孫 鵬，閆小彬，周 華，李德昌，笪冀平，時(shí)惠平

周圍型肺腺癌CT征象與CD147、VEGF表達(dá)的關(guān)系

孫 鵬1，閆小彬1，周 華1，李德昌2，笪冀平3，時(shí)惠平1

目的 分析周圍型肺腺癌在CT上的一些典型征象，并探討這些征象與CD147、VEGF表達(dá)的關(guān)系。方法 收集2006-01至2012-12周圍型肺腺癌73例可作免疫組化的蠟塊及術(shù)前CT檢查資料。采用免疫組化SP法分別測(cè)定肺腺癌組織中CD147及VEGF的表達(dá)結(jié)果，對(duì)陽性結(jié)果根據(jù)染色面積及染色強(qiáng)度進(jìn)行等級(jí)劃分。將CD147、VEGF的表達(dá)結(jié)果與術(shù)前CT檢查的各特異性征象進(jìn)行對(duì)比，觀察兩種基因表達(dá)結(jié)果與CT征象之間是否相關(guān)。結(jié)果 CD147表達(dá)與CT征象中的空泡征、腫塊大小、棘突征、深分葉征、縱隔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間有相關(guān)性(P<0.05)，與毛刺征、胸膜凹陷征無相關(guān)性(P>0.05)；VEGF表達(dá)與毛刺征、棘突征、深分葉征、縱隔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間有相關(guān)性(P<0.05)，與腫塊大小、空泡征、胸膜凹陷征無相關(guān)性(P>0.05)。結(jié)論 肺腺癌的某些CT特異性征象與CD147、VEGF表達(dá)有相關(guān)性，可為判斷肺腺癌的預(yù)后提供依據(jù)。

肺腺癌；CT；免疫組織化學(xué)；血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子；細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子

腺癌占原發(fā)性肺癌的20%左右，在CT上有許多特異性征象，而這些征象是以病理及分子生物學(xué)機(jī)制為基礎(chǔ)的。已有一些研究表明，某些基因的表達(dá)水平對(duì)腫瘤的影像學(xué)表現(xiàn)具有重要作用，其表達(dá)與CT表現(xiàn)密切相關(guān)[1]。測(cè)定肺腺癌細(xì)胞中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)和細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子(extracellular matrix metalloproteinase inducer，CD147)，對(duì)評(píng)估肺癌的惡性程度及判斷預(yù)后都有重要意義[2，3]。目前，未見有同時(shí)檢測(cè)CD147和VEGF兩種蛋白表達(dá)與肺腺癌CT征象相關(guān)性的報(bào)道，本研究在這方面進(jìn)行嘗試，以期為判斷肺腺癌預(yù)后提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集空軍總醫(yī)院和中日友好醫(yī)院2006-01至2012-12期間、經(jīng)肺癌根治手術(shù)后病理證實(shí)為周圍型腺癌的病例共73例，其中男46例，女27例，年齡42～78歲，平均56.3歲，中位年齡54歲。所有病例術(shù)前均未進(jìn)行過任何抗腫瘤治療。

1.2 方法

1.2.1 影像資料收集 胸部CT檢查均采用日本東芝16排螺旋CT，所有患者均在屏氣下從肺尖掃描到肺底，發(fā)現(xiàn)病灶后對(duì)病灶所在部位進(jìn)行高分辨薄層掃描。結(jié)果均經(jīng)過兩名長(zhǎng)期從事影像學(xué)診斷的醫(yī)師分別讀片得出，CT特異性征象收集毛刺征、空泡征、棘突征、腫塊大小、深分葉征、胸膜凹陷征。

1.2.2 病理資料收集 收集73例術(shù)后組織切片，由兩位病理醫(yī)師在顯微鏡下復(fù)查，并根據(jù)2004年WHO分類標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分類，選擇蠟塊進(jìn)行免疫組織化學(xué)的染色，方法采用免疫組化SP法。腫瘤轉(zhuǎn)移的標(biāo)準(zhǔn)為初診或術(shù)后3個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)縱隔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者。兔抗人CD147多克隆抗體、鼠抗人VEGF單克隆抗體、SP免疫組化試劑盒、DAB顯色試劑盒均購自北京中杉金橋生物科技公司。

