徐博佳，鄭祖艷，蔣 鵬，張海芳

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江哈爾濱150040)

實驗研究

頭穴叢刺對慢性抑郁模型大鼠行為學(xué)改變的影響*

徐博佳，鄭祖艷，蔣 鵬，張海芳

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江哈爾濱150040)

目的:通過觀察頭穴叢刺對慢性不可預(yù)見性應(yīng)激模型大鼠行為學(xué)的改變，證明頭穴叢刺對抑郁癥的治療作用。方法:24只3月齡健康雄性Wister大鼠，隨機分為正常對照組、模型組、針刺組，每組8只;用慢性不可預(yù)見性輕度刺激結(jié)合孤養(yǎng)法造模，給予模型組和針刺組14天隨機不同應(yīng)激刺激，之后對針刺組進(jìn)行針刺治療，選“百會”“神庭”及“四神聰”，留針20 min，每日針刺1次，連續(xù)針刺治療14天。在實驗前1天、實驗的第14天、21天、28天對大鼠進(jìn)行測量體重、open－field評分及糖水消耗試驗。結(jié)果:造模后14天模型組和針刺組大鼠體重、糖水消耗量明顯低于正常對照組(P＜0.05);造模后21天模型組大鼠體重、糖水消耗量均明顯低于正常對照組(P＜0.05)，但針刺組大鼠僅體重明顯低于正常對照組(P＜0.05)而糖水消耗量雖低于正常對照組但不明顯(P＞0.05);造模第28天模型組大鼠體重、垂直運動、水平運動、糖水消耗量均明顯低于針刺組(P＜0.05)，針刺組與正常對照組之間無顯著差異。結(jié)論:頭穴叢刺對慢性不可預(yù)見性應(yīng)激結(jié)合孤養(yǎng)法制造抑郁癥模型大鼠的行為學(xué)改變有治療作用。

頭穴叢刺;慢性抑郁;open－field評分;糖水消耗試驗

抑郁癥目前已成為全球性的主要精神衛(wèi)生問題，世界衛(wèi)生組織預(yù)計，到2020年抑郁癥造成的全球疾病負(fù)擔(dān)將僅次于冠心病，因而被稱為新世紀(jì)健康的第二殺手［1］。隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的不斷發(fā)展，對抗抑郁藥物的深入研究及廣泛使用，對抑郁癥的治療臨床上取得了一定的療效，但是抗抑郁藥物長期服用療效降低，且有嚴(yán)重的毒副作用及過量使用的危險。針灸治療抑郁癥已取得肯定療效，且不良反應(yīng)輕微短暫［2］，故深入探討針灸治療抑郁癥作用機理具有重要的意義。本實驗?zāi)M人的慢性應(yīng)激刺激過程，設(shè)計慢性應(yīng)激抑郁模型大鼠，并以此為研究對象，探討頭穴叢刺對抑郁癥的治療作用。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

本實驗以清潔級3月齡體重在(200±20)g之間的健康雄性Wister大鼠為研究對象(購于黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗室)。

1.2 實驗器材

電子稱，量杯，自制敞箱(長80 cm、寬80 cm、高40 cm)，SDZ－Ⅱ型電針治療儀。

1.3 分組

將大鼠購回后，在實驗室飼養(yǎng)1周，以適應(yīng)實驗室環(huán)境，使大鼠自由攝取食水。然后對每只大鼠分別進(jìn)行3次開野實驗(Open－fild)，將水平運動加垂直運動次數(shù)平均大于100次或少于50次的大鼠剔除，再按體重由輕到重排序，將序號輸入電腦隨機分為正常對照組、模型組和針刺組，每組8只，正常對照組每籠4只，模型組和頭穴叢刺組單籠飼養(yǎng)。

1.4 模型制備

按照文獻(xiàn)方法［3］制備大鼠慢性應(yīng)激抑郁模型。模型組和頭穴叢刺組單籠飼養(yǎng)并接受14天各種不同的應(yīng)激刺激，每日隨機不定時選取一種刺激。刺激包括高溫刺激(45℃，5 min)、冷水游泳刺激(4℃，5 min)、晃動刺激(1次/s，15 min)、夾尾3 min、足底電擊(電壓50 mV，每隔1 min刺激1次，每次持續(xù)10 s，共30次)、禁水24 h、禁食48 h和晝夜顛倒等應(yīng)激刺激，每天隨機安排1種，在刺激之前給予持續(xù)10 s的鈴聲提示，正常對照組每日抓取1次，予以10 s鈴聲提示但不予刺激。

