周俊華 劉桂武 何若鋼 覃小榮 劉榮福 羅濤

（1.廣西畜牧研究所，廣西南寧 530001；2.廣西大學(xué) ，廣西南寧 530003；3.廣東溫氏食品集團(tuán)股份有限公司桂粵養(yǎng)豬公司，廣西賀州 542800；4.深圳市綠微康生物工程有限公司，廣東深圳 518129）

脂肪酶（Lipase,EC3.1.1.3），即三酰甘油酰基水解酶，是一類參與脂肪分解、合成的酶，部分微生物分泌的脂肪酶可催化酯合成反應(yīng)、轉(zhuǎn)酯反應(yīng)、醇解反應(yīng)、氨解反應(yīng)等（Carvalho等,2008;Joseph等,2008）。微生物脂肪酶已廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥、紡織等領(lǐng)域，而飼料用脂肪酶的研究應(yīng)用還處于起步階段。

能量是畜禽營養(yǎng)中最重要的因素之一；脂類可提供相當(dāng)于碳水化合物2.25倍的能量，是最有效的能源。脂肪粉由棕櫚油、椰子油等各種油脂與乳化劑等加工而成的新型能量添加劑；與普通的作為飼料能源的油脂相比穩(wěn)定性好，應(yīng)用工藝簡單，計(jì)量、儲存、運(yùn)輸方便。

新生仔豬胰脂酶活性及小腸上段脂肪酸結(jié)合蛋白酶活性較低，哺乳期間兩者活性雖逐漸升高，然而斷奶時(shí)，胰脂肪酶活性、脂肪酸結(jié)合蛋白酶活性又顯著降低（Gu等,2003）。斷奶應(yīng)激對仔豬消化系統(tǒng)發(fā)育、內(nèi)源消化酶的分泌產(chǎn)生不良影響（劉忠臣等,2011;Enberg等,2000）。斷奶仔豬消化系統(tǒng)發(fā)育不全、內(nèi)源消化酶的分泌不能滿足機(jī)體需要，再加上斷奶應(yīng)激，仔豬對營養(yǎng)物質(zhì)消化利用率降低，尤其是能量攝入不足，引起營養(yǎng)學(xué)家廣泛關(guān)注。

本試驗(yàn)旨在研究脂肪酶、脂肪粉對斷奶仔豬生長性能、免疫、酶活及激素水平的影響，為合理配制仔豬飼糧、節(jié)約能量飼料、提高養(yǎng)豬效益提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)所用脂肪粉為棕櫚油脂肪粉，其粗脂肪＞95%，消化能為25.45 MJ/kg；脂肪酶由深圳市綠微康生物工程有限公司提供，酶活力為20 000 U/g。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物和分組設(shè)計(jì)

選用360頭遺傳背景和胎次相近的25日齡杜×長×大三元雜交斷奶仔豬，采用2（脂肪粉）×3(脂肪酶)雙因子設(shè)計(jì)隨機(jī)分為6個(gè)處理組：處理1組（0%脂肪粉+0%脂肪酶）、處理2組（0%脂肪粉+0.02%脂肪酶）、處理3組（0%脂肪粉+0.03%脂肪酶）、處理4組（1%脂肪粉+0%脂肪酶）、處理5組（1%脂肪粉+0.02%脂肪酶）、處理6組（1%脂肪粉+0.03%脂肪酶），每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)20頭仔豬。

1.3 試驗(yàn)飼糧與飼養(yǎng)管理

試豬每天早上8：00、下午4：00飼喂，自由采食，自由飲水，日常管理及防疫按豬場常規(guī)操作程序進(jìn)行。預(yù)飼期5 d，試驗(yàn)期30 d?；A(chǔ)日糧為玉米-豆粕型日糧，日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平