1.2.3 病理結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) CD147的陽性表達(dá)部位為胞膜及胞漿，VEGF的陽性表達(dá)部位為胞漿。每張切片在400倍顯微鏡下隨機(jī)計(jì)數(shù)5個(gè)高倍視野，計(jì)數(shù)腫瘤細(xì)胞總數(shù)和陽性細(xì)胞個(gè)數(shù)，每視野數(shù)200個(gè)細(xì)胞，共計(jì)1000個(gè)細(xì)胞，算出CD147、VEGF陽性表達(dá)細(xì)胞百分?jǐn)?shù)，分為4級(jí)：<10%為0分；10%～40%為1分；40%～70%為2分；>70%為3分。染色強(qiáng)度分為4級(jí)：無色為0分；淡黃色為1分；棕黃色為2分；棕褐色為3分。將兩者相加之和作為判定陽性表達(dá)結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)：陰性(-)為分值≤2；3分為弱陽性(+)；4分為中等陽性(++)；≥5為強(qiáng)陽性(+++)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS19.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，肺腺癌CD147、VEGF表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤細(xì)胞分化程度、CT上測(cè)得腫塊大小、CT表現(xiàn)(毛刺征、空泡征、棘突征、深分葉征、胸膜凹陷征)的相關(guān)性分別采用2組的非參數(shù)Wilcoxn秩和檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

CD147、VEGF的表達(dá)與各臨床指標(biāo)的關(guān)系，以及總的陽性率見表1。(1)CD147、VEGF的蛋白表達(dá)情況在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移時(shí)兩者的陽性表達(dá)顯著增高。(2)CD147的蛋白表達(dá)情況與腫瘤細(xì)胞分化程度相關(guān)，腫瘤細(xì)胞分化程度低時(shí)CD147表達(dá)顯著增高。VEGF的蛋白表達(dá)與腫瘤細(xì)胞分化程度高低無明顯相關(guān)。(3)CD147在肺腺癌的表達(dá)與腫塊大小之間相關(guān)，腫塊直徑超過3 cm時(shí)，CD147表達(dá)明顯增強(qiáng)；而腫塊大小與VEGF表達(dá)之間無明顯相關(guān)。(4)毛刺征與CD147表達(dá)之間無明顯相關(guān)，而與VEGF表達(dá)相關(guān)。(5)空泡征與CD147表達(dá)相關(guān)，CT檢查表現(xiàn)為腫塊內(nèi)空泡征消失的肺腺癌組織，CD147表達(dá)強(qiáng)度呈明顯增高趨勢(shì)；空泡征與VEGF表達(dá)之間無明顯相關(guān)。(6)棘突征與CD147、VEGF的表達(dá)均相關(guān)，有棘突征出現(xiàn)的肺腺癌組織，其CD147、VEGF陽性表達(dá)明顯增高。(7)深分葉征與CD147、VEGF表達(dá)均相關(guān)，有深分葉征出現(xiàn)的肺腺癌組織，其CD147、VEGF陽性表達(dá)明顯增高。(8)胸膜凹陷征與CD147、VEGF表達(dá)均不相關(guān)。

表1 周圍型肺腺癌CD147、VEGF表達(dá)與各臨床指標(biāo)的關(guān)系

3 討 論

胸部螺旋CT掃描是顯示肺癌病灶形態(tài)和密度特點(diǎn)最有效的影像學(xué)方法[4，5]，且有很多特異性的征象，而這些影像學(xué)征象的形成必然是以病理和分子生物學(xué)機(jī)制為基礎(chǔ)的，因此能夠間接反映肺癌的分子生物學(xué)變化。肺癌容易侵襲轉(zhuǎn)移的特點(diǎn)嚴(yán)重阻礙著治療的效果，將肺癌侵襲、轉(zhuǎn)移相關(guān)基因與影像學(xué)表現(xiàn)相對(duì)照的研究有利于更加深入地了解肺癌發(fā)展過程，判斷預(yù)后，進(jìn)而對(duì)臨床治療提供支持，是目前研究的熱點(diǎn)。

3.1 CD147、VEGF與肺癌侵襲、轉(zhuǎn)移的關(guān)系 腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移是多基因、多因子調(diào)控的復(fù)雜過程，而腫瘤細(xì)胞對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)及基底膜的降解是腫瘤浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵步驟[6，7]?；|(zhì)金屬蛋白酶 (matrix metalloproteinases,MMPs)是這一過程中最重要的酶，CD147的主要功能是參與細(xì)胞與細(xì)胞之間的識(shí)別，并能顯著地誘導(dǎo)MMPs的產(chǎn)生，降解細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜并水解癌細(xì)胞表面的黏附分子，促進(jìn)癌細(xì)胞的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移[8-11]。本研究表明，CD147在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的陽性表達(dá)明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；在腫瘤低分化組與中-高分化組之間，CD147的表達(dá)強(qiáng)度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。因此，筆者認(rèn)為CD147的表達(dá)情況可作為評(píng)判肺腺癌惡性程度及預(yù)后的參考指標(biāo)。

