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      沙門氏菌的檢測技術(shù)進(jìn)展

      2012-08-15 00:52:47張書蕭王少輝陳曉平馬志永郭歡歡田明堯金寧一
      關(guān)鍵詞:噬菌體沙門氏菌特異性

      劉 喆,張書蕭,王少輝,陳曉平,馬志永,郭歡歡,3 ,田明堯, 金寧一

      (1.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院,長春 130118; 2.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所 動物源性食品安全研究中心,上海 200241)

      沙門氏菌是一種可以引起沙門氏菌病的革蘭氏陰性菌,是最常見的人畜共患型食源性致病菌之一。消費(fèi)者食用被沙門氏菌污染的食物12~72 h后即可出現(xiàn)腹瀉、腹痛、惡心、嘔吐、發(fā)熱等癥狀。近年來,沙門氏菌在全球范圍內(nèi)引起的危害呈不斷上升趨勢。在歐洲,每年有超過16萬人感染沙門氏菌,發(fā)生率約為0.035%[1]。在美國,每年有超過140萬人感染沙門氏菌,直接經(jīng)濟(jì)損失超過24億美元[2]。在中國,每年由沙門氏菌造成的食物中毒事件占到全部食物中毒事件的40%~60%。

      由于沙門氏菌血清型繁多,加上超過50種的復(fù)雜的各類生化反應(yīng),使得傳統(tǒng)的沙門氏菌檢測方法難以滿足實(shí)際情況的需要。為探求快速、準(zhǔn)確、簡單、高靈敏度的檢測方法,世界各國學(xué)者進(jìn)行了大量研究,人們已經(jīng)創(chuàng)建出多種沙門氏菌檢測方法,有一些方法已經(jīng)得到實(shí)踐應(yīng)用。

      1 傳統(tǒng)檢測方法

      GB4789.4-2010是中國目前規(guī)定的食品中沙門氏菌的標(biāo)準(zhǔn)檢測方法。

      根據(jù)沙門氏菌的培養(yǎng)及生化特性,這一方法包括了前增菌、增菌、分離、生化試驗(yàn)和血清學(xué)鑒定5個(gè)步驟。該方法是目前世界各國普遍接受的標(biāo)準(zhǔn)方法,鑒定結(jié)果準(zhǔn)確可靠。但是由于沙門氏菌有超過2500種血清型,生化特性各異,使其檢驗(yàn)程序十分復(fù)雜繁瑣,由于檢測時(shí)需要反復(fù)進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng),因此至少需要4~7 d才可得到準(zhǔn)確的檢測結(jié)果。同時(shí),挑取疑似菌落,生化試驗(yàn)結(jié)果判定等許多步驟都依賴于操作者的主觀判斷。因此,該方法不夠簡單、客觀,且比較耗時(shí)。針對傳統(tǒng)方法的缺點(diǎn),有研究者對其進(jìn)行了改良,比較常用的有以下兩種。

      1.1 疏水網(wǎng)膜法(hydrophobic grid-membrane fi lter,HGMF) 疏水網(wǎng)膜法對傳統(tǒng)檢測方法中的常規(guī)平皿劃線做了改進(jìn)。樣品用疏水網(wǎng)膜過濾,可以濃縮樣品中的細(xì)菌,除去不必要的生長抑制物等,要檢測的微生物被捕獲在疏水網(wǎng)膜的小格中,在接種后的疏水網(wǎng)膜上傾入沙門氏菌選擇培養(yǎng)基,經(jīng)適當(dāng)時(shí)間培養(yǎng)后即可計(jì)數(shù)。該法原理上與國標(biāo)檢測方法一致,特異性和靈敏度與國標(biāo)方法也一致,操作步驟略為簡化,檢測時(shí)間略為縮短,一般需3 d左右。

      1.2 顯色培養(yǎng)基法 顯色培養(yǎng)基法是在分離培養(yǎng)基中加入沙門氏菌某些特異性酶的底物,該底物通常為無色,經(jīng)特異性酶作用而顯現(xiàn)出一定的顏色,直接觀察菌落顏色即可做出鑒定。朱海明等[3]用兩種沙門氏菌顯色培養(yǎng)基與傳統(tǒng)平板DHL對測試菌株和實(shí)際樣品進(jìn)行檢測,結(jié)果表明三種培養(yǎng)基對生鮮食品的檢驗(yàn)結(jié)果一致,但對熟食樣品的檢測結(jié)果有較大差異,可能是由于熟食樣品中的各種添加劑影響了特異性酶和底物的反應(yīng)。雖然顯色培養(yǎng)基的成本較高,性能還有待改善,但是其使用方便,操作簡單,可大大縮短檢測時(shí)間,可以滿足應(yīng)急檢測的需要。