1.5 頭穴叢刺法

針刺組在實驗的第15天起，于每日上午對大鼠進(jìn)行針刺治療。參照《實驗動物穴位圖譜》［4］取“百會”、“四神聰”、“神庭”穴，用華佗牌30號半寸毫針進(jìn)行針刺，均平刺0.2 cm左右，針柄接SDZ－Ⅱ型電針治療儀，頻率2 Hz，電流強度0.6 mA左右，以大鼠頭部微顫為宜。留針20 min，每日針刺1次，連續(xù)針刺治療14天。

1.6 觀測指標(biāo)及檢測方法

1.6.1 體重 每只動物于造模前1天、造模后14天、21天、28天分別稱量體重，記錄體重變化情況。

1.6.2 開野試驗(Open－filed法) 包括水平運動評分及垂直運動評分，水平的運動評分反映了實驗大鼠自由活動程度的情況;垂直的運動評分則反映實驗大鼠對新鮮環(huán)境的好奇程度。因此開野實驗是抑郁癥研究最常用的行為指標(biāo)之一。開野實驗(open－field)測定方法:參考文獻(xiàn)［5］，本實驗使用的敞箱為80 cm×80 cm×60 cm立方體，敞箱的四壁及底面皆涂為黑色，底面用白線劃分成等面積的25個方塊。實驗時將一只大鼠置于敞箱底面的正中心的方格內(nèi)，以大鼠穿越底面的格數(shù)(四只爪均踏入的方格為記數(shù)格)為水平運動(crossing)次數(shù)，以后肢直立次數(shù)(兩前爪騰空或攀附敞箱壁)為垂直運動(rearing)次數(shù)，每只大鼠在實驗前1天、實驗28天各測定1次，每次測定計時3 min，記錄大鼠水平運動的次數(shù)及垂直運動的次數(shù)，每只大鼠記錄結(jié)束后徹底清潔敞箱后才可以進(jìn)行下1只大鼠的開野實驗觀察。

1.6.3 糖水消耗試驗 糖水消耗試驗反應(yīng)了大鼠對食物愉快感的變化。方法:開野實驗后，將大鼠禁水24 h后給予1%的蔗糖水250 ml，同時禁食，24 h后量所剩蔗糖水的量，計算大鼠在24 h內(nèi)蔗糖水消耗量。以蔗糖水消耗與體重比值的方法來比較，以每千克動物體重消耗糖水重量(ml/kg)計算，以降低體重因素對糖水消耗試驗結(jié)果的影響。在實驗前1天、14天、21天、28天各測定1次。

1.7 統(tǒng)計方法

采用SPSS16.0統(tǒng)計軟件系統(tǒng)處理實驗數(shù)據(jù)，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，采用單因素方差分析，以P＜0.05為顯著性差異的標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 頭穴叢刺對大鼠體重的影響

見表1。實驗前各組大鼠的體重未見明顯差異，具有可比性(P＞0.05);造模14天后，模型組、針刺組與正常組比較大鼠的體重明顯下降(P＜0.05);造模后21天，模型組、針刺組與正常組比較大鼠體重顯著下降(P＜0.05)，模型組與針刺組比較大鼠體重?zé)o明顯差異(P＞0.05)，但模型組大鼠體重普遍低于針刺組;造模后28天模型組大鼠體重與正常組比較有非常顯著的下降(P＜0.01)，針刺組與正常組比較雖大鼠體重普遍偏低但未見顯著差異(P＞0.05)，模型組大鼠體重明顯低于針刺組(P＜0.05)。模型組大鼠經(jīng)28天的慢性刺激體重逐漸下降，符合抑郁模型體重逐漸下降的要求;在造模14天模型組與針刺組大鼠體重未見明顯差異，但因頭穴叢刺治療的干預(yù)實驗后期針刺組大鼠體重明顯高于模型組，提示頭穴叢刺療法可增加抑郁模型大鼠體重，且較長時間的治療才會體現(xiàn)出療效。

表1 各組大鼠體重增長情況 (±s，單位:g)

表1 各組大鼠體重增長情況 (±s，單位:g)