VEGF又名血管通透因子(vascular permeability factor，VPF)，能促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的遷移和毛細(xì)血管的通透，特異地作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞，引起細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)血管形成，是血管生成過程最重要的正向調(diào)控因子，與多種腫瘤的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移和預(yù)后密切相關(guān)[12]。本研究表明，VEGF在周圍型肺腺癌的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，而與肺腺癌細(xì)胞分化程度高低無相關(guān)性。提示當(dāng)VEGF表達(dá)增高，腺癌組織更容易發(fā)生轉(zhuǎn)移，因此能夠反映肺腺癌的侵襲能力。

3.2 周圍型肺腺癌CD147、VEGF表達(dá)與CT征象的關(guān)系

3.2.1 腫塊大小 本研究表明，CD147的表達(dá)與腫塊大小有相關(guān)性，在腫塊>3 cm時(shí)其表達(dá)強(qiáng)度明顯增高，這與一些學(xué)者認(rèn)為3 cm是肺腺癌生物學(xué)特性發(fā)生重大變化時(shí)期的理論一致[13]。而VEGF的表達(dá)與腫塊大小之間無相關(guān)性，提示當(dāng)腫塊生長(zhǎng)到直徑3 cm時(shí)，并不一定是腫瘤血管生成激增的時(shí)期，其他可能原因還有待探討。

3.2.2 毛刺征 Siegelman[14]首先提出了腫塊邊緣分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：Ⅰ級(jí)，邊緣光滑銳利；Ⅱ級(jí)，邊緣中等度光滑；Ⅲ級(jí)，邊緣輕度不規(guī)則波浪狀或少量毛刺；Ⅳ級(jí)，邊緣明顯不規(guī)則且有毛刺。毛刺征為CT圖像肺窗上觀察到的自瘤灶邊緣向周圍肺實(shí)質(zhì)伸展、不與胸膜相連的放射狀無分支的細(xì)短線條影，病理基礎(chǔ)是由于癌瘤直接浸潤(rùn)、阻塞性肺炎、癌性淋巴管炎、支氣管擴(kuò)張和支氣管周圍炎、多次繼發(fā)感染后產(chǎn)生纖維組織增生、淋巴管擴(kuò)張、血管內(nèi)癌性浸潤(rùn)、腫塊周圍肺小葉不張等因素造成。本研究顯示，在周圍型肺腺癌VEGF表達(dá)與毛刺征有相關(guān)性，分析原因可能是因?yàn)殡S著VEGF增高，促使腫塊周邊組織血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖，血管纖維蛋白基質(zhì)支架形成，血管通透性增加，細(xì)胞增殖加速，進(jìn)而產(chǎn)生一系列間質(zhì)改變所致。本組研究同時(shí)顯示，毛刺征與CD147表達(dá)無明顯相關(guān)性，這可能是因?yàn)槊陶髦饕€是癌腫周圍的間質(zhì)性反應(yīng)在影像學(xué)上的表現(xiàn)，并不僅是腫塊直接向外浸潤(rùn)的表現(xiàn)。提示毛刺征的出現(xiàn)表明腫塊有較高增殖趨勢(shì)，惡性程度高，有潛在的高侵襲力。

3.2.3 空泡征 指腫塊內(nèi)部的1～3 mm小透亮區(qū)，為未被腫瘤組織占據(jù)的含氣肺組織和腫瘤內(nèi)小灶性壞死排出后形成[15]。本研究顯示，CD147的表達(dá)在空泡征消失組較有空泡征組明顯增高。提示空泡征的形成可能與腫瘤的生長(zhǎng)方式和增殖速度有關(guān)，空泡征的消失預(yù)示腫塊生長(zhǎng)加速，惡性程度增高，具有侵襲力增強(qiáng)趨勢(shì)。VEGF的表達(dá)與空泡征無明顯相關(guān)。

3.2.4 棘突征 指腫瘤邊緣呈棘狀突起，在CT片上肺內(nèi)球形病灶之邊緣有1個(gè)或2個(gè)或多個(gè)棘突狀尖角樣突起，使病灶輪廓不規(guī)則，如多個(gè)棘突相連時(shí)則可形成鋸齒狀邊緣，該征象的病理基礎(chǔ)主要為惡性腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)性生長(zhǎng)，部分組織生長(zhǎng)迅速，在鄰近支氣管、肺動(dòng)脈周圍的結(jié)締組織內(nèi)浸潤(rùn)，或沿淋巴管蔓延，使鄰近肺實(shí)質(zhì)的癌巢或腫瘤浸潤(rùn)，使結(jié)締組織水腫、纖維化、增厚等形成棘狀突起。

本研究表明，CD147、VEGF在有棘突征組的表達(dá)強(qiáng)度明顯高于無此征組，提示有棘突征表明癌腫生長(zhǎng)速度較快，向外擴(kuò)展的能力強(qiáng)，惡性程度高，容易發(fā)生侵襲和轉(zhuǎn)移。