      2 分子生物學(xué)方法

      在各種沙門氏菌檢測新技術(shù)中,以分子生物學(xué)檢測方法發(fā)展最為迅速。隨著近年來分子生物學(xué)技術(shù)的飛速發(fā)展,各種以分子生物學(xué)為基礎(chǔ)的檢測方法層出不窮,其原理都是直接針對沙門氏菌的核酸分子特征進(jìn)行鑒定,具有較大的優(yōu)越性。

      2.1 PCR 即聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng),是一種體外基因擴(kuò)增技術(shù)。1985年由美國科學(xué)家Mullis發(fā)明,1992年,Rahn首先針對沙門氏菌屬特異性invA基因設(shè)計(jì)出一對引物,對630株沙門氏菌進(jìn)行檢測,檢測出626株陽性,檢出率為99.4%。因?yàn)镻CR技術(shù)具有簡便、快速、敏感性好、特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn),各國學(xué)者均致力于PCR方法檢測沙門氏菌技術(shù)的研究,已經(jīng)針對沙門氏菌多個(gè)屬種特異性靶基因設(shè)計(jì)出多種檢測方法,常規(guī)PCR方法也已經(jīng)衍生出許多新的PCR檢測技術(shù),比較常見的有Multiplex PCR,Nested PCR,RT-PCR,Real-time PCR等。

      2.1.1 Multiplex PCR 即多重PCR,是為了提高檢測效率,降低檢測成本而發(fā)展起來的一種PCR技術(shù)。它在一個(gè)反應(yīng)體系中同時(shí)加入多對引物,可以同時(shí)擴(kuò)增多個(gè)目的基因,可以同時(shí)鑒定多種致病菌、血清型和耐藥基因等。Echeita等[4]根據(jù)沙門氏菌鞭毛素基因fljB設(shè)計(jì)引物,利用多重PCR檢測出沙門氏菌不同的H2相抗原。Camila等[5]采用多重PCR技術(shù)同時(shí)擴(kuò)增沙門氏菌屬特異性基因ompC、腸炎沙門氏菌SdfⅠ基因、傷寒沙門氏菌ViaB基因和鼠傷寒沙門氏菌Spy基因來檢測家禽肉的沙門氏菌污染及常見血清型的流行情況。結(jié)果表明,陽性檢出率高于傳統(tǒng)檢測方法,且同時(shí)可確定腸炎沙門氏菌血清型。多重PCR的關(guān)鍵在于引物的設(shè)計(jì),必須保證幾對引物的退火溫度比較接近,擴(kuò)增產(chǎn)物大小差別在電泳檢測時(shí)足以被區(qū)分開。

      2.1.2 Nested PCR 即巢式PCR,是為了減少非特異擴(kuò)增,提高檢測特異性而發(fā)展起來的一種PCR技術(shù)。Saroj等[6]設(shè)計(jì)了兩對引物,第一對引物擴(kuò)增的目的片段長度為1.2 kb,第二對引物以第一對引物的擴(kuò)增產(chǎn)物為模板,擴(kuò)增的目的片段長度為375 bp。采用巢式PCR方法對人工污染樣品和食品樣品檢測,所有沙門氏菌陽性樣品均檢測出單一的375 bp條帶,且最低檢出率為4 CFU/25g樣品。但是巢式PCR反應(yīng)中途需要打開反應(yīng)管加入第二對引物,容易導(dǎo)致反應(yīng)體系被污染。

      2.1.3 RT-PCR 即反轉(zhuǎn)錄PCR,與針對細(xì)菌DNA的其他PCR方法不同,RT-PCR以細(xì)菌mRNA反轉(zhuǎn)錄來的cDNA為模板進(jìn)行擴(kuò)增,因?yàn)閙RNA只在活細(xì)菌中才能穩(wěn)定存在,所以只有活細(xì)菌才能被檢出。Nancy等[7]針對rpoD基因設(shè)計(jì)引物,通過RT-PCR方法分別對活的、被加熱殺死的和被酒精殺死的沙門氏菌進(jìn)行檢測,活菌均檢測出目的條帶;被加熱殺死的細(xì)菌分別放置在4℃和37℃環(huán)境中保存,1 h后檢測,均無目的條帶;被酒精殺死的細(xì)菌放置在37℃環(huán)境下1 h后檢測無目的條帶,放置4℃直至48 h后才有目的條帶出現(xiàn)。證明RT-PCR方法可以有效的檢測出樣品中有無活菌存在,防止了假陽性結(jié)果的出現(xiàn)。但是因?yàn)閙RNA的極不穩(wěn)定性,RT-PCR檢測技術(shù)對檢測人員的要求較高,使其推廣應(yīng)用受到一定限制。

