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      火棘對(duì)D-半乳糖致衰老小鼠抗氧化作用的實(shí)驗(yàn)研究

      2011-06-06 08:23:58覃紅斌魏蕾
      關(guān)鍵詞:火棘生理鹽水活力

      覃紅斌,魏蕾

      (湖北民族學(xué)院醫(yī)學(xué)院,湖北 恩施 445000;武漢大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院,湖北 武漢 430071)

      火棘對(duì)D-半乳糖致衰老小鼠抗氧化作用的實(shí)驗(yàn)研究

      覃紅斌,魏蕾

      (湖北民族學(xué)院醫(yī)學(xué)院,湖北 恩施 445000;武漢大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院,湖北 武漢 430071)

      目的研究火棘對(duì)D-半乳糖致衰老小鼠的抗氧化的作用。方法將小鼠隨機(jī)分為生理鹽水對(duì)照組(簡(jiǎn)稱(chēng)生理鹽水組),AD模型組(簡(jiǎn)稱(chēng)模型組),藥物(低、高劑量)組,每組10只,共40只。連續(xù)胃飼小鼠8周后取血液、肝臟,并將小鼠斷頭處死,制作海馬10%組織勻漿,分別取血液、肝臟、腦,測(cè)定超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活力、丙二醛含量及單胺氧化酶活力。結(jié)果與對(duì)照組比較,藥物顯著增加血液和肝臟中超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活力,顯著降低丙二醛含量;顯著降低腦中丙二醛含量,顯著降低腦中單胺氧化酶活力;單胺氧化酶活力未見(jiàn)顯著差異。結(jié)論火棘能增加血液和肝臟中超氧化物歧化酶活力,能降低血液、肝臟和腦組織中丙二醛活性,具有一定的抗氧化作用。

      火棘;AD模型小鼠;抗氧化

      1 材料與方法

      1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選用雌性Wistar小鼠,4~6月齡,,由武漢大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

      1.2 實(shí)驗(yàn)藥物及試劑 火棘果實(shí)采摘于恩施市雙河鄉(xiāng),由湖北中醫(yī)學(xué)院藥用植物鑒定研究所鑒定為火棘,挑選上好的果實(shí)并曬干磨粉;D-半乳糖(上海試劑二產(chǎn));SOD、MAO、MDA GSH-Px試劑盒(南京建成生物工程研究所);酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀DG3022(華東電子管廠(chǎng))。

      1.3 造模及實(shí)驗(yàn)分組 隨機(jī)分為生理鹽水對(duì)照組(簡(jiǎn)稱(chēng)生理鹽水組),AD模型組(簡(jiǎn)稱(chēng)模型組),藥物(低、中、高劑量)組,每組10只。生理鹽水組每天頸背部皮下注射等量生理鹽水,模型組、藥物組每天頸背部皮下注射1%D-半乳糖100mg/kg。造模成功后,第二天開(kāi)始灌胃給藥,藥物(低、高劑量)組每天分別給予(20mg/kg、80mg/kg)火棘灌胃,模型組、生理鹽水組每天給予80mg/kg生理鹽水灌胃,連續(xù)8周。

      1.4 酶活性測(cè)定 連續(xù)胃飼8周后,取血液、肝臟,并將小鼠斷頭處死,取出海馬組織,制作海馬10%組織勻漿,測(cè)定超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-PX)活力、丙二醛(MDA)含量及單胺氧化酶(MAO)活力。

      1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 數(shù)據(jù)以表示,采用統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析和t檢驗(yàn)。

      2 結(jié)果

      2.1 火棘對(duì)小鼠腦中SOD、GSH-Px、MDA、MAO的影響 造模后,小鼠海馬中SOD、GSH-Px活性降低,MAO的活性增高及MDA的含量增加,且模型組與生理鹽水組相比有顯著性差異(P<0.01);用藥后各組小鼠海馬中SOD、GSH-Px活性增高,MAO的活性降低及MDA的含量減少,且改變程度與藥物劑量呈正相關(guān),藥物高劑量組與模型組相比有顯著性差異(P<0.01);而在藥物低劑量組與模型組相比無(wú)顯著性差異(見(jiàn)表1)。

      2.2 火棘對(duì)小鼠肝臟SOD、GSH-PX、MDA、MAO的影響 與生理鹽水組比較,AD模型組肝臟中SOD、GSH-Px活力顯著降低,MDA含量顯著增高;火棘低、高劑量組顯著增高肝臟中SOD、GSH-Px活力,顯著降低MDA含量,MAO活力未見(jiàn)顯著差異(見(jiàn)表2)。

      2.3 火棘對(duì)小鼠血液SOD、GSH-PX、MDA的影響與生理鹽水組比較,模型組血液中SOD、GSH-Px活力顯著降低,MDA含量顯著增高;火棘低、高劑量組顯著增高血液中SOD、GSH-Px活力,顯著降低MDA含量(見(jiàn)表3)。

