)方法可以得到更為靈敏、清晰的圖譜，能更好地適應(yīng)和促進(jìn)實(shí)驗(yàn)教學(xué)工作。[關(guān)鍵詞] 實(shí)驗(yàn)教學(xué);改進(jìn);雙向電泳;葉片[中圖分類號(hào)] Q503? ? ?[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A? ? [文章編號(hào)] 1674-9324（2020）41-0383-02? ? [收稿日期] 2020-04-02目前，雙向電泳技術(shù)是研究蛋白組學(xué)十
教育教學(xué)論壇 2020年41期2020-11-02
- 潮間帶大型海藻小珊瑚藻蛋白質(zhì)提取方法及雙向電泳體系優(yōu)化
：小珊瑚藻;雙向電泳;蛋白質(zhì);提取方法蛋白質(zhì)組學(xué)是以細(xì)胞內(nèi)存在的全部蛋白質(zhì)及其活動(dòng)規(guī)律為研究對(duì)象，是繼基因組學(xué)之后在分子水平上了解生命過(guò)程邏輯性的第2步，是后基因組時(shí)代生命科學(xué)研究的核心內(nèi)容之一。蛋白質(zhì)組學(xué)研究技術(shù)主要包括雙向電泳技術(shù)、質(zhì)譜分析技術(shù)和生物信息學(xué)技術(shù)等，其中，雙向電泳技術(shù)是目前蛋白質(zhì)組學(xué)研究的有效技術(shù)[1-2]。與陸地高等植物相比，有關(guān)海洋藻類的蛋白質(zhì)組學(xué)研究相對(duì)滯后，但近年來(lái)該方面的研究日益興起。程華民等探討了2種不同方法提取珊瑚總蛋白質(zhì)的
江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2020年9期2020-06-21
- 楊樹葉片蛋白質(zhì)雙向電泳圖譜的建立
的技術(shù)之一是雙向電泳(two-dimensional electrophoresis，2-DE)[12],雙向電泳技術(shù)與質(zhì)譜技術(shù)相結(jié)合，已成為蛋白質(zhì)組學(xué)中分離蛋白質(zhì)的有效方法[13]。雙向電泳技術(shù)已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于植物的蛋白質(zhì)組學(xué)研究中，如Romeo等[14]通過(guò)雙向電泳技術(shù)分析意大利楊根部響應(yīng)鋅脅迫的關(guān)鍵因素，Liu等[15]利用雙向電泳技術(shù)分析了毛果楊早期莖從初生生長(zhǎng)到次生生長(zhǎng)的蛋白質(zhì)組學(xué)的變化。盡管雙向電泳體系優(yōu)化已有廣泛研究，但由于植物的生物學(xué)特性、
林業(yè)科學(xué)研究 2020年2期2020-04-21
- 茶樹葉片蛋白雙向電泳體系建立與應(yīng)用
[2]。蛋白雙向電泳體系因其準(zhǔn)確度、靈敏度和可重復(fù)性較好，對(duì)于不同物種逆境脅迫下差異蛋白的篩選和分析具有重要意義。因此，蛋白雙向電泳體系作為基礎(chǔ)，其建立及優(yōu)化一直備受關(guān)注[1,3—5]。茶樹Camellia sinensis 為山茶科山茶屬多年生常綠經(jīng)濟(jì)作物，喜溫暖濕潤(rùn)氣候。近年來(lái)，春季的“霜凍”和“倒春寒”低溫災(zāi)害及夏秋季的高溫、干旱和強(qiáng)光等災(zāi)害，顯著降低了茶葉的產(chǎn)量和品質(zhì)[6—7]。利用2-DE 技術(shù)開展低溫、干旱等逆境脅迫下差異蛋白分析，可為深入研究
亞熱帶植物科學(xué) 2019年3期2019-10-16
- 適用于雙向電泳分析的鏈格孢菌體蛋白提取方法的篩選
出一套適用于雙向電泳分析的鏈格孢菌蛋白的提取方法，以該菌為研究材料，首先采用TCA丙酮法、磷酸TCA丙酮法、SDS提取法和TCA/丙酮SDS/酚抽提法分別提取菌絲蛋白質(zhì)，然后進(jìn)行蛋白質(zhì)濃度的測(cè)定和單向SDSPAGE試驗(yàn)，并建立雙向電泳體系。結(jié)果表明：TCA/丙酮SDS/酚抽提法所獲得的蛋白質(zhì)濃度為15.9 mg/mL，分別是其他三種方法所得蛋白濃度的2.64、4.61和1.43倍;SDSPAGE圖譜中形成的條帶數(shù)目最多、豐度最好;所獲得的2DE圖譜背景清晰
植物保護(hù) 2019年3期2019-06-27
- 藍(lán)莓休眠花芽蛋白質(zhì)雙向電泳體系的建立和優(yōu)化
眠花芽蛋白質(zhì)雙向電泳體系的建立和優(yōu)化呂晨菲，王茂思，黃唯子，楊靜慧通信作者，劉艷軍，黃俊軒（天津農(nóng)學(xué)院 園藝園林學(xué)院，天津 300384）為建立適合藍(lán)莓花芽的蛋白質(zhì)雙向電泳技術(shù)體系，以天津市薊州區(qū)主栽藍(lán)莓品種‘布里吉塔’休眠花芽為試材，采用TCA/丙酮法提取藍(lán)莓休眠花芽蛋白質(zhì)，選擇5種蛋白質(zhì)上樣量（2.00、2.25、2.50、2.75、3.00 mg）、2種聚焦電壓（8 000、10 000 V）、3種聚焦時(shí)間（6、7、8 h）進(jìn)行雙向電泳，R-250考
天津農(nóng)學(xué)院學(xué)報(bào) 2019年4期2019-04-08
- 2種預(yù)處理對(duì)玉米組織全蛋白質(zhì)雙向電泳圖譜的影響
[2]創(chuàng)立的雙向電泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)是蛋白質(zhì)組學(xué)研究的核心技術(shù)之一，已廣泛應(yīng)用于植物、動(dòng)物、微生物等蛋白質(zhì)組學(xué)的研究。雙向電泳技術(shù)步驟較復(fù)雜，有很多因素如上樣量、聚焦時(shí)間、pH膠條的選擇、樣品的制備等，均會(huì)影響雙向電泳圖譜的效果[2]，其中樣品的制備尤為關(guān)鍵，因?yàn)橹参锝M織富含的蛋白酶、色素、酚類、多糖、脂類等物質(zhì)均會(huì)嚴(yán)重干擾蛋白質(zhì)的提取、分離，導(dǎo)致雙向電泳的結(jié)果不清晰、拖帶，而且重復(fù)性得不到保證。
河南農(nóng)業(yè)科學(xué) 2018年2期2018-04-08
- 苦瓜種子蛋白質(zhì)組雙向電泳技術(shù)條件的優(yōu)化
種子蛋白質(zhì)組雙向電泳技術(shù)條件的優(yōu)化黃玉輝1,2，黃如葵1,2，梁家作1，黃熊娟1，馮誠(chéng)誠(chéng)1,2，陳小鳳1，劉杏連1，秦健1 (1.廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜研究所， 南寧 530007； 2.廣西作物遺傳改良生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 南寧 530007)通過(guò)對(duì)苦瓜種子蛋白質(zhì)樣品的提取方法、等電聚焦參數(shù)、SDS-PAGE分離膠濃度以及膠條pH范圍的優(yōu)化篩選，建立了適合苦瓜種子蛋白組分析的雙向電泳體系。結(jié)果表明：使用TCA-丙酮提取方法提取苦瓜種子蛋白，更適用于雙向電泳分
