張袁森，張 琳，倪 娜，劉慧敏，王小琴，洪 穎，洪宗國

（中南民族大學(xué)民族醫(yī)藥研究中心，武漢 430074）

艾葉的體外凝血作用實驗研究*

張袁森，張 琳，倪 娜，劉慧敏，王小琴，洪 穎，洪宗國

（中南民族大學(xué)民族醫(yī)藥研究中心，武漢 430074）

[目的]傳統(tǒng)中醫(yī)常用艾炭作為止血藥，且具有較好的止血作用，探討止血的原理。[方法]將艾葉不同組分進行分離，或按傳統(tǒng)方法炮制，得到6種組分：鞣酸、艾焦油、5-叔丁基連苯三酚、艾炭、艾灰、艾葉揮發(fā)油。用家兔分別進行體外凝血實驗，得出實驗結(jié)果。[結(jié)果]凝血作用強弱順序為鞣酸＞艾焦油＞5-叔丁基連苯三酚＞艾炭＞艾灰＞艾葉揮發(fā)油。其中添加揮發(fā)油凝血時間長于對照品生理鹽水，故為活血組分。[結(jié)論]中醫(yī)采用艾炭止血有一定的科學(xué)性，但是艾炭的凝血效果是最差的，艾葉鞣酸才是真正的凝血物質(zhì)。為了解艾炭的止血原理，開發(fā)新的止血藥創(chuàng)造了條件。

艾葉；鞣酸；艾炭；艾焦油；5-叔丁基連苯三酚；凝血作用

艾葉為菊科植物艾的干燥葉，味苦，微溫，無毒。有理氣血，逐寒濕、溫經(jīng)、止血、安胎等作用。用于少腹冷痛，經(jīng)寒不調(diào)，宮冷不孕，吐血，崩漏經(jīng)多，妊娠下血；外治皮膚瘙癢。醋艾炭溫經(jīng)止血，用于虛寒性出血癥。為了解艾葉中止血有效成分，筆者對艾葉不同組分進行分離或按傳統(tǒng)方法進行炮制，制備出不同樣品并分別進行體外凝血實驗，從中尋找其最佳凝血組分，并分析其結(jié)構(gòu)，為開發(fā)新型止血藥物創(chuàng)造條件。

1 實驗

1.1 材料和儀器 健康家兔，體質(zhì)量2～4 kg，常規(guī)飼料喂養(yǎng)。手術(shù)刀片、試管、試管架、剪刀、鑷子、干棉球、微量加樣器、標(biāo)簽紙、稱量紙、天平、37℃恒溫水浴鍋、酒精棉球、生理鹽水（規(guī)格：100mL）、干棉球等市售。艾葉采自湖北蘄春，品質(zhì)鑒定蘄春縣藥工辦郭雙喜，采集時間2009年端陽節(jié)。丙酮、甲醇、白醋為市售，蒸餾水自制。

1.2 樣品的制備

1.2.1 醋艾炭 按《中華人民共和國藥典》2005年版方法[1]，將凈艾葉100 g置鍋內(nèi)用中武火炒至黑色，噴淋15 g米醋，滅盡火星，生炒干，取出及時攤晾，涼透。炮制后形如艾葉，黑褐色，有焦糊氣，略有醋氣。再搗碎成粉末。

1.2.2 鞣酸 用2∶3的丙酮水溶液250mL浸泡10 g艾葉絨30min,150MHz超聲提取20min。抽濾得到濾液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸去丙酮和水，收集燒瓶中剩余部分即得鞣酸[2]。

1.2.3 艾焦油 將艾葉200 g放入鐵鍋中，用暗火燃燒，其上蓋玻璃板，收集其在玻璃罩上凝結(jié)而成的油狀物，待其冷卻，將其刮下，即為艾焦油。

1.2.4 揮發(fā)油 用蘄艾油簡式提取設(shè)備[3]按《蘄艾油簡式提取方法》[4]提取。100 g艾絨，浸泡30min，超聲提取45min，4倍量的水采用水蒸汽蒸餾4～6 h。

1.2.5 5-叔丁基連苯三酚 市售。

1.2.6 艾灰 將艾葉直接暗火燒盡得冷卻即得艾灰。

1.3 實驗方法 取刻度試管14支，分別加入樣品鞣酸、艾焦油、5-叔丁基連苯三酚、艾炭、艾灰各0.05 g，艾葉揮發(fā)油、生理鹽水各1滴（約0.05 g），每種樣品各兩支試管。耳靜脈采血法取兔血，每試管1mL，將試劑與血液迅速混勻后置37℃恒溫水浴鍋內(nèi)。每隔5 s輕輕傾斜試管1次，至血液不再流動即血液凝固為止，記錄全凝血時間，再分別計算各組分的凝血時間。重復(fù)體外凝血實驗，取重復(fù)性好數(shù)據(jù)。

2 結(jié)果與 討論

2.1 凝血效果 按1.3實驗方法分別測定不同樣品的凝血時間，結(jié)果見表1。

由表1可知，不同樣品的凝血作用順序為鞣酸＞艾焦油＞5-叔丁基連苯三酚＞艾碳＞艾灰＞生理鹽水＞艾揮發(fā)油。

2.2 艾葉揮發(fā)油的活血作用 由表1可知，艾葉揮發(fā)油凝血時間長于對照品生理鹽水，故實際為活血成分。艾葉揮發(fā)油化學(xué)成分為萜類物質(zhì)[5]，是艾灸與搽劑的主要藥物成分，有通經(jīng)活絡(luò)，活血化瘀作用。故中醫(yī)將艾葉作為止血劑使用時，必須將活血的揮發(fā)油除去，這是中醫(yī)將艾葉炒炭炮制工藝的主要目的。盡管傳統(tǒng)中醫(yī)并沒有意識到這一點。