1.4 測定指標(biāo)與方法

1.4.1 生長性能

于正式期開始當(dāng)天晨飼前空腹稱重作為試豬始重，試驗(yàn)期間記錄日采食量，正式期第30 d空腹稱重。依體重變化和飼料消耗情況計(jì)算平均日增重（Average Daily Gain,ADG）、平均日采食量（average daily feed intake,ADFI）、料重比（feed/gain,F/G），同時(shí)統(tǒng)計(jì)計(jì)算仔豬腹瀉率（diarrhea rate,DR）。

1.4.2 營養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率

于試驗(yàn)正式期第29、30 d，以重復(fù)組為單位早上9：00、下午5：00收集糞樣。充分?jǐn)嚢韬笠曰旌霞S樣鮮重10%取樣，加入10%硫酸進(jìn)行固氮，-20℃凍存。測定前解凍糞樣，65℃烘干，置室溫回潮24 h，粉碎，分裝于樣品袋備用。采用鹽酸不溶灰分法，測定干物質(zhì)（Dry Matter,DM）、粗脂肪（Ether Extract,EE）、粗蛋白（Crude Protein,CP）及總能（Gross Energy,GE）的表觀消化率。

1.4.3 血清激素水平、酶活及免疫指標(biāo)

試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選取2頭仔豬，前腔靜脈采血5 ml，靜置 1 h，3 000 r/min離心8 min，移取血清，-20℃保存。采用CX4型全自動(dòng)生化分析儀測定血清酶活及免疫指標(biāo)谷丙轉(zhuǎn)氨酶（Alanine Aminitransperase,ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（Aspartate Aminotransferase,AST）、免疫球蛋白M（Immunoglobulin M,IgM）、免疫球蛋白A（Immunoglobulin A,IgA），血清激素指標(biāo)胰島素（Insulin,INS）、甲狀腺素（Tetraiodothyronine,T4）、三碘甲腺原氨酸（Triiodothyronine,T3）、生長激素（Growth Hormone,GH）。

1.5 數(shù)據(jù)處理及分析

采用SPSS 15.0對數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析，并進(jìn)行LSD和Duncan's多重比較，試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果

2.1 不同脂肪粉、脂肪酶水平對斷奶仔豬生長性能的影響（見表2）

由表2可知，處理6組試驗(yàn)?zāi)┢诰仫@著高于處理1、4組（P＜0.05），處理2、3、5組顯著高于處理1組（P＜0.05）。ADG，處理5、6組顯著高于處理1組（P＜0.05）。F/G，處理1、4組顯著高于處理3、6組（P＜0.05），處理2、5組顯著高于處理6組（P＜0.05）。DR及ADFI，各試驗(yàn)組間差異不顯著（P＞0.05）。

2.2 不同脂肪粉、脂肪酶水平對斷奶仔豬營養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率的影響（見表3）

表2 脂肪粉、脂肪酶對斷奶仔豬生長性能的影響

表3 脂肪粉、脂肪酶對斷奶仔豬營養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率的影響

由表3可知，處理2、3、5、6組EE消化率均極顯著高于處理1、4組（P＜0.01）；GE消化率，處理2、3組顯著高于處理1、4組（P＜0.05）；CP及DM消化率，各組間差異不顯著（P＞0.05）。

2.3 不同脂肪粉、脂肪酶水平對斷奶仔豬血清酶活及免疫指標(biāo)的影響（見表4）

表4 脂肪酶、脂肪粉對斷奶仔豬血清酶活及免疫指標(biāo)的影響

從表4可知，AST，處理5組極顯著高于處理2組（P＜0.01），顯著高于處理3、4、6組（P＜0.05）；處理1組顯著高于處理2、6組（P＜0.05）。IgM，處理4、5組顯著高于處理3組（P＜0.05）；其余各組間差異不顯著（P＞0.05）。