種子 2017年10期2017-12-01
- 雙向電泳中不同樣品裂解液對(duì)水稻葉片疏水蛋白溶解效果比較
佳。關(guān)鍵詞：雙向電泳；裂解液；疏水蛋白；溶解效果中圖分類號(hào)： S188；S511.01 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號(hào)：1002-1302（2017）18-0054-02收稿日期：2017-3-23基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金（編號(hào)：31271622）；揚(yáng)州大學(xué)科技創(chuàng)新培育基金（編號(hào)：2016CXJ087）。作者簡(jiǎn)介：王 琳（1978—），女，江蘇徐州人，博士，講師，主要從事植物生理和生化研究。E-mail：wanglin@yzu.edu.cn。通信作者：梁建生
江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2017年18期2017-11-18
- 甜菜雙向電泳體系條件的優(yōu)化
080)甜菜雙向電泳體系條件的優(yōu)化張 輝1，2，白 晨2，王華忠3，張惠忠2，李曉東2，付增娟2，趙尚敏2，鄂圓圓2，張自強(qiáng)2，王 良2(1.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院，北京 100081；2.內(nèi)蒙古自治區(qū)農(nóng)牧業(yè)科學(xué)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010031；3.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 甜菜研究所，黑龍江 哈爾濱 150080)為了獲得甜菜葉片雙向電泳中蛋白質(zhì)最佳提取方法，建立甜菜葉片蛋白質(zhì)雙向電泳最佳的雙向電泳體系。以甜菜葉片為材料，通過(guò)比較分析，研究甜菜葉片總蛋白提取方法、IPG
華北農(nóng)學(xué)報(bào) 2017年5期2017-11-04
- 近紅外成像用于雙向電泳前的蛋白質(zhì)快速定量
63000)雙向電泳技術(shù)(2D)是蛋白組學(xué)研究過(guò)程中的常用技術(shù)，而蛋白質(zhì)樣品的準(zhǔn)確定量是做好雙向電泳的前提條件。常用的蛋白質(zhì)定量方法有Bradford法和二辛可寧酸(BCA)法，兩者都是通過(guò)測(cè)定樣品吸光度值進(jìn)行蛋白質(zhì)的定量。但是由于雙向電泳蛋白質(zhì)樣品在制備過(guò)程中會(huì)不可避免的引入硫脲、尿素、SDS、NP-40、Triton X-100等試劑，這些試劑易與Bradford法中的考馬斯亮藍(lán)(CBB)和BCA法中的二辛可寧酸反應(yīng)顯色而影響蛋白質(zhì)定量的準(zhǔn)確性。因此，
分析科學(xué)學(xué)報(bào) 2017年4期2017-10-15
- 福建柏葉片全蛋白3種提取方法的比較
對(duì)福建柏蛋白雙向電泳結(jié)果的影響。[結(jié)果]TCA/丙酮法制備的蛋白點(diǎn)數(shù)較少，為285個(gè)，蛋白質(zhì)在制備過(guò)程中流失較多；酚提法得到的蛋白點(diǎn)最多，為1 226個(gè)，蛋白點(diǎn)較清晰但pH中端部分有輕微的蛋白堆積；TCA/酚提結(jié)合法得到了813個(gè)蛋白點(diǎn)，蛋白點(diǎn)較清晰，無(wú)明顯的蛋白堆積現(xiàn)象。[結(jié)論]在福建柏蛋白質(zhì)組學(xué)研究中，酚提法更適于福建柏全蛋白的制備，且酚提法明顯優(yōu)于TCA/酚提結(jié)合法。關(guān)鍵詞 福建柏；全蛋白；蛋白提?。?span id="j5i0abt0b" class="hl">雙向電泳中圖分類號(hào) S312 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章
安徽農(nóng)業(yè)科學(xué) 2017年1期2017-07-10
- 微囊藻受短時(shí)超聲波脅迫蛋白表達(dá)差異研究
蛋白質(zhì)，應(yīng)用雙向電泳技術(shù)對(duì)微囊藻短時(shí)超聲波處理蛋白質(zhì)表達(dá)進(jìn)行分析，結(jié)果表明，71個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)上調(diào)，56個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)下調(diào)，54個(gè)新增蛋白質(zhì)點(diǎn)，21個(gè)消失蛋白質(zhì)點(diǎn)。對(duì)其中8個(gè)差異大的蛋白質(zhì)點(diǎn)采用MALDA-TOF-MS進(jìn)行質(zhì)譜分析，并經(jīng)數(shù)據(jù)庫(kù)搜索匹配，鑒定出2個(gè)未知蛋白、6個(gè)功能蛋白。這些功能蛋白參與抗氧化和抗炎癥、磷酸鹽合成、電子傳遞等生理過(guò)程，實(shí)現(xiàn)微囊藻在短時(shí)超聲波脅迫下的代謝平衡和自我保護(hù)。關(guān)鍵詞：微囊藻；短時(shí)超聲波；蛋白表達(dá)；雙向電泳中圖分類號(hào)：X703
湖北農(nóng)業(yè)科學(xué) 2017年7期2017-05-13
- 一種適于本科實(shí)驗(yàn)教學(xué)的雙向電泳技術(shù)體系
科實(shí)驗(yàn)教學(xué)的雙向電泳技術(shù)體系趙玉紅a, 李 欣a, 崔建林b, 周 浩a, 李登文a,李小菊a, 張金紅a, 趙立青a(南開大學(xué) a. 生物實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心; b. 醫(yī)學(xué)院， 天津 300071)雙向電泳技術(shù)是當(dāng)前蛋白質(zhì)組學(xué)研究中的重要技術(shù)。設(shè)計(jì)“雙向電泳檢測(cè)熱休克處理對(duì)細(xì)菌蛋白表達(dá)譜的影響”的實(shí)驗(yàn)，以PGEX-4T-2大腸桿菌中可溶性總蛋白為研究對(duì)象, 采用雙向電泳技術(shù)篩選熱休克處理后有差異表達(dá)的蛋白。實(shí)驗(yàn)獲得了穩(wěn)定性較高、分辨率和重復(fù)性較好的電泳圖譜，建立
