王光函，姜 鴻，鄒桂欣，尤獻(xiàn)民*

(1.遼寧省中醫(yī)藥研究院，遼寧 沈陽(yáng) 110034；2.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，遼寧 大連 116600)

?

HPLC-ELSD法測(cè)定膽南星中膽酸含量

王光函1,2，姜 鴻1，鄒桂欣1，尤獻(xiàn)民1*

(1.遼寧省中醫(yī)藥研究院，遼寧 沈陽(yáng) 110034；2.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，遼寧 大連 116600)

目的：建立HPLC-ELSD法測(cè)定膽南星中膽酸含量的方法。方法：色譜柱為Hypersil BDS C18色譜柱(4.6mm×200mm，5μm)，流動(dòng)相為乙腈-水(36∶64)，柱溫為25℃，流速為1.0mL·min-1。檢測(cè)器為ELSD，漂移管溫度為100℃，載氣流量為3.0L·min-1。結(jié)果：膽酸在0.14～1.4μg進(jìn)樣量范圍內(nèi)與其峰面積積分呈良好的線性關(guān)系(r=0.999 4)，平均加樣回收率為97.13%，RSD=1.80%。結(jié)論：該方法簡(jiǎn)便準(zhǔn)確，靈敏度高，可用于膽南星中膽酸含量的測(cè)定和產(chǎn)品質(zhì)量控制。

膽南星；HPLC-ELSD；膽酸

膽南星為制天南星的細(xì)粉與牛、羊或豬膽汁經(jīng)混合加工而成，或由天南星細(xì)粉與牛、羊或豬膽汁經(jīng)發(fā)酵加工而成。其具有清熱化痰、熄風(fēng)定驚的功效，臨床用于痰熱咳嗽、咳痰黃稠、中風(fēng)痰迷、癲狂驚癇的治療。天南星經(jīng)膽汁炮制后性味發(fā)生改變，功效由燥濕化痰變?yōu)榍鍩峄?，由散結(jié)消腫變?yōu)橄L(fēng)定驚，這種變化主要是由膽汁引起的。膽汁酸中主要含有膽酸、去氧膽酸和鵝去氧膽酸等成分。本文采用HPLC-ELSD法對(duì)膽南星中膽酸含量進(jìn)行測(cè)定，目標(biāo)物與雜質(zhì)峰分離效果好，該方法快速準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

儀器：Agilent1100高效液相色譜儀，蒸發(fā)光散射檢測(cè)器；試劑：乙腈為色譜純，甲醇為分析純，水為娃哈哈純凈水；對(duì)照品：膽酸(批號(hào)：078-9312，中國(guó)食品藥品檢定研究院)；藥材：膽南星(批號(hào)：10032，四川廣漢中藥飲片有限責(zé)任公司)；膽南星(批號(hào)：111002，四川百勝藥業(yè)有限公司)；膽南星(批號(hào)：20121102，四川千方中藥飲片有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Hypersil BDS C18(4.6mm×200mm，5μm)，流動(dòng)相：乙腈-0.2%醋酸(36∶64)，柱溫：25℃，流速：1.0mL·min-1；檢測(cè)器為ELSD，漂移管溫度：100℃，載氣流量：3.0L·min-1。在上述色譜條件下，供試液色譜圖中膽酸與其他組分的色譜峰分離度良好，見(jiàn)圖1。

2.2 供試品溶液制備

取膽南星粉末(過(guò)三號(hào)篩)約2g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，加甲醇25mL，超聲處理30min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状既芙?，轉(zhuǎn)移至5mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

圖1 供試品HPLC色譜

2.3 對(duì)照品溶液制備

精密稱取膽酸對(duì)照品適量，加甲醇制成每1mL含70μg膽酸的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備

精密吸取膽酸對(duì)照品溶液(70μg/mL)2、4、8、12、16、20μL分別注入液相色譜儀中，測(cè)定峰面積。以膽酸進(jìn)樣量的對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，以峰面積的對(duì)數(shù)為縱坐標(biāo)，得線性回歸方程為：Y=1.468 6X+3.113 1，r=0.999 4，膽酸在0.14～1.4μg進(jìn)樣量范圍內(nèi)與其峰面積積分呈良好的線性關(guān)系。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取同一供試品溶液(百勝)，分別放置0、2、4、6、8、12h后進(jìn)樣測(cè)定峰面積，得峰面積積分RSD為1.24%，表明供試液在12h內(nèi)化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定。

2.6 精密度試驗(yàn)

取同一供試品溶液(百勝)，連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，計(jì)算得峰面積積分RSD為1.52%，表明該方法精密度良好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一份樣品(百勝)，平行取樣6次，按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定峰面積，計(jì)算供試液中膽酸含量，RSD為1.60%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.8 回收率試驗(yàn)