      2.1.4 Real-time PCR 即實(shí)時(shí)熒光定量PCR,可以在PCR進(jìn)行的同時(shí),通過檢測反應(yīng)體系中的熒光信號強(qiáng)度得到檢測結(jié)果,大大提高了檢測敏感度,省略了后續(xù)分析過程,便于自動化檢測,節(jié)省時(shí)間的同時(shí)也免除了電泳過程中DNA染色劑對人體的危害。Malorny等[8]使用TaqMan探針對腸炎沙門氏菌所特有的毒性質(zhì)粒上的Prot6e基因進(jìn)行擴(kuò)增,79株19種不同噬菌體型的腸炎沙門氏菌有75株檢測陽性,119株非腸炎沙門氏菌均檢測陰性,對禽肉和雞蛋的沖洗液進(jìn)行檢測,結(jié)果與常規(guī)檢測方法100%符合,最低檢出限為3 CFU/50 mL。Seo 等[9]采用Real-time PCR方法擴(kuò)增沙門氏菌D型菌株特有的sefA基因?qū)﹄u蛋樣品的檢測結(jié)果與常規(guī)檢測方法100%一致,最低檢出限為1 CFU/600 g雞蛋清洗液。Real-time PCR檢測技術(shù)的靈敏度大大高于常規(guī)PCR,但是它的檢測特異性同樣完全依賴于引物,并不比常規(guī)PCR更高,且探針價(jià)格昂貴,不利于基層推廣使用。

      2.2 基因芯片(DNA chip) 基因芯片是一種固定有很多已知序列DNA探針的硅片或玻片。將經(jīng)過熒光標(biāo)記的樣品分子與基因芯片上的DNA探針進(jìn)行雜交,通過檢測每個(gè)探針分子的熒光信號強(qiáng)度以得到樣品分子的數(shù)量和序列信息,基因芯片表面的DNA探針從幾十到幾百萬個(gè)不等,可以一次性檢測多種病原菌,并同時(shí)得到病原菌的耐藥性等情況。Cremonesi等[10]基于細(xì)菌的16S rRNA基因設(shè)計(jì)的基因芯片,可以用于檢測牛奶中包括沙門氏菌在內(nèi)的15種致病菌。基因芯片技術(shù)自動化程度高,具有很好的發(fā)展前景,但是目前對于樣品的前處理,大量信號的獲取和分析上,仍有待進(jìn)一步的研究。

      2.3 環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)(loop-mediated isothermal amplif i cation,LAMP) 2000年日本人 Tsugunori Notomi等開發(fā)出來的一種新的核酸擴(kuò)增方法[11]。LAMP法是利用鏈置換 DNA 聚合酶(Bst DNApolymerase),在65℃左右恒溫條件下1 h內(nèi)即可將靶基因擴(kuò)增109~1010倍。LAMP技術(shù)的原理是針對靶基因的6個(gè)區(qū)域按照規(guī)定的順序設(shè)計(jì)4種特異的引物,因此LAMP技術(shù)擴(kuò)增的特異性很高,只要出現(xiàn)擴(kuò)增就可以判定靶基因存在。同時(shí),在 DNA延伸合成過程中,從dNTP中析出的焦磷酸離子與反應(yīng)溶液中的鎂離子結(jié)合,會產(chǎn)生白色的焦磷酸鎂沉淀。因此只要用肉眼觀察白色混濁沉淀,就能鑒定擴(kuò)增與否,而不需要繁瑣的電泳和紫外觀察等過程[12]。并且LAMP只要在擴(kuò)增DNA試劑的基礎(chǔ)上加上逆轉(zhuǎn)錄酶和RNA酶抑制劑,就能一步實(shí)現(xiàn)RNA的擴(kuò)增。