實(shí)驗(yàn)室研究與探索 2017年1期2017-04-10
- 大頭典竹葉片蛋白質(zhì)組學(xué)雙向電泳技術(shù)體系的優(yōu)化
典竹蛋白組學(xué)雙向電泳的優(yōu)化體系。方法：對(duì)大頭典竹蛋白提取方法、膠條的水化運(yùn)行方式、等電聚焦（IEF）程序的設(shè)置、蛋白上樣量等步驟進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果：大頭典竹的蛋白斑點(diǎn)主要分布在pH5～8的范圍；三氯乙酸-丙酮法與酚抽結(jié)合法更適合大頭典竹蛋白的提??；IPG膠條膠面向上、被動(dòng)水化方式、蛋白上樣量為50μL，效果更好。結(jié)論：通過(guò)建立雙向電泳（2-DE）的優(yōu)化體系，獲得的蛋白點(diǎn)均勻、清晰、橫縱條紋少的凝膠圖譜，提高了分辨率，為大頭典竹差異蛋白組學(xué)研究奠定了基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞
安徽農(nóng)學(xué)通報(bào) 2017年5期2017-04-06
- γ—分泌酶抑制劑對(duì)體外培養(yǎng)的糖尿病大鼠血管平滑肌細(xì)胞Notch信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
細(xì)胞，分別用雙向電泳方法和Western blot法檢測(cè)Notch1、Notch3、Notch4、Jagged-1、Jagged-2、DLL4蛋白的表達(dá)。 結(jié)果 ①雙向電泳圖譜證實(shí)提取的蛋白中含有目的蛋白。②Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示：隨DAPT濃度的增加，Nocth1、Nocth3、Nocth4、Jagged-1、Jagged-2、DLL4各蛋白的表達(dá)均遞減；7.50 μmol/L組與對(duì)con組比較，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.01）；0
中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào) 2017年6期2017-04-06
- 鵝掌楸愈傷蛋白質(zhì)組的樣品比較
PAGE）和雙向電泳分析。SDS-PAGE圖譜顯示：裂解液-Clean-up、裂解液-TCA/丙酮法分離高分子量蛋白質(zhì)條帶相對(duì)于Mg/NP-40-TCA/丙酮、TCA/丙酮法少；Mg/NP-40-TCA/丙酮法和裂解液-Clean up法低分子量提取、分離效果較差。在SDS-PAGE基礎(chǔ)上對(duì)Mg/NP-40-TCA/丙酮、TCA/丙酮法提取蛋白質(zhì)樣品進(jìn)行雙向電泳，結(jié)果表明：TCA/丙酮法得到的凝膠圖蛋白質(zhì)點(diǎn)分布均勻、背景清晰且縱橫條紋較少，且TCA/丙酮法
江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2016年12期2017-04-05
- 硫化氫對(duì)水稻幼苗葉片中蛋白質(zhì)表達(dá)譜的影響
長(zhǎng)發(fā)育。應(yīng)用雙向電泳技術(shù)（2-DE）分析了水稻幼苗葉片經(jīng)不同濃度的H2S處理后蛋白質(zhì)表達(dá)譜的變化，并獲得29個(gè)表達(dá)豐度差異2倍以上的蛋白質(zhì)。鑒定的差異蛋白質(zhì)主要涉及到光合作用 （43%），能量代謝 （9%），氧化還原平衡 （13%），蛋白質(zhì)合成、折疊、加工與降解 （19%），信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) （3%）等。gene ontology（GO）分析發(fā)現(xiàn)，受硫化氫調(diào)控的差異，蛋白主要參與光合作用、防御和非生物脅迫應(yīng)答等過(guò)程。表明不同濃度的硫化氫在調(diào)控水稻幼苗的形態(tài)變化方面
江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2016年11期2017-03-21
- 不同生長(zhǎng)年限園參根的雙向電泳分析
學(xué)變化，利用雙向電泳技術(shù)分離1～5年園參根蛋白，重點(diǎn)分析園參根生長(zhǎng)（3年）、成熟（5年）之間的蛋白質(zhì)組學(xué)差異，并利用MALDI-TOF/TOF鑒定差異顯著的81個(gè)蛋白點(diǎn)。結(jié)果表明：有19個(gè)差異蛋白點(diǎn)在成熟期表達(dá)量下調(diào)，62個(gè)蛋白點(diǎn)表達(dá)量上調(diào)，針對(duì)其與園參根生長(zhǎng)發(fā)育的潛在關(guān)系進(jìn)行分類與討論；園參根在逐漸成熟的過(guò)程中與抗脅迫相關(guān)的過(guò)氧化氫酶、單脫氫抗壞血酸還原酶等，以及與能量代謝相關(guān)的ATP酶、甘油醛-3-磷酸脫氫酶等表達(dá)量增加，而與生長(zhǎng)相關(guān)的果膠酯酶表達(dá)量減
江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2016年10期2017-02-05
- 肺炎支原體雙向電泳條件的探索
)肺炎支原體雙向電泳條件的探索胡 璇1，苑 鑫1*，柏長(zhǎng)青1*,牛文凱1，袁 靜2，馮羽中1，李璞媛1，劉慧瑩1(1.軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院附屬醫(yī)院 呼吸與危重癥醫(yī)學(xué)科，北京100071；2.軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院疾病預(yù)防控制所，北京100071)目的 建立適用于肺炎支原體(mycoplasmapneumoniae,MP)的雙向電泳技術(shù)。方法 對(duì)雙向電泳實(shí)驗(yàn)中的三個(gè)關(guān)鍵因素：全蛋白提取量、固相PH梯度膠條范圍、蛋白上樣量進(jìn)行摸索，比較和分析標(biāo)準(zhǔn)株FH電泳圖譜，利用液相色譜
中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué) 2016年12期2017-01-06
- 小麥穗突變體 Sda1與其野生型葉片總蛋白雙向電泳體系的建立