注:與正常組比較，*P＜0.05;與針刺組比較，＊＊P＜0.05。

組別 n 實驗前1天 第14天 第21天 第28天正常組 8 203.4±15.2 258.6±18.7 297.3±19.8 346.1±12.3模型組 8 205.1±14.9 231.5±11.2*255.6±12.8*287.7±10.4＊＊針刺組 8 199.5±18.7 228.3±17.4*279.2±9.3*328.0±12.8

2.2 開野試驗(Open－filed法)

見表2、3。予以應(yīng)激刺激前各組大鼠的水平及垂直運動次數(shù)無顯著差異(P＞0.05)。在針刺治療之前，與正常組相比，模型組與針刺組大鼠的水平及垂直運動次數(shù)明顯減少，有非常顯著性差異(P＜0.05);針刺治療后，針刺組的水平及垂直運動次數(shù)與模型組相比明顯增加，有顯著性差異(P＜0.05)，通過觀察模型組大鼠水平及垂直運動次數(shù)逐漸減少說明隨刺激的時間延長，大鼠的抑郁程度也在逐步加重，提示頭穴叢刺療法能增加抑郁模型大鼠的運動度及好奇度，具有防治抑郁的作用。

表2 Open－filed法測定各組大鼠水平運動情況 (±s，單位:次)

表2 Open－filed法測定各組大鼠水平運動情況 (±s，單位:次)

注:與正常組比較，*P＞0.05;與針刺組比較，＊＊P＜0.05。

組別 n 實驗前1天 第28天正常組862.4±9.2 55.9±10.4模型組 8 60.1±8.9* 21.7±6.5＊＊針刺組 8 61.5±10.3*47.6±10.7

表3 Open－filed法測定各組大鼠垂直運動情況(±s，單位:次)

表3 Open－filed法測定各組大鼠垂直運動情況(±s，單位:次)

注:與正常組比較，*P＞0.05;與針刺組比較，＊＊P＜0.05。

組別 n 實驗前1天 第28天正常組818.7±6.5 16.1±5.6模型組 8 19.2±7.4* 8.2±4.7＊＊針刺組 8 18.1±11.3*13.8±9.2

2.3 糖水消耗試驗結(jié)果

表4 各組大鼠糖水消耗量情況 (±s，單位:ml/kg)

表4 各組大鼠糖水消耗量情況 (±s，單位:ml/kg)

注:與正常組比較，*P＞0.05;與針刺組比較，＊＊P＜0.05。

組別 n 實驗前1天 第14天 第21天 第28天正常組8 67.3±12.5 78.5±11.0 87.4±13.8 95.6±12.9模型組8 65.2±9.8* 67.1±8.5 72.1±6.8 76.4±8.5＊＊針刺組 8 66.7±10.2*66.9±10.4 76.9±11.2 90.2±9.8

由表4可見，予以應(yīng)激刺激前各組大鼠的糖水消耗量未見顯著差異(P＞0.05)。針刺治療前，與正常組相比，模型組與針刺組的糖水消耗量明顯降低，存在非常明顯差異(P＜0.05);針刺治療后，針刺組的糖水消耗量明顯高于模型組，具有顯著性差異(P＜0.05)，提示頭穴叢刺療法能增加抑郁模型大鼠的糖水消耗量。

3 討論

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，長時間低強度的壓力刺激是誘發(fā)抑郁癥的主要病因，而應(yīng)激事件則可以促發(fā)抑郁癥，因此抑郁癥的發(fā)生與情志不暢密切相關(guān)。

從臨床表現(xiàn)來看，抑郁癥病位在腦，腦為“元神”之府，腦神失調(diào)是抑郁癥的主要病理因素，故健腦調(diào)神是針灸治療抑郁癥的關(guān)鍵。頭穴叢刺療法經(jīng)多年臨床驗證具有良好的開竅養(yǎng)神的作用，本實驗所取“百會”、“神庭”、“四神聰”為目前治療抑郁癥的臨床常用腧穴［6］，“百會”、“神庭”位于督脈［7］，督脈總領(lǐng)一身之陽氣，聯(lián)系各臟腑，故針刺“百會”、“神庭”通過督脈調(diào)節(jié)全身機能，促臟腑功能恢復(fù)，“四神聰”為經(jīng)外奇穴具有醒神開竅的作用，諸穴合用以調(diào)神醒腦。