      LAMP技術(shù)具備操作簡單、特異性強(qiáng)、反應(yīng)快速、靈敏度高、可直接擴(kuò)增RNA、無需特殊設(shè)備等優(yōu)點(diǎn),LAMP技術(shù)在微生物檢測方面上得到了廣泛的應(yīng)用。Yukiko等[13]對227株沙門氏菌和62株非沙門氏菌通過LAMP技術(shù)進(jìn)行檢測,檢測結(jié)果和PCR檢測結(jié)果完全符合,而且靈敏度比PCR技術(shù)更高,最低靈敏度可達(dá)2.2 CFU。但是LAMP技術(shù)的高靈敏性同時(shí)也導(dǎo)致了其反應(yīng)產(chǎn)物一旦開蓋,極易造成氣溶膠污染,從而形成難以清除的持續(xù)性假陽性。解決這個(gè)問題的方法主要是不開蓋檢測或者實(shí)驗(yàn)室的嚴(yán)格分區(qū)。此外,LAMP技術(shù)不能做多重?cái)U(kuò)增以及引物設(shè)計(jì)要求較高的缺點(diǎn)也在一定程度上限制了它的發(fā)展和應(yīng)用。

      3 免疫學(xué)方法

      免疫學(xué)檢測方法的原理是抗原抗體的特異性結(jié)合反應(yīng),再輔以各種免疫放大技術(shù),以達(dá)到鑒別細(xì)菌的目的。免疫學(xué)檢測方法一般無需特殊儀器,且反應(yīng)成本較低,易于基層推廣,因此在沙門氏菌的檢測中占有重要地位。

      3.1 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA) Kryinski于1977年首次把ELISA方法應(yīng)用于食品沙門氏菌的檢測。因?yàn)樯抽T氏菌血清型復(fù)雜,最初的ELISA檢測方法假陽性率很高,直至20世紀(jì)80年代單克隆抗體技術(shù)逐漸成熟以后,Robinson和Mattingly等建立了直接ELISA法,通過單克隆抗體大大降低了假陽性率,使ELISA方法得以在基層逐漸推廣開來。但ELISA方法的靈敏度較分子生物學(xué)方法低,且必須經(jīng)過增菌篩選純培養(yǎng)步驟,因此難以在短時(shí)間內(nèi)得到檢測結(jié)果。

      3.2 熒光免疫分析法( fl uoroimmuno assay,F(xiàn)IA)FIA法的基本原理是將熒光素標(biāo)記在靶細(xì)菌特異性抗體上,使其與樣品中的靶細(xì)菌特異性結(jié)合,在熒光顯微鏡下觀察熒光現(xiàn)象的技術(shù)。FIA法特異性好,但其靈敏性較分子生物學(xué)方法有一定差距,且反應(yīng)成本較高。Cloak等[14]等采用一種表面吸附熒光免疫分析法對20份牛肉樣品和80份雞肉樣品進(jìn)行檢測,檢測出31份陽性,與常規(guī)檢測方法完全一致,最低靈敏度為103-5CFU/mL。

      3.3 免疫磁性分離法(immunomagnetic separation,IMS) IMS技術(shù)是將特異性抗體偶聯(lián)在磁性顆粒表面,通過與樣品中靶細(xì)菌的特異性結(jié)合和外加磁場的作用,使靶細(xì)菌得到分離、濃縮。IMS技術(shù)直接檢測細(xì)菌特異性好,但靈敏度低,因此近年來,IMS技術(shù)主要用于與ELISA、PCR等其他檢驗(yàn)方法相結(jié)合,可大幅度提高分離效率和檢測敏感度。

      4 電阻抗法

      電阻抗法的原理是微生物在生長和繁殖過程中可使培養(yǎng)基中電惰性的大分子底物,如碳水化合物、蛋白質(zhì)、脂肪等營養(yǎng)物質(zhì)代謝為電活性的小分子產(chǎn)物,如氨基酸、乳酸鹽、醋酸鹽等,從而導(dǎo)致培養(yǎng)基的導(dǎo)電性增加,電阻抗降低。不同微生物在特定的培養(yǎng)基中的代謝活性均有所差異,同時(shí)如果微生物的起始數(shù)量不同,出現(xiàn)指數(shù)增長期的時(shí)間也不同,因此電阻抗法不僅可以定性鑒定微生物的種屬,還可以定量的檢測微生物初始含量。Yang等[15]使用微電極結(jié)合IMS技術(shù)測量沙門氏菌在BHI培養(yǎng)液中的阻抗變化,可以在8 h或1.5 h內(nèi)檢測出初始濃度為101CFU/mL或106CFU/mL的沙門氏菌。電阻抗法可以實(shí)時(shí)檢測細(xì)菌的生長繁殖狀況,且方便自動化控制,易于大規(guī)模樣品的檢測。但是電阻抗法的影響因素較多,檢測過程中容易出現(xiàn)假陽性,特異性還有待提高。