型葉片總蛋白雙向電泳體系的建立周麗敏，馬文潔，武炳瑾，張德強(qiáng)，楊智全，孫道杰(西北農(nóng)林科技大學(xué)農(nóng)學(xué)院，陜西楊凌 712100)為探索適合小麥穗突變體 Sda1葉片蛋白的雙向電泳體系，尋找Sda1與其野生型葉片的差異蛋白，以Sda1與其野生型的抽穗期葉片為材料，從蛋白質(zhì)提取、雙向電泳條件等方面對(duì)適合 Sda1及其野生型葉片蛋白的雙向電泳體系進(jìn)行探索。分析試驗(yàn)得到的雙向電泳圖譜，發(fā)現(xiàn)利用TCA/丙酮提取葉片總蛋白，用pH 4～7的17 cm線性膠條，采用13%
麥類作物學(xué)報(bào) 2016年12期2016-12-30
- 桉樹無(wú)性系葉片蛋白質(zhì)組雙向電泳體系優(yōu)化
葉片蛋白質(zhì)組雙向電泳體系優(yōu)化馬松亞1，蔣維昕1，2，屈林豐1，曹雪寧1，譚 玲1，楊 梅1，2（1. 廣西大學(xué) 林學(xué)院 ，廣西 南寧 530004；2. 廣西林業(yè)科學(xué)與工程高校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西 南寧 530004）為了建立適用于桉樹葉片蛋白質(zhì)組研究的雙向電泳體系，以尾葉桉Eucalyptus urophyllas廣林4號(hào)無(wú)性系作為試驗(yàn)材料，對(duì)蛋白質(zhì)樣品獲取方法、雙向電泳等電聚焦膠條pH范圍、蛋白質(zhì)上樣量、膠條平衡條件以及染色方法進(jìn)行了優(yōu)化。結(jié)果表明：提取液
中南林業(yè)科技大學(xué)學(xué)報(bào) 2016年4期2016-12-21
- 血水草根蛋白質(zhì)組學(xué)研究
白質(zhì)組學(xué)； 雙向電泳； 質(zhì)譜中圖分類號(hào) Q51 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1000-2537（2016）05-0022-05Abstract To analyze the protein expression in Eomecon chionantha Hance roots with the proteomics approach， all proteins were extracted and separated by two-dimensional
- 沙漠小球藻的蛋白雙向電泳分析
小球藻的蛋白雙向電泳分析牟云，汪文倫，嚴(yán)國(guó)，王會(huì)敏，高劍峰*(石河子大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院，新疆石河子 832000)為建立適用于小球藻(Chlorellasp. TLD6B)蛋白質(zhì)組分析的雙向電泳體系，該研究比較了TCA/丙酮沉淀法和Trisol提取法對(duì)小球藻蛋白的提取效果，不同pH梯度IPG膠條(pH3～10和 pH4～7)、不同蛋白質(zhì)上樣量、不同聚焦程序?qū)π∏蛟宓鞍椎姆蛛x效果。結(jié)果表明：(1)采用Trisol提取法可獲得較高純度蛋白，當(dāng)選擇24 cm p
西北植物學(xué)報(bào) 2016年9期2016-11-04
- 野生一粒小麥根干旱響應(yīng)蛋白的篩選與鑒定
蛋白質(zhì)組學(xué)；雙向電泳作為世界主要糧食作物之一，小麥的生產(chǎn)很容易受到全球氣候變化與水分虧缺環(huán)境的影響[1]。干旱是導(dǎo)致農(nóng)作物減產(chǎn)最主要的非生物逆境脅迫因子[2]，而全球氣候變暖，更加深了干旱對(duì)農(nóng)作物產(chǎn)量的影響[3]。因此，有必要從分子水平揭示小麥響應(yīng)干旱脅迫的機(jī)制，為干旱耐受新品種的培育提供理論依據(jù)和技術(shù)指導(dǎo)。植物配備有復(fù)雜而精細(xì)的響應(yīng)機(jī)制以適應(yīng)干旱缺水環(huán)境，這種復(fù)雜的響應(yīng)機(jī)制是由植物感應(yīng)干旱脅迫信號(hào)引起的轉(zhuǎn)錄翻譯機(jī)制而起始，繼而導(dǎo)致解剖結(jié)構(gòu)、生理生化狀態(tài)的
麥類作物學(xué)報(bào) 2016年6期2016-07-29
- 不同濃度鉛脅迫對(duì)向日葵幼苗蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和表達(dá)的影響
光譜分析法和雙向電泳法探討向日葵試材HA89的幼苗在不同濃度(0,400,800 mg/L)鉛脅迫條件下蛋白質(zhì)水平發(fā)生的變化。結(jié)果表明:向日葵幼苗根、莖、葉的蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)中的β-折疊結(jié)構(gòu)和無(wú)規(guī)則卷曲結(jié)構(gòu)對(duì)鉛脅迫最為敏感,同時(shí),根據(jù)1 655 cm-1/1 637 cm-1比值可看出向日葵幼苗蛋白在鉛脅迫濃度為400 mg/L時(shí)蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)較為穩(wěn)定,超過(guò)這一濃度到800 mg/L時(shí),蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)則趨于松散;試驗(yàn)采用Tris酚提取法提取試驗(yàn)材料全蛋白,經(jīng)雙
華北農(nóng)學(xué)報(bào) 2016年2期2016-06-03
- 蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)及其在工業(yè)微生物研究中的應(yīng)用
蛋白質(zhì)組學(xué)；雙向電泳；質(zhì)譜；微生物育種蛋白質(zhì)組學(xué)是基于蛋白質(zhì)分離、質(zhì)譜鑒定的一門新興學(xué)科，是從細(xì)胞、組織或生物體整體角度來(lái)研究蛋白質(zhì)組成及變化，從蛋白質(zhì)水平解析代謝過(guò)程及其調(diào)控機(jī)制。蛋白質(zhì)組學(xué)研究不僅彌補(bǔ)了傳統(tǒng)方法對(duì)單個(gè)蛋白質(zhì)研究的局限性，而且其研究結(jié)果是對(duì)基因組學(xué)、轉(zhuǎn)錄組學(xué)的補(bǔ)充和驗(yàn)證，它比基因組學(xué)和轉(zhuǎn)錄組學(xué)更能夠代表生物體真實(shí)的生命活動(dòng)規(guī)律。早期蛋白質(zhì)組學(xué)應(yīng)用于微生物代謝途徑及其調(diào)控機(jī)制的研究大多集中于病源性微生物的致病機(jī)理和耐藥機(jī)理的解析。隨著工業(yè)微
發(fā)酵科技通訊 2016年2期2016-06-02
- 茭白線粒體蛋白雙向電泳體系建立