2.3 艾炭的凝血作用 表1表明艾炭確實具有凝血作用。證明了傳統(tǒng)中醫(yī)療法的有效性。但艾炭在實驗樣品中的凝血作用是除揮發(fā)油外最弱的，這是由于雖然炒炭工藝去除了活血的揮發(fā)油，但包含了艾葉炒制后所有的成分，真正的有效成分只占其中的一小部分。其次，加入米醋的目的是與酚羥基形成酯，防止酚類物質(zhì)在炒制工藝中被氧化成醌，但此工藝可能減弱了其凝血作用。炒制工藝使艾葉中鞣酸、黃酮等成分發(fā)生了分解，文獻報道黃酮多具有活血作用[6]，這種分解有利于艾炭的凝血作用，但鞣酸的分解對凝血作用的影響如何還需要進一步研究。

2.4 艾葉鞣酸的凝血作用 表1中鞣酸具有最強的凝血作用。鞣酸具有澀性，有收斂與止血功能。原因在于鞣酸中存在大量絡(luò)合基團能與血液中金屬離子產(chǎn)生絡(luò)合作用，從而使血液凝聚。艾葉中含有大量的鞣酸，其中產(chǎn)于蘄春的蘄艾其鞣酸含量更高達13%，可作為止血凝血劑的理想原料。艾葉中含有多種不同結(jié)構(gòu)的鞣酸，需要進一步分離繼而分別研究其凝血作用。

2.5 艾葉燃燒焦油和5-叔丁基聯(lián)苯三酚的凝血作用 艾葉燃燒后產(chǎn)生焦油，主要成分為艾葉鞣酸與黃酮等大分子裂解后的較大碎片，其中有大量的長鏈烴類和酚類物質(zhì)，后者具有絡(luò)合功能和止血凝血作用。但由于酚類物質(zhì)在艾葉燃燒焦油中比例較小，故整體上的凝血效果小于鞣酸。在艾葉燃燒物的重組分和焦油中均含有5-叔丁基連苯三酚[7]，它具有強的抗自由基、抗氧化、抗菌作用，同時本實驗證明它也具有強的凝血作用，但它在焦油的各組分中并非最強的凝血物質(zhì)。

3 結(jié)論

筆者分別制備不同艾葉組分和按傳統(tǒng)工藝炒制艾炭，進行體外凝血實驗，結(jié)果表明凝血作用順序為鞣酸＞艾焦油＞5-叔丁基連苯三酚＞艾碳＞艾灰＞生理鹽水＞艾油。鞣酸具有最強的凝血作用，艾揮發(fā)油具有活血作用。

傳統(tǒng)中醫(yī)艾炭炒制工藝通過去除艾葉中的揮發(fā)油從而除去活血成分，并保留其他凝血成分，使艾炭具有凝血止血功能。加入米醋能保護酚羥基，防止炒制過程中氧化，均體現(xiàn)了該工藝的合理性。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：61-61.

[2]張 建，李寶坤，毛曉英.超聲波提取葡萄梗中單寧的研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008.36(23):9828-9830.

[3]洪宗國.蘄艾油簡式提取設(shè)備：中國，ZL01212203[P].2001-11-01.

[4]洪宗國.蘄艾油簡式提取方法:中國，ZL01106404[P].2003-10-15.

[5]洪宗國，余學(xué)龍，陳藝球.蘄艾、北艾、川艾揮發(fā)油化學(xué)成分比較研究[J].中草藥,1996,27（3):138-139.

[6]楊宇杰，董曉強，郭金甲.山楂葉總黃酮活血化瘀作用實驗研究[J].河北醫(yī)學(xué)，2009,15(1):22-23.

[7]楊 梅，江 丹，洪宗國，等.艾葉燃燒物的抗自由基作用[J].中南民族大學(xué)學(xué)報，2008,27（3）:48-49.

Experimentstudy on externalhemagglutination testof argywormwood leaf

ZHANGYuan-sen,ZHANG lin,NiNa，etal
（NationalMedicine Research Center， South-CentralUniversity for Nationalities， Wuhan 430074，China）

[Objective]Argywormwood leaf carbonwascommonly used asa hemostatic by traditionalChinese doctorsbecause itshowed abetter role in hemostasis.We conducted an experiment in order to investigate the principlesofhemostasis.[Methods]After separating the differentcomponentsofArtemsiaargyior concocting them by traditionalmethods,we separated 6 kind of components:tannin,Artemsia argyi tar,5-tert-butyl trihydroxybenzene,Artemsia argyicarbon,Artemsia argyiash and Artemsia argyivolatile oil.Their coagulation effect then detected in vitro.[Results]The results showed that themosteffective componentwas tannin,followed by Artemsia argyi tar,5-tert-butyl trihydroxybenzene,Artemsia argyi carbon,Artemsia argyi ash,and Artemsia argyi volatile oil.Among them.Artemsia argyi volatile oilhad someblood-activating componentsince itcould prolong the clotting time ifadding.[Conclusion]Ourexperimenthasestablished the conditions forunderstanding the processingmechanism of Artemsia argyicarbon and developed a new hemostatic.Themost effective componentwas tannin.

Artemsia argyi；tannin；Artemsia argyicarbon；Artemsia argyitar；5-tert-butyl trihydroxybenzene；the coagulation effect

R285.5

A

1672-1519(2010)02-0156-02

2009年中南民族大學(xué)大學(xué)生創(chuàng)新科研基金（本科）（KYCX090503Z）。

張袁林（1989-），男，中南民族大學(xué)2007級藥物制劑專業(yè)學(xué)生。

洪宗國。

2009-11-13）