      5 生物傳感器(Biosensor)

      生物傳感器是由生物分子識別原件和信號轉(zhuǎn)換器組成的分析裝置,工作原理是生物分子識別原件與待測物質(zhì)發(fā)生生物學(xué)反應(yīng),信號轉(zhuǎn)換器將反應(yīng)產(chǎn)生的信號轉(zhuǎn)換成可處理的電信號或光信號等。生物傳感器的特異性由生物分子識別原件決定,敏感性則由生物分子識別原件和信號轉(zhuǎn)換器共同決定。生物傳感器具有分析速度快,自動化程度高,對使用者要求低等特點(diǎn),可以滿足野外現(xiàn)場分析的需求。Pathirana等[16]將沙門氏菌多克隆抗體固定在石英晶體表面的聲波裝置上,沙門氏菌同表面的多克隆抗體結(jié)合后會改變石英晶體的諧振參數(shù),當(dāng)細(xì)菌數(shù)目介于102~107個(gè)時(shí),這個(gè)變化與信號轉(zhuǎn)換器轉(zhuǎn)換成的電壓的變化成線性關(guān)系。此傳感器的最低敏感度為102個(gè)細(xì)菌/mL,反應(yīng)時(shí)間小于100 s,室溫保存32 d仍可保持75%的敏感度?,F(xiàn)在生物傳感器面臨的主要問題是生物分子識別原件的壽命有限,生產(chǎn)成本較高。此外,生物傳感器的特異性、敏感性和有效數(shù)據(jù)處理方法也有待提高。

      6 噬菌體法(phage)

      噬菌體(phage)是一類可以感染細(xì)菌的病毒,分為烈性噬菌體和溫和噬菌體兩種,其中用于細(xì)菌檢測的主要是烈性噬菌體。很多烈性噬菌體具有高度的宿主專一性,只侵染特定屬或種的細(xì)菌,并迅速繁殖,導(dǎo)致宿主細(xì)胞裂解,在雙層平板上形成肉眼可見的噬菌斑,根據(jù)噬菌斑的有無和形態(tài)可以判斷待檢細(xì)菌的種屬。

      Keils等證明O-I噬菌體對沙門氏菌屬內(nèi)裂解率為95.0%~99.6%之間,屬外誤差為0%~2.33%之間。因此應(yīng)用沙門氏菌O-I噬菌體對沙門氏菌的檢測結(jié)果是可靠的。GB4789.31-2003是我國現(xiàn)行的應(yīng)用噬菌體檢測腸桿菌科細(xì)菌的標(biāo)準(zhǔn)方法。

      噬菌體檢測方法具有快速、低成本等優(yōu)點(diǎn),而且還可以區(qū)分死活細(xì)菌。但是當(dāng)樣品中沙門氏菌數(shù)目較少時(shí),可能無法形成噬菌斑,造成假陰性結(jié)果。Rees等提出了噬菌體擴(kuò)增法來解決這一問題。該方法先將噬菌體和待檢樣品混合,待噬菌體侵染入細(xì)菌后,將游離噬菌體用滅病毒劑滅活,然后中和滅病毒劑,將可被同一噬菌體裂解的輔助菌加入樣品中,倒雙層平板培養(yǎng),釋放出的子代噬菌體裂解輔助菌形成可見噬菌斑。

      此外,噬菌體還可以和很多其他檢測方法聯(lián)合使用來提高檢測效率。

      7 聯(lián)合方法

      單一的檢測方法總是有其難以克服的缺點(diǎn),因此近年來對沙門氏菌快速檢測方法的研究更多集中在多種方法的聯(lián)合使用上。

      7.1 IMS-PCR 將樣品用免疫磁性分離法處理后用PCR方法檢測可以減少前增菌步驟消耗的時(shí)間,保持了PCR方法的高特異性,還可以提高其敏感性。Wang等[17]將IMS技術(shù)與PCR技術(shù)相結(jié)合,建立了快速檢測牛肉中沙門氏菌的方法,顯著減少食品成分對PCR反應(yīng)的影響,可以在24 h以內(nèi)完成對食品樣品的檢測,靈敏度達(dá)到 103CFU/g。