白質(zhì)組分析的雙向電泳技術(shù)體系，為進(jìn)一步開展茭白線粒體差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究提供參考?！痉椒ā恳攒诪樵囼?yàn)材料，比較不同線粒體提取純化方法、IPG膠條pH范圍及蛋白上樣量等條件對(duì)雙向電泳圖譜的影響?！窘Y(jié)果】差速離心（3000～14000×g）聯(lián)合Percoll不連續(xù)密度梯度離心（20%∶24%∶40%=2∶4∶2）對(duì)茭白線粒體的提取純化效果優(yōu)于僅采用差速離心。采用改良酚抽法提取茭白線粒體蛋白，17 cm、pH 3～10的IPG膠條，1.0 mg上樣量，12% S
南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào) 2016年3期2016-05-30
- 小麥L699葉片受白粉菌脅迫后蛋白質(zhì)的差異表達(dá)
，采用蛋白質(zhì)雙向電泳和質(zhì)譜技術(shù)(MALDI-TOF-MS)檢測(cè)小麥葉片接種白粉菌 24 h后的差異蛋白。結(jié)果表明，經(jīng)PDQuest軟件分析，接種白粉菌后小麥葉片中有18個(gè)蛋白質(zhì)斑點(diǎn)表達(dá)量上調(diào)，38個(gè)蛋白質(zhì)斑點(diǎn)表達(dá)量下調(diào)。對(duì)表達(dá)量上調(diào)的蛋白質(zhì)斑點(diǎn)進(jìn)行質(zhì)譜分析和數(shù)據(jù)庫(kù)檢索，共鑒定出15種蛋白質(zhì)，其中13種參與防御反應(yīng)、碳水化合物代謝和蛋白質(zhì)周轉(zhuǎn)。這些差異蛋白與抗病途徑、植株生理過(guò)程密切相關(guān)，在小麥抗白粉病過(guò)程中起很重要的作用。關(guān)鍵詞：小麥；白粉菌； Pm40；
麥類作物學(xué)報(bào) 2016年4期2016-05-27
- 金釵石斛花芽蛋白質(zhì)提取及其雙向電泳體系優(yōu)化
白質(zhì)提取及其雙向電泳體系優(yōu)化葉婕， 尹麗梅， 葉慶生*(華南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，廣東省植物發(fā)育生物工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣州 510631)摘要：通過(guò)對(duì)蛋白質(zhì)提取方法、水化方式、等點(diǎn)聚焦程序、IPG膠條選擇等方面的優(yōu)化，建立金釵石斛花芽蛋白質(zhì)雙向電泳體系.結(jié)果表明，采用酚抽提法提取蛋白，樣品與水化液1∶40復(fù)溶；被動(dòng)水化，等點(diǎn)聚焦程序B2；選用24 cm pH 3～10NL 膠條和12% 的凝膠；采用考馬斯亮藍(lán)G-250染色，獲得了可識(shí)別1 422個(gè)蛋白質(zhì)斑點(diǎn)
- 廣藿香葉片總蛋白雙向電泳體系的建立
葉片總蛋白質(zhì)雙向電泳條件進(jìn)行了優(yōu)化，利用MALDI-TOF-TOF和Swiss-Prot軟件對(duì)部分蛋白點(diǎn)進(jìn)行質(zhì)譜鑒定。結(jié)果表明：使用TCA/丙酮法提取廣藿香葉片總蛋白，在10萬(wàn)Vhs聚焦強(qiáng)度下，可獲得高分辨率雙向電泳圖譜，BPP酚抽法獲得的蛋白不適用于雙向電泳分析；經(jīng)質(zhì)譜成功鑒定了9個(gè)蛋白點(diǎn)，鑒定成功率90%。關(guān)鍵詞： 廣藿香；葉片；雙向電泳；蛋白質(zhì)提取中圖分類號(hào)： S567.23+9.01 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號(hào)：1002-1302（2016）03-
江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2016年3期2016-05-03
- 蜂蜜蛋白提取以及雙向電泳技術(shù)分析蜂蜜蛋白條件優(yōu)化
蛋白提取以及雙向電泳技術(shù)分析蜂蜜蛋白條件優(yōu)化周莉質(zhì)1，2，宗 凱1，呂俠影1，余曉峰1*，姚 劍1(1.安徽出入境檢驗(yàn)檢疫局，安徽合肥 230022；2.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)，安徽合肥 230036)摘要[目的]研究蜂蜜中蛋白質(zhì)提取的有效方法，優(yōu)化蜂蜜蛋白電泳條件。[方法]該試驗(yàn)使用丙酮、鎢酸鈉、硫酸銨、尿素-硫脲4種方法提取蜂蜜中的蛋白并進(jìn)行比較，然后進(jìn)行雙向電泳分析，對(duì)影響雙向蛋白電泳的IPG膠條的選擇、蛋白質(zhì)上樣量、等電聚焦時(shí)間等主要因素進(jìn)行優(yōu)化。[結(jié)果]試
安徽農(nóng)業(yè)科學(xué) 2016年3期2016-03-16
- 污染脅迫下的蚯蚓蛋白質(zhì)組學(xué)研究進(jìn)展
蛋白質(zhì)組學(xué)；雙向電泳土壤污染是一個(gè)環(huán)境污染的世界性問(wèn)題，我國(guó)在這方面也日益突出。2014年調(diào)查結(jié)果顯示，部分地區(qū)土壤污染較重，耕地土壤環(huán)境質(zhì)量堪憂，工礦業(yè)廢棄地土壤環(huán)境問(wèn)題突出，全國(guó)土壤總的點(diǎn)位超標(biāo)率為16.1%，其中重度污染點(diǎn)位比例為1.1%。另外，種植活動(dòng)中農(nóng)藥和養(yǎng)殖業(yè)中抗生素的使用，也使得土壤生態(tài)環(huán)境受到前所未有的巨大壓力。人們更多地關(guān)注如何快速、靈敏地監(jiān)測(cè)土壤環(huán)境的受污染程度。在土壤系統(tǒng)中，蚯蚓是最大的無(wú)脊椎動(dòng)物，對(duì)分解活動(dòng)、養(yǎng)分礦化和初級(jí)生產(chǎn)有著
生態(tài)學(xué)報(bào) 2016年1期2016-03-10
- 基于正交試驗(yàn)的向日葵種子蛋白雙向電泳技術(shù)的研究
2］。蛋白質(zhì)雙向電泳技術(shù)，是一種檢測(cè)和分析蛋白質(zhì)的生化手段，是目前唯一能將數(shù)千種蛋白質(zhì)同時(shí)分離與展示的分離技術(shù)［3］，但探究出一套能夠分離不同種植物種子間的差異蛋白的雙向電泳體系，仍是當(dāng)今需要解決的難題。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)正交設(shè)計(jì)，對(duì)影響向日葵蛋白質(zhì)雙向電泳技術(shù)中的3個(gè)關(guān)鍵因素進(jìn)行了探討，以期為今后向日葵蛋白質(zhì)組學(xué)的研究奠定基礎(chǔ)，也為其它油類植物蛋白質(zhì)組學(xué)的研究提供新思路。1 實(shí)驗(yàn)材料與方法1.1 實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)材料為天津農(nóng)學(xué)院農(nóng)業(yè)分析測(cè)試中心保存干燥的向日葵種子。