      表1 對(duì)小鼠腦中SOD、GSH-Px、MDA、MAO的影響(±s)

      表1 對(duì)小鼠腦中SOD、GSH-Px、MDA、MAO的影響(±s)

      注:與生理鹽水組比較,#P<0.05,##P<0.01;火棘低、高劑量組與AD模型組比較,*P<0.05。

      組別 n SOD GSH-Px MDA MAO(U/mgprot) (活力單位) (nmol/mgprot) (U/h/mgprot)生理鹽水組 10108.42±26.57199.25±48.5415.37±6.8565.38±16.25AD模型組 1078.49±36.55# 144.90±47.3227.68±10.43## 104.31±27.67##火棘低劑量組 10101.85±28.52156.45±38.42# 5.54±2.33* 79.48±18.56*火棘高劑量組 10120.53±38.58158.92±30.858.87±4.53* 76.39±14.68*

      表2 對(duì)小鼠肝臟中SOD、GSH-Px、MDA、MAO的影響(±s)

      表2 對(duì)小鼠肝臟中SOD、GSH-Px、MDA、MAO的影響(±s)

      注:與生理鹽水組比較,##P<0.01,#P<0.05;火棘低、高劑量組與AD模型組比較,*P<0.05,**P<0.01。

      組別 n SOD GSH-Px MDA MAO(U/mgprot) (活力單位) (nmol/mgprot) (U/h/mgprot)生理鹽水組 10115.79±35.57286.81±143.3764.37±29.58151.25±67.12AD模型組 1074.53±21.51# 167.25±81.46# 97.57±23.56## 127.83±22.95火棘低劑量組 10119.68±31.59* 197.01±121.4158.23±17.43* 127.77±24.53火棘高劑量組 10121.79±25.32** 296.48±143.35* 49.92±17.42** 140.10±21.49

      表3 對(duì)小鼠血液中SOD、GSH-Px、MDA的影響(±s)

      表3 對(duì)小鼠血液中SOD、GSH-Px、MDA的影響(±s)

      注:與生理鹽水組比較,##P<0.01:火棘低、高劑量組與AD模型組比較,·P<0.05,··P<0.01。

      組別 n SOD GSH-Px MDA(U/mgprot) (活力單位) (nmol/mgprot)生理鹽水組 10118.25±19.45247.14±67.343.79±0.76AD模型組 1071.35±13.38## 121.66±43.42## 9.50±2.34##火棘低劑量組 1095.46±21.84* 207.47±94.68* 3.81±0.85**火棘高劑量組 10107.10±19.94** 224.39±89.65** 3.90±1.10**

      3 討論

      近年來(lái),國(guó)內(nèi)外對(duì)火棘的藥理作用進(jìn)行了較多的研究,火棘始載于《滇南本草》,其果實(shí)性味甘酸,藥用具有健脾消積,生津止渴,清熱解毒,活血止血的功效[3]。正常機(jī)體抗氧化系統(tǒng)的氧化酶有SOD、GSH-Px等,SOD能將組織細(xì)胞的超氧陰離子自由基歧化生成過(guò)氧化氫,減少自由基對(duì)細(xì)胞組織的損傷;GSH-Px是機(jī)體的一種含硒清除自由基和抑制自由基反應(yīng)的酶系統(tǒng),可以將過(guò)氧化氫分解,清除MDA和其它過(guò)氧化氫產(chǎn)物,阻止體內(nèi)自由基引起的膜脂質(zhì)過(guò)氧化。作為脂質(zhì)過(guò)氧化的產(chǎn)物,MDA能直接反應(yīng)體內(nèi)自由基損傷情況,現(xiàn)已經(jīng)明確許多疾病或者癥狀如腫瘤、炎癥、心腦缺血、動(dòng)脈粥樣硬化等,都與自由基有關(guān)[4]。本研究實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:火棘明顯對(duì)AD模型小鼠血液、肝臟的酶活性產(chǎn)生改變,顯著增高,低、高劑量組抗氧化酶活力,同時(shí)降低血液、肝臟及腦組織中MDA含量,顯示其明顯的抗氧化作用;AD患者超氧化物歧化酶活性減弱,腦組織中葡萄糖-6磷酸脫氫酶增多,都會(huì)導(dǎo)致氧化應(yīng)激增加,自由基增多淤積。由于神經(jīng)元富含對(duì)自由基敏感的不飽和脂肪酸,因此它容易受到自由基的傷害,最終使神經(jīng)細(xì)胞死亡和AD的發(fā)生[5]。如在過(guò)量運(yùn)動(dòng)期間添加具有抗氧化作用的營(yíng)養(yǎng)素(如維生素A、維生素C及硒等),能對(duì)機(jī)體產(chǎn)生保護(hù)作用,使機(jī)體免受自由基的損傷,增強(qiáng)運(yùn)動(dòng)能力,如小鼠補(bǔ)充還原型谷胱甘肽后,游泳能力提高20%~40%[6]。在本實(shí)驗(yàn)研究中,通過(guò)造模后,小鼠海馬中SOD、GSH-Px活性降低,MAO的活性增高及MDA的含量增加,且模型組與生理鹽水組相比有顯著性差異(P<0.01);用藥后各組小鼠海馬中SOD活性增高,MAO的活性降低及MDA的含量減少,且改變程度與藥物劑量呈正相關(guān),藥物高劑量組與模型組相比有顯著性差異(P<0.01);而在藥物低劑量組與模型組相比則沒(méi)有顯著性差異。這說(shuō)明AD模型小鼠腦中MAO活力顯著增高,火棘使之顯著降低,而不影響肝臟MAO活力;同時(shí)與生理鹽水組比較時(shí),模型組血液中SOD、GSH-Px活力顯著降低,MDA含量顯著增高;火棘低、高劑量組顯著增加血液中SOD、GSH-Px活力,顯著降低MDA含量,這對(duì)抗氧化藥物的研制具有積極的意義?;鸺瑢?duì)抗氧化作用的機(jī)理目前則還不十分清楚,有待于進(jìn)一步研究。目前對(duì)火棘的研究工作主要集中在對(duì)火棘營(yíng)養(yǎng)成分和化學(xué)成分的研究方面,對(duì)火棘有關(guān)成分的藥理、毒理、人體對(duì)其吸收和利用程度及臨床研究不夠。有必要研究火棘有關(guān)成分對(duì)脂代謝、糖代謝、肥胖癥、腫瘤、衰老和疲勞以及消化功能的影響及作用機(jī)理,在此基礎(chǔ)上開(kāi)發(fā)相應(yīng)的營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑或有關(guān)疾病的預(yù)防或治療劑,使火棘真正實(shí)現(xiàn)它的價(jià)值。