      7.2 IMS-ELISA 與IMS-PCR方法一樣,將經(jīng)過IMS方法處理后的樣品進(jìn)行ELISA方法檢測同樣可以縮短檢測時(shí)間,提高檢測敏感性。Taha等[18]

      將雞翅樣品在蛋白胨水中培養(yǎng)4 h,用IMS技術(shù)濃縮分離沙門氏菌,然后用ELISA方法檢測,整個(gè)反應(yīng)可以在8 h內(nèi)完成,特異性高,檢測靈敏度達(dá)1.6×103CFU/mL。

      7.3 噬菌體-電阻抗法 通過電阻抗法檢測樣品中的靶細(xì)菌,對培養(yǎng)基的要求很高,需要僅靶細(xì)菌在該培養(yǎng)基上生長,其他菌都被抑制。而沙門氏菌因菌型復(fù)雜,一種培養(yǎng)基很難達(dá)到這種要求,因此容易造成檢測結(jié)果假陽性。將噬菌體和電阻抗法聯(lián)合使用,就可以解決這個(gè)問題。使用沙門氏菌專一性噬菌體裂解樣品中的沙門氏菌,觀察培養(yǎng)基的電阻抗變化,得出檢測結(jié)果。該方法可以大幅度提高電阻抗法的特異性和敏感性。Amorim等[19]用此方法,采用3種特異性噬菌體檢測12種沙門氏菌,每一種菌和它們的特異性噬菌體共同放在胰蛋白胨大豆肉湯中培養(yǎng),通過觀察電阻抗隨反應(yīng)時(shí)間的變化成功檢測出所有沙門氏菌。

      7.4 噬菌體—生物傳感器 將噬菌體應(yīng)用在生物傳感器上有利于提高生物傳感器的特異性,提高有效信號的比率,使其可以在更復(fù)雜的環(huán)境中完成檢測。Li等[20]將鼠傷寒沙門氏菌E2噬菌體連在無線磁彈性傳感器上,在濕潤的環(huán)境中,將傳感器直接放在經(jīng)過人工接種沙門氏菌的土豆表皮上30 min傳感器成功檢測出接種濃度在5×102CFU/mL以上的土豆表皮上的沙門氏菌。

      7.5 噬菌體—分子生物學(xué) 目前噬菌體被廣泛用作遺傳工程中外源基因克隆和表達(dá)的載體,通過噬菌體將綠色熒光蛋白基因(gfp)等報(bào)告基因插入到靶細(xì)菌DNA中,通過檢測報(bào)告基因的表達(dá),即可得到靶細(xì)菌的檢測信息。Kuhn等[21]把細(xì)菌熒光素酶基因(lux)通過噬菌體Felix01轉(zhuǎn)移到沙門氏菌中,可在16 h內(nèi)檢測出樣品中的沙門氏菌。

      8 結(jié)論

      隨著人們對食品安全問題的關(guān)注,沙門氏菌作為重要的食源性致病微生物也得到人們越來越多的關(guān)注,沙門氏菌的檢測方法也得到了很大發(fā)展。其中以分子生物學(xué)技術(shù)為基礎(chǔ)的檢測方法發(fā)展前景最好,它從基因水平上檢測沙門氏菌,檢測的同時(shí)可以得到沙門氏菌耐藥性,遺傳性等信息,為沙門氏菌的防治和溯源提供信息。以免疫學(xué)為基礎(chǔ)的檢測方法檢測時(shí)間也較傳統(tǒng)方法有所縮短,而且其檢測成本較低,因此也在食品檢測中得到了廣泛的應(yīng)用。這兩類方法經(jīng)過評估和驗(yàn)證后,已經(jīng)被很多國家接受并設(shè)為標(biāo)準(zhǔn)檢測方法[22]。LAMP技術(shù)、基因芯片技術(shù)、聯(lián)合檢測技術(shù)等新興的沙門氏菌檢測技術(shù),還需要在各種不同的食品中進(jìn)行系統(tǒng)、詳細(xì)的驗(yàn)證和評估后,才有可能在將來被廣泛接受,成為新的標(biāo)準(zhǔn)檢測方法。與此同時(shí),傳統(tǒng)方法雖然在檢測效率等方面遠(yuǎn)落后于新興技術(shù),但是因其可以得到細(xì)菌的純培養(yǎng)物,為微生物學(xué)和流行病學(xué)研究提供必需的材料,所以仍不能完全被新興的方法取代。

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