種子 2016年1期2016-01-15
- 甜椒果實(shí)總蛋白質(zhì)雙向電泳優(yōu)化體系的建立
果實(shí)總蛋白質(zhì)雙向電泳優(yōu)化體系的建立蔣林惠，姜麗，徐銀，許昕，郁志芳*（南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科技學(xué)院，江蘇南京210095）以甜椒果實(shí)“紅方”為實(shí)驗(yàn)材料，對(duì)其果實(shí)總蛋白制備方法、蛋白提取液的pH、總蛋白的上樣量、IPG膠條的pH范圍及等電聚焦程序進(jìn)行條件優(yōu)化，建立了適用于甜椒果實(shí)總蛋白分析的雙向電泳體系。結(jié)果表明，采用提取液為pH7.8的酚提法制備的甜椒果實(shí)總蛋白、17cm pH5～8的IPG膠條、上樣1200μg進(jìn)行66000VH等電聚焦和垂直凝膠電泳，經(jīng)過(guò)考
食品工業(yè)科技 2015年4期2015-12-20
- 低溫脅迫下桂蕉6號(hào)幼苗葉片差異蛋白表達(dá)研究
；低溫脅迫；雙向電泳；差異蛋白中圖分類號(hào) S188 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 0517-6611（2015）20-032-03Abstract [Objective] To research differences in protein expression of Guijiao No.6 seedling leaves. [Method] TCA/acetone method and phenol extraction method were both
安徽農(nóng)業(yè)科學(xué) 2015年20期2015-10-21
- 不同細(xì)胞破碎方法對(duì)肉牛、牦牛背最長(zhǎng)肌
蛋白質(zhì)提取和雙向電泳圖譜效果的最佳方法進(jìn)行研究。在相同裂解液組成、等電聚焦程序、十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰氨凝膠電泳（sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electropheresis，SDS-PAGE）操作、銀染法染色等雙向電泳條件的處理下，通過(guò)Bradford法分別測(cè)定不同方法提取的肉牛和牦牛肉背最長(zhǎng)肌中蛋白質(zhì)的含量，并采用PDQuest 8.0.1軟件對(duì)雙向電泳圖譜的效果進(jìn)行分析。結(jié)果表明：3種細(xì)胞破碎方
肉類研究 2015年7期2015-05-30
- 小麥籽粒蛋白質(zhì)雙向電泳體系的優(yōu)化
白質(zhì)的提取、雙向電泳分離、質(zhì)譜鑒定等先進(jìn)技術(shù)相結(jié)合，應(yīng)用于小麥蛋白質(zhì)組學(xué)的研究主要集中于小麥的根、葉片、花藥、花粉等組織器官蛋白質(zhì)的雙向電泳分析及相關(guān)蛋白質(zhì)功能的初步鑒定，然而，由于受籽粒中多糖等物質(zhì)的影響，較難提取籽粒總蛋白質(zhì)，影響了蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)在籽粒中的應(yīng)用。在前人已發(fā)表的關(guān)于籽粒蛋白質(zhì)組學(xué)研究的文獻(xiàn)中，對(duì)不同作物所采取的蛋白質(zhì)提取方法各不相同。王慧娜等［11］在不同方法提取的小麥籽粒蛋白質(zhì)雙向電泳凝膠分離效果的分析比較一文中只介紹了提取方法對(duì)雙向電
江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào) 2015年5期2015-03-15
- 釀酒酵母蛋白質(zhì)雙向電泳條件優(yōu)化及圖譜建立
支持[4]。雙向電泳與質(zhì)譜結(jié)合的研究方法，是現(xiàn)在蛋白質(zhì)組學(xué)最為常規(guī)的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。由于雙向電泳實(shí)驗(yàn)操作性強(qiáng)、步驟繁瑣、周期長(zhǎng)，實(shí)驗(yàn)過(guò)程各個(gè)環(huán)節(jié)都可能影響雙向電泳對(duì)蛋白質(zhì)分離的效果，直接關(guān)系到蛋白質(zhì)圖譜分析的準(zhǔn)確性和可靠性，因此對(duì)于不同來(lái)源的樣品，即便是同一物種也都需要摸索優(yōu)化出專用的實(shí)驗(yàn)室可重復(fù)的實(shí)驗(yàn)條件[5-6]。本研究的目標(biāo)就是通過(guò)對(duì)影響雙向電泳結(jié)果的各種關(guān)鍵條件進(jìn)行優(yōu)化，建立一套高分辨率、高靈敏度、高重復(fù)度和高穩(wěn)定性的雙向電泳技術(shù)體系。為深入研究不同氮源
食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào) 2014年3期2014-12-25
- 外源H2O2影響山黧豆初生根蛋白表達(dá)研究
變化，并采用雙向電泳與質(zhì)譜鑒定技術(shù)，對(duì)初生根中蛋白質(zhì)表達(dá)的變化進(jìn)行分析。結(jié)果顯示：施加H2O2處理引起了內(nèi)源H2O2水平的產(chǎn)生與積累；利用雙向電泳技術(shù)，共獲得了850～900個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)，并檢測(cè)到70個(gè)蛋白質(zhì)表現(xiàn)出顯著的差異表達(dá)，其中43個(gè)蛋白發(fā)生上調(diào)，21個(gè)蛋白發(fā)生下調(diào)，新出現(xiàn)6個(gè)蛋白。對(duì)15個(gè)蛋白點(diǎn)MALDI-TOF-MS/MS質(zhì)譜鑒定結(jié)果表明，呼吸代謝、蛋白折疊、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及細(xì)胞防御等方面的蛋白參與了山黧豆初生根對(duì)H2O2的應(yīng)答反應(yīng)。這些蛋白的發(fā)現(xiàn)將有助
江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2014年9期2014-11-15
- 基于雙向電泳技術(shù)的家畜蛋白質(zhì)組學(xué)研究進(jìn)展