取已知含量的樣品(百勝)1g，精密稱定，平行取樣9份，分別加入膽酸對(duì)照品溶液適量，按“2.2”項(xiàng)下制備供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定峰面積，計(jì)算供試液中膽酸加樣回收率，得平均回收率為97.13%，RSD為1.8%，結(jié)果見(jiàn)表1。

2.9 樣品測(cè)定

分別精密吸取對(duì)照品溶液5、10μL與供試品溶液10μL，注入液相色譜儀中測(cè)定峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算供試液中膽酸含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

表1 加樣回收率測(cè)定結(jié)果

表2 不同來(lái)源膽南星中膽酸含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

在炮制過(guò)程中，膽汁不僅是加工膽南星的主要輔料，其還從根本上改變了主藥的理化性質(zhì)及性味。目前，2010版中國(guó)藥典尚未對(duì)膽南星質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行規(guī)范，但許多學(xué)者在膽南星質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)方面進(jìn)行了研究。赫炎等[1]采用 HPLC-ELSD 法測(cè)定膽南星中豬去氧膽酸含量；高向軍等[2]以膽酸為指標(biāo)，采用薄層掃描法對(duì)膽南星及其制劑中的膽酸含量進(jìn)行了測(cè)定；張厚寶等[3]以總膽酸、膽紅素含量為檢測(cè)指標(biāo)，對(duì)江蘇省8個(gè)市縣的膽南星進(jìn)行了測(cè)定；張紹軒等[4]以鵝去氧膽酸為對(duì)照，建立了膽南星的薄層色譜鑒別方法。

本文采用高效液相色譜法，選擇蒸發(fā)光散射檢測(cè)器，以膽酸為對(duì)照品，對(duì)市售三種膽南星藥材中的膽酸含量進(jìn)行了測(cè)定，可能由于加工過(guò)程中膽汁來(lái)源及加入量的不同，導(dǎo)致膽酸含量有所差異。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中考察了甲醇-水、乙腈-水、乙腈-0.2%醋酸3種色譜系統(tǒng)，并對(duì)流動(dòng)相比例進(jìn)行了考察，最終乙腈-0.2%醋酸(36∶64)分離效果最為理想。

采用HPLC-ELSD法測(cè)定膽南星中膽酸含量簡(jiǎn)便準(zhǔn)確，靈敏度高，穩(wěn)定性好，可用于膽南星中膽酸含量測(cè)定，用于其質(zhì)量控制。

[1] 赫炎,張永欣,趙惠東,等.HPLC測(cè)定膽南星中豬去氧膽酸的含量[J].中國(guó)中藥雜志,2007,32(16):1634-1636.

[2] 高向軍,劉涵芳,張伯崇.膽南星及其復(fù)方制劑中膽酸的檢查[J].中藥通報(bào),1987,12(6):31-32.

[3] 張厚寶,康純.膽南星中膽汁成分的檢測(cè)[J].中藥材,1991,14(3):37-38.

[4] 張紹軒,黃青,王學(xué)農(nóng),等.膽南星的薄層色譜鑒別[J].長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2008,24(2):147-148.

(責(zé)任編輯：尹晨茹)

Determination of Cholic acids in Bile Arisaema by HPLC-ELSD

Wang Guanghan1,2,Jiang Hong1,Zou Guixin1,You Xianmin1*

(1.Liaoning Provincial Institute of Traditional Chinese Medicine,Shenyang 110034,China;2.Liaoning University of Traditional Chinese Medicine,Dalian 116600,China)

Objective:To develop a HPLC method for the determination of cholic acids in Bile Arisaema.Methods:Hypersil BDS C18column (4.6mm×200mm，5μm)in an oven at 25℃ was need，with a mobile phase consisting of acetonitrile-water(36∶64)，the flow rate was 1.0mL·min-1.The drift-tube temperature of ELSD was 100℃,and the flow rate of air was 3.0L·min-1.Results:The linear ranges of cholic acids was 0.14～1.4μg(r=0.999 4),the average recovery was 97.13%,RSD=1.80%.Conclusion:The method was simple and accuate,and can be used for the quality control of Bile Arisaema.

Bile Arisaema; HPLC-ELSD; Cholic Acids

2014-07-11

國(guó)家科技部重大新藥創(chuàng)制項(xiàng)目(2012ZX09102201-005)

王光函(1980-)，女，遼寧省中醫(yī)藥大學(xué)在職博士研究生，遼寧省中醫(yī)藥研究院副研究員，研究方向?yàn)橹兴幮滤庂|(zhì)量控制。

尤獻(xiàn)民(1964-)，男，遼寧中醫(yī)藥研究院研究員，研究方向?yàn)樾滤庨_(kāi)發(fā)。

R284.1

A

1673-2197(2014)22-0008-02