本實驗所建立的慢性輕度不可預(yù)見性應(yīng)激抑郁模型(CUMS)就是利用實驗大鼠受到長期、輕度、不可預(yù)見刺激，同時采用鈴聲提示的方式造成條件反射，增強大鼠恐懼感及不愉悅感，模擬人類的抑郁癥病程，比較各組大鼠遭受應(yīng)激刺激后體重、Open－field法測定垂直水平運動度、糖水消耗量變化。實驗結(jié)果顯示造模后14天模型組與針刺組無明顯差異，大鼠體重增長緩慢，垂直水平運動度減少，糖水消耗量降低，說明大鼠活動度降低，好奇度減弱，食欲減退，快感缺乏，類似人類抑郁癥的表現(xiàn)。造模后21天模型組與針刺組出現(xiàn)差異，造模后28天模型組與針刺組明顯差異，提示頭穴叢刺對大鼠抑郁狀態(tài)有明顯防治作用，治療兩周左右體現(xiàn)明顯效果，但其作用機理還待進(jìn)一步研究。

［1］郭克鋒，關(guān)菊香.抑郁癥患者的治療難度預(yù)測性研究［J］.現(xiàn)代康復(fù)，2001，5(8):48

［2］鐘寶亮，黃悅勤，李會娟.針灸治療抑郁癥療效和安全性的系統(tǒng)評價［J］.中國心理衛(wèi)生雜志，2008，22(9):641－647

［3］Murua VS，Gomez RA，Andrea ME，et al.Shuttle－box deficits induced by chronic variable stress:reversal by imipramine administration［J］.Pharmacol Biochem Behav，1991，38(1):125－130

［4］李忠仁.實驗針灸學(xué)［M］.北京:中國中醫(yī)藥出版社，2003:327－329

［5］Katz R，Roth K，Carroll B.Acute and chronic stress effects on openfield activity in the rat:Implications for amodel of depression［J］.Neurosci Biobehav Rev，1981，5:247

［6］胡方梅，崔友祥，程為平.程為平教授加強揚刺治療抑郁證臨床體會［J］.針灸臨床雜志，2010，26(3):58－60

［7］陳慶，莊子齊，龍偉芳.針刺百會、神庭、神門為主治療抑郁癥30例療效觀察［J］.新中醫(yī)，2007，39(8):64－65

Impact of Scalp Cluster－needling on Chronic Depression and Behavioral Changes for Rats

XU Bo－Jia，ZHENG Zu－yan，JIANG Peng，ZHANG Hai－fang
(The First Affiliated Hospital of Heilongjiang University of Chinese Medicine，Harbin，150040，China)

Objective:To observe the head point cluster－needling for chronic unpredictable stress model in rats＇behavioral changes，and to prove the head point cluster－needling for the treatment of depression.Methods:24 three－month－old male Wister rats were randomly divided into normal comparison group，model group，the head point cluster－needling group，eight rats in each group;with chronic unpredictable mild irritation with isolation to support law modeling，the model group and the head point cluster－needling group were given 14 days randomly different stress stimuli，followed by the head group of the cluster－needling acupuncture point treatment，choose“shenting”，“Baihui”and“Sishencong”，leaving the needle 20min，once a day for 14 days.One day before the experiment，experiment on the 14th day，21st day，28th day measured body weight，open－field test scoring and sugar consumption.Results:Modeling the model group and 14 days after the first hole cluster－needling group were body weight，sugar consumption was significantly lower than that in the control group(P＜0.05);modeling models in rats 21 days after the body weight，sugar consumption was significantly lower than that in the control group(P＜0.05)，but the first hole only cluster－needling group was significantly lower than that in the normal weight control group(P＜0.05)and sugar consumption，although lower than that in the control group but not significant(P＞0.05);modeling the first 28 days rats body weight，vertical movement，horizontal movement，sugar consumption were significantly lower than those in the first hole cluster－needling group(P＜0.05)，the first point cluster－needling group and normal control group，no significant differences.Conclusion:The first hole cluster－needling for chronic unpredictable stress method of manufacturing support with isolated rat model of depression，behavioral changes has a therapeutic effect.

Head point cluster－needling;Chronic depression;Open－field test scoring;Sugar consumption experiment

徐博佳(1979－)，女，主治醫(yī)師，研究方向:針刺治療抑郁癥的機理研究。

R246.6

A

1005－0779(2012)006－0047－03

教育部“春暉計劃”合作科研項目，編號:31 Y－43。

2011－12－13