學(xué)科動(dòng)態(tài)基于雙向電泳技術(shù)的家畜蛋白質(zhì)組學(xué)研究進(jìn)展蘆方茹，馬 云*，徐永杰，雷 玲，宋新強(qiáng)(信陽(yáng)師范學(xué)院 生命科學(xué)學(xué)院/動(dòng)物遺傳實(shí)驗(yàn)室，河南 信陽(yáng) 464000)隨著人類基因組計(jì)劃的完成與落幕，各種家畜如小鼠、牛、豬等的測(cè)序工作也相繼完成，動(dòng)物基因組學(xué)的研究重點(diǎn)已轉(zhuǎn)向功能基因組學(xué)。而蛋白質(zhì)組學(xué)是功能基因組學(xué)中非常重要的一部分，作為蛋白質(zhì)組學(xué)研究中經(jīng)典技術(shù)的雙向電泳技術(shù)就顯得尤為重要，論文對(duì)雙向電泳在牛、豬等家畜中的基礎(chǔ)研究進(jìn)展予以綜述，并就蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)的前
家畜生態(tài)學(xué)報(bào) 2014年1期2014-04-15
- 蚯蚓蛋白質(zhì)組雙向電泳技術(shù)體系的建立及條件優(yōu)化
蚯蚓蛋白質(zhì)組雙向電泳技術(shù)體系的建立及條件優(yōu)化吳石金，趙士良，沈飛超，徐 銘（浙江工業(yè)大學(xué) 生物與環(huán)境工程學(xué)院，浙江 杭州 310032）對(duì)赤子愛(ài)勝蚓（Eiseniafetida）表皮組織的兩種蛋白質(zhì)提取方法進(jìn)行了比較，并對(duì)雙向電泳IPG膠條pH范圍，上樣量條件進(jìn)行了優(yōu)化，結(jié)果表明：裂解液提取法提取的蛋白質(zhì)量濃度較低，蛋白種類缺失，采用TCA－丙酮沉淀法提取法，可顯著提高提取液蛋白質(zhì)提取效果，樣品中蛋白質(zhì)質(zhì)量濃度可達(dá)12.49μg／μL.蚯蚓表皮組織蛋白質(zhì)主
浙江工業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào) 2013年2期2013-08-24
- 茭白總蛋白質(zhì)雙向電泳技術(shù)體系的建立
組等[2]。雙向電泳技術(shù)（Two-dimensional electrophoresis，2-DE）作為蛋白質(zhì)組學(xué)三大關(guān)鍵核心技術(shù)之一，是目前惟一能同時(shí)將上千種蛋白質(zhì)分離和展示的方法，也是分析復(fù)雜組分蛋白質(zhì)分辨率最高的工具[3]。由于植物中蛋白質(zhì)含量相對(duì)較低，且含有如色素、淀粉、多糖、多酚、單寧和有機(jī)酸類等大量干擾性物質(zhì)，給植物蛋白質(zhì)組學(xué)研究增加了困難，因而雙向電泳技術(shù)在植物中的應(yīng)用早期主要集中于擬南芥[4]、水稻[5]、小麥[6]、玉米[7]等傳統(tǒng)模式作
食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào) 2013年6期2013-02-19
- 水稻胚乳雙向電泳技術(shù)體系的優(yōu)化分析
]。白月等用雙向電泳技術(shù)分析水稻少側(cè)根突變系MT10及其野生型IR8的根系全蛋白質(zhì)組，建立二者間的差異表達(dá)圖譜，得到了11個(gè)差異點(diǎn)，其中只在MT10中表達(dá)的蛋白點(diǎn)有2個(gè)，只在IR8中表達(dá)的蛋白點(diǎn)有4個(gè)，兩者間有明顯差異的蛋白點(diǎn)有5個(gè)[4]。劉文文等應(yīng)用雙向電泳（2-DE）技術(shù)分析了烯丙異噻唑誘導(dǎo)后水稻蛋白質(zhì)的差異表達(dá)，在誘導(dǎo)4 d的雙向電泳圖譜上找到了10個(gè)差異表達(dá)蛋白質(zhì)點(diǎn)，選取其中3個(gè)進(jìn)行質(zhì)譜（MALDI-TOF-MS）分析，分別具有泛醌-細(xì)胞色素C還原
- 甘藍(lán)型油菜葉片蛋白質(zhì)雙向電泳體系優(yōu)化
5］。蛋白質(zhì)雙向電泳(Two－dimensional polyacrylamide gel electrophoresis，2 － DE)技術(shù)［6，7］是利用蛋白質(zhì)等電點(diǎn)和分子量的不同來(lái)對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行分離。它通過(guò)第一向的等電聚焦(Isoelectric focusing，IEF)使蛋白質(zhì)按照等電點(diǎn)進(jìn)行初次分離，然后通過(guò)第二向的聚丙烯酰胺凝膠電泳(Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis
作物研究 2012年4期2012-09-19
- 高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒蛋白質(zhì)組雙向電泳方法的建立及優(yōu)化
ova等應(yīng)用雙向電泳技術(shù)（2-DE）分析了產(chǎn)生于單核巨嗜細(xì)胞（MDM）的HIV-1病毒粒子的蛋白，鑒定了253個(gè)宿主細(xì)胞相關(guān)蛋白[7]。然而，應(yīng)用2-DE技術(shù)研究HP-PRRSV蛋白質(zhì)組研究尚未見(jiàn)報(bào)道。為研究HP-PRRSV蛋白質(zhì)組，本實(shí)驗(yàn)對(duì)影響HP-PRRSV蛋白質(zhì)組的2-DE條件進(jìn)行優(yōu)化，建立了重復(fù)性好、分辨率高的HP-PRRSV 2-DE，為HP-PRRSV的病毒蛋白質(zhì)組學(xué)及免疫蛋白質(zhì)組學(xué)研究奠定基礎(chǔ)。1 材料和方法1.1 病毒株和細(xì)胞 HP-PRR
中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào) 2012年5期2012-08-30
- 藥學(xué)本科生開展雙向電泳實(shí)驗(yàn)探討
學(xué)本科生開展雙向電泳實(shí)驗(yàn)探討吳志鵬,林麗彬,柯益彬,李春來(lái)(莆田學(xué)院醫(yī)學(xué)院,福建莆田351100)探討藥學(xué)本科生開展雙向電泳實(shí)驗(yàn)的必要性和可行性,通過(guò)理論和實(shí)踐證明,一種自制膠條的雙向電泳實(shí)驗(yàn)技術(shù)適合在藥學(xué)本科生中進(jìn)行推廣。藥學(xué)本科生;自制膠條;雙向電泳;必要性;可行性目前國(guó)內(nèi)高校藥學(xué)本科階段尚無(wú)開展雙向電泳實(shí)驗(yàn)的報(bào)告。主要是因?yàn)槌Ｒ?guī)的雙向電泳所需的儀器和試劑價(jià)格不菲,對(duì)實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員也有較高要求。這些客觀的條件限制了雙向電泳實(shí)驗(yàn)在藥學(xué)本科階段的普及。然而雙