      [1]江蘇醫(yī)學(xué)院.中藥大詞典:上冊(cè)[M].上海:上海科技出版社,1997;1(1):96~97.

      [2]袁琳.老年癡呆的病理、病機(jī)及臨床診斷[J].現(xiàn)代康復(fù),2009,(1):68.

      [3]仝月澳,周厚基.果樹(shù)營(yíng)養(yǎng)診斷法[J]北京:農(nóng)業(yè)出版社,1982,11(2)127~129

      [4]鄭靈芝,李素霞,袁勤生.大豆異黃酮抗氧化性質(zhì)的研究[J].食品與藥品,2006,8(2):48-50.

      [5]朱慶磊,薛橋,馬路,等.D-半乳糖致衰老小鼠重要臟器氧化水平和抗氧化能力的變化[J].中國(guó)老年多器官疾病雜志,2002,1(2):122.

      [6]侯建軍,魏文科.火棘通便潤(rùn)腸作用的藥理研究[J],中國(guó)臨床醫(yī)藥雜志,2002;3(6):81-83

      R332

      A

      1008-4118(2011)04-0006-03

      10.3969/j.issn.1008-4118.2011.04.03

      湖北省自然科學(xué)基金2008CDB222

      覃紅斌(1966-),男(土家族),湖北恩施人,副教授,武漢大學(xué)醫(yī)學(xué)部研究生主要從事組織學(xué)、病理生理學(xué)及中藥抗衰老研究?;鸺≒yracantha fortuneana)為薔薇科蘋(píng)果亞科火棘屬的野生灌木果樹(shù)植物,又名赤陽(yáng)子、火把果、紅火棘、小紅果等,湖北恩施地區(qū)叫紅果泡、救命糧、紅殼刺等?!侗静菥V目》中詳載火棘可以“通十二經(jīng)脈脈,除五臟惡氣,久服可輕身耐老”。目前已有研究表明,火棘具有抗疲勞、抗應(yīng)激、抗缺氧、抗氧化和增強(qiáng)免疫功能等作用[1]。老年癡呆癥即阿爾茨海默?。ˋlzheimer’s disease,AD),是慢性進(jìn)行性中樞神經(jīng)系統(tǒng)變性病導(dǎo)致的癡呆,是癡呆最常見(jiàn)的病因。AD以漸進(jìn)性記憶障礙、認(rèn)知功能障礙、人格改變以及語(yǔ)言障礙等神經(jīng)精神癥狀為特征,目前已經(jīng)成為僅次于心血管病、腫瘤、腦卒中的第四大老年學(xué)疾病[2]。本文通過(guò)觀察火棘對(duì)AD模型小鼠血液、肝臟、腦組織酶活性的調(diào)節(jié)作用,進(jìn)而探討火棘的作用機(jī)理,為其用于臨床抗氧化、抗衰老提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

      2011-10-08

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