3.2.5 深分葉征 指CT影像上顯示腫瘤邊緣呈分葉狀，且切跡較深的表現(xiàn)。其病理基礎(chǔ)是腫瘤收縮或腫瘤各部分生長(zhǎng)速度不一致，腫瘤中心瘢痕形成和相鄰腫瘤組織間的結(jié)締組織增生性收縮形成。本研究表明，深分葉征與CD147、VEGF的表達(dá)相關(guān)，深分葉征的出現(xiàn)常伴有CD147和VEGF的高表達(dá)，此時(shí)腫瘤生長(zhǎng)速度快，向外浸潤(rùn)能力加強(qiáng)，預(yù)示腫瘤惡性程度高，預(yù)后不良。

3.2.6 胸膜凹陷征 由病灶鄰近胸膜凹陷而成[16]。近年來，胸部CT特別是螺旋CT的廣泛應(yīng)用，胸膜凹陷征的顯示更為全面、直觀、細(xì)致，提出了完整的“胸膜凹陷征”的概念，對(duì)于癌腫定性有指導(dǎo)意義。

很多學(xué)者認(rèn)為，胸膜凹陷征的出現(xiàn)提示腫塊侵襲力高[17]。本研究顯示，胸膜凹陷征與VEGF、CD147的表達(dá)均無相關(guān)性。筆者認(rèn)為，可能由于胸膜凹陷征是由腫瘤牽拉和局部胸膜無增厚粘連所致，腫瘤牽拉的原始力量來自于瘤體內(nèi)反應(yīng)性纖維化、瘢痕形成，收縮力通過肺的纖維支架結(jié)構(gòu)傳導(dǎo)到游離的臟層胸膜而引起凹陷，它主要是一種間質(zhì)性改變，因而與周圍型肺腺癌的侵襲轉(zhuǎn)移能力無關(guān)。

綜上所述，筆者認(rèn)為，周圍型肺腺癌的某些CT特異性征象與CD147、VEGF表達(dá)有相關(guān)性。毛刺征、棘突征、腫塊直徑超過3 cm、分葉征的出現(xiàn)，以及空泡征的消失，均可能提示腫瘤的惡性程度較高，侵襲性加強(qiáng)。CD147及VEGF表達(dá)與CT征象相對(duì)照的研究有利于更加深入地認(rèn)識(shí)腫瘤的發(fā)展過程、所處的發(fā)展階段，更準(zhǔn)確地判斷肺腺癌的預(yù)后。

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(2014-05-10收稿 2014-09-18修回)

(責(zé)任編輯 尤偉杰)

Relativity between CT signs and expression of CD147 and VEGF in peripheral pulmonary adenocarcinoma

SUN Peng1, YAN Xiaobin1，ZHOU Hua1, LI Dechang2, DA Jiping3, and SHI Huiping1.

1.Department of Radiology, 2.Department of Pathology, Air Force General Hospital of PLA, Beijing 100142,China. 3.Department of Pathology, China-Japan Friendship Hospital, Beijing 100029 , China

Objective To analyze the pathological mechanism of the typical features of lung adenocarcinoma in CT imaging,and to study the relationship between the features and expression levels of CD147 and VEGF. Methods In China-Japan Friendship Hospital and Air Force general Hospital, from 2006 to 2012, 73 cases of lung adenocarcinoma were pathologically confirmed. The wax block for immunohistochemistry and preoperative CT scan data were collected. Using immunohistochemical SP to detect the expression results of CD147 and VEGF in lung adenocarcinoma, positive results were graded according to size and staining intensity of staining. CT signs included spiculation, vacuole sign, spinal, tumor size, deep lobulation, pleural retraction and mediastinal lymph node metastasis. To compare and determine the relationship between the expressions of CD147and VEGF and the features of lung adenocarcinoma CT imaging, and to observe whether there existed correlation between the expression of two genes results and CT signs. Results There was a correlation between the expression of CD147 and CT signs of the syndrome in vacuoles,tumor size,spiculation sign,deep lobulation,mediastinal lymph node metastasis(P<0.05),no correlation with spiculation and pleural indentation(P>0.05).There was correlation between the expression of VEGF and spiculation,spinal,deep lobulation, mediastinal lymph node metastasis (P<0.05),no correlation with tumor size,vacuole sign,pleural indentation sign (P>0.05). Conclusions There is a correlation between some specific CT signs of adenocarcinoma of lung and the expression rate of CD147 and VEGF. The research on the relationship of CD147/VEGF expression and CT signs is helpful to further explore the development process of the tumor, more accurately judge the prognosis of lung adenocarcinoma.

adenocarcinoma； computed tomography；immunohistochemistry；CD147；vascular endothelial growth factor

孫 鵬，碩士，主治醫(yī)師，E-mail:airforcesp@163.com

100142北京，空軍總醫(yī)院:1.放射科，2.病理科；3.100029北京，中日友好醫(yī)院病理科

R734.2