黑龍江醫(yī)藥科學(xué) 2012年2期2012-01-04
- 旱柳根系蛋白質(zhì)雙向電泳體系的建立
趨勢(shì)[4]。雙向電泳是研究蛋白質(zhì)表達(dá)變化最有效的工具之一。它利用等電點(diǎn)和分子量2個(gè)性質(zhì)對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行分離，可以使得樣品中數(shù)千種蛋白得到有效分離[5]。雙向電泳技術(shù)面臨的挑戰(zhàn)是高分辨率和重復(fù)性[6]。只有具備了高分辨率和高重復(fù)性才能適用于接下來(lái)的凝膠圖片分析，蛋白點(diǎn)配對(duì)，找出差異蛋白。為建立旱柳根系雙向電泳體系，本研究從蛋白提取、染色及雙向電泳中蛋白上樣量、平衡時(shí)間、等電聚焦等方面對(duì)旱柳根部總蛋白雙向電泳體系進(jìn)行分析比較，以建立優(yōu)化的試驗(yàn)體系。1 材料與方法1
浙江農(nóng)林大學(xué)學(xué)報(bào) 2011年4期2011-05-30
- 雙向電泳技術(shù)在蛋白質(zhì)組學(xué)研究中的應(yīng)用進(jìn)展
大核心技術(shù)是雙向電泳、計(jì)算機(jī)圖像分析與大規(guī)模數(shù)據(jù)處理技術(shù)以及質(zhì)譜技術(shù)。而雙向凝膠電泳(two-dimensional electrophoresis，2-DE)是目前唯一可將數(shù)千種蛋白質(zhì)同時(shí)分離的方法，雙向電泳技術(shù)聯(lián)合質(zhì)譜鑒定技術(shù)被公認(rèn)為是目前蛋白質(zhì)組研究技術(shù)的標(biāo)準(zhǔn)方法[2]。2 雙向電泳技術(shù)2.1 雙向電泳技術(shù)原理雙向電泳技術(shù)由Farre l等人于1975年建立。其基本原理是:第1向進(jìn)行等電聚焦，因?yàn)榈鞍踪|(zhì)是兩性分子，具有不同的等電點(diǎn)，在pH梯度介質(zhì)中外
浙江農(nóng)業(yè)科學(xué) 2011年6期2011-02-13
- 華溪蟹主要組織蛋白質(zhì)雙向電泳技術(shù)體系的建立
要組織蛋白質(zhì)雙向電泳技術(shù)體系的建立武陽(yáng)，馬文麗，王蘭*（山西大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院，山西 太原 030006）為深入研究重金屬脅迫下華溪蟹主要組織蛋白質(zhì)的差異表達(dá)，對(duì)華溪蟹心臟及鰓總蛋白質(zhì)的雙向電泳技術(shù)體系進(jìn)行了初步探討.通過(guò)對(duì)樣品處理方法、上樣量大小以及雙向電泳實(shí)驗(yàn)條件的比較選擇，初步建立了適用于華溪蟹組織蛋白質(zhì)組分析的雙向電泳技術(shù)體系.結(jié)果表明：選取p H 3～10的24 cmIPG膠條，上樣量1.0 mg，得到了較為理想的華溪蟹心臟及鰓雙向電泳圖譜；分離
- 蛋白質(zhì)組學(xué)研究的有效工具——雙向電泳鑒定技術(shù)
000)1 雙向電泳的原理和方法雙向電泳技術(shù)是根據(jù)蛋白質(zhì)等電點(diǎn)和分子量?jī)蓚€(gè)相互獨(dú)立的參數(shù),在相互垂直的兩個(gè)方向進(jìn)行二次電泳的過(guò)程.首先在第一向電泳中根據(jù)蛋白質(zhì)所帶電荷的性質(zhì)進(jìn)行等點(diǎn)聚焦(IEF),等點(diǎn)聚焦時(shí)由于各種蛋白等電點(diǎn)的不同,在高電壓場(chǎng)的作用下,蛋白質(zhì)在pH梯度膠中移動(dòng),直到取得不同的位置;然后再根據(jù)蛋白分子量的不同,在SDS-烯酰胺凝膠電泳 (SDS-PAGE)中進(jìn)行第二次分離.第一向等點(diǎn)聚焦有 3種常見(jiàn)的方法:非固相的 ISO-DALT、固相的
重慶高教研究 2010年5期2010-08-15
- 蛋白質(zhì)組雙向電泳技術(shù)在生物醫(yī)學(xué)研究中的應(yīng)用進(jìn)展
質(zhì)譜技術(shù)），雙向電泳技術(shù)（two-dimensional electrophoresis, 2-DE）是目前唯一可將數(shù)千種蛋白質(zhì)同時(shí)分離的方法，雙向電泳技術(shù)聯(lián)合質(zhì)譜技術(shù)被國(guó)際公認(rèn)是目前蛋白質(zhì)組研究技術(shù)的標(biāo)準(zhǔn)方法。由于雙向電泳技術(shù)在蛋白質(zhì)組與醫(yī)學(xué)研究中所處的重要位置，它可用于蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄后修飾研究、蛋白質(zhì)組的比較和蛋白質(zhì)間的相互作用、細(xì)胞分化凋亡研究、致病機(jī)制及耐藥機(jī)制的研究、療效監(jiān)測(cè)、新藥開發(fā)、癌癥研究、蛋白純度檢查、小量蛋白純化、新替代疫苗的研制等許
生命科學(xué)儀器 2010年1期2010-04-14
- 雙向凝膠電泳技術(shù)在中醫(yī)證候研究中的應(yīng)用
面。本文擬對(duì)雙向電泳技術(shù)在證候研究中的應(yīng)用做一綜述。1 雙向電泳技術(shù)原理及應(yīng)用雙向電泳(two-dimensional gel electrophoresis，2-DE)是根據(jù)蛋白質(zhì)等電點(diǎn)和分子量的不同，通過(guò)兩次方向互相垂直的高分辨率等電聚焦電泳和十二烷基磺酸鈉一聚丙烯酰胺凝膠電泳(sodium dodecyl sulphate polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE)，將帶不同凈電荷和不同分子量的蛋白質(zhì)二維
世界中醫(yī)藥 2010年5期2010-04-13
- 大豆花瓣蛋白雙向電泳分析技術(shù)體系的優(yōu)化*
大豆花瓣蛋白雙向電泳分析技術(shù)體系的優(yōu)化*鄭天慧，宋 波，姜自芹，刁桂珠，曾 蕊，吳 帥，拓 云，劉珊珊＊＊(東北農(nóng)業(yè)大學(xué))雙向電泳技術(shù)體系的優(yōu)化是蛋白質(zhì)組學(xué)研究的前提和基礎(chǔ).本文針對(duì)大豆花瓣含有大量色素和酚等干擾物質(zhì)的現(xiàn)象，比較6種蛋白提取方法和2種蛋白裂解液配方，優(yōu)化膠條范圍和等電聚焦程序.結(jié)果表明:pH為4～7 IPG膠條適于大豆全花蛋白分離;TCA/丙酮+2D Clean Up試劑盒法去除雜質(zhì)充分，提取的蛋白含量高、純度好、分離效果佳、耗時(shí)短;蛋白裂