2.4 不同脂肪粉、脂肪酶水平對斷奶仔豬血清激素水平的影響

表5 脂肪粉、脂肪酶對斷奶仔豬血清激素含量的影響

由表5可知，INS，處理5組極顯著高于處理6組（P＜0.01）。T3，處理4、6組顯著高于處理1、3組（P＜0.05）。GH，處理4、6組顯著高于處理2組（P＜0.05）。T4，各處理組間差異不顯著（P＞0.05）。

3 討論

3.1 不同脂肪粉、脂肪酶水平對斷奶仔豬生長性能的影響

本試驗(yàn)結(jié)果表明，日糧添加脂肪粉，ADFI、ADG有所提高，但同時(shí)導(dǎo)致腹瀉率升高。仔豬斷奶后小腸絨毛高度急劇下降，隱窩加深，消化酶活性下降（楊全明等,1999），導(dǎo)致大量未完全消化的物質(zhì)在腸道后段堆積，還有可能造成異常發(fā)酵，引起急劇腹瀉（蘇繼影,2006）。由此可知日糧添加脂肪粉不利于斷奶仔豬胃腸道的健康，能稍微提高仔豬的生產(chǎn)性能，但效果不顯著。處理4組F/G與處理1組差異不顯著（P＞0.05)，卻顯著高于處理3組（P＜0.05）；處理6組末期均重及平均日增重（ADG）均顯著高于處理1組（P＜0.05），處理6組料重比（F/G）顯著低于處理1組（P＜0.05）。說明1%脂肪粉組未能明顯提高斷奶仔豬的生長性能，效果不如0.03%脂肪酶組（P＜0.05）；斷奶仔豬的生長性能隨著脂肪酶添加量的增加而提高；揭示斷奶仔豬日糧中添加脂肪酶的必要性。

3.2 不同脂肪粉、脂肪酶水平對斷奶仔豬營養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率的影響

本試驗(yàn)結(jié)果表明，處理4組EE消化率較處理1組下降4.08%，說明額外添加脂肪會(huì)增加仔豬體內(nèi)脂肪酶負(fù)擔(dān)，降低日糧脂肪消化率；處理5、6組EE消化率均極顯著高于處理1、4組（P＜0.01），表明外源脂肪酶的添加使體內(nèi)脂肪酶得以補(bǔ)充，促使日糧中脂肪得以充分消化分解。

3.3 不同脂肪粉、脂肪酶水平對斷奶仔豬血清酶活及免疫指標(biāo)的影響

轉(zhuǎn)氨酶是存在于動(dòng)物機(jī)體的重要酶類，可有效反映機(jī)體的氨基酸代謝強(qiáng)度。AST、ALT是動(dòng)物存在于各細(xì)胞、組織中進(jìn)行物質(zhì)代謝的酶類，其活性與組織器官的健康程度有關(guān)，組織器官受損時(shí)，血液中的ALT、AST活性將明顯升高。本試驗(yàn)結(jié)果表明，各處理組間ALT水平差異不顯著（P＞0.05），但隨脂肪酶用量的遞增而降低；處理5組AST水平極顯著高于處理2組（P＜0.01），顯著高于處理3、6組（P＜0.05）；表明日糧添加脂肪酶降低血清轉(zhuǎn)氨酶活性，減弱氨基酸分解代謝，可能是脂肪酶進(jìn)入豬體消化道后主動(dòng)分解日糧脂肪，脂肪酸成分及比例接近母乳，從而減少仔豬斷奶后營養(yǎng)應(yīng)激。董森（2008）指出，仔豬斷奶受心理、環(huán)境及母乳到固體飼料轉(zhuǎn)變的影響，致使原本容易受損的腸道再次發(fā)生應(yīng)激，仔豬為了緩解這幾種應(yīng)激，在營養(yǎng)供應(yīng)不足的情況下，能量分解過多，造成細(xì)胞膜損傷和膜成分發(fā)生改變，導(dǎo)致腸道粘膜功能發(fā)生障礙，從而引起血清酶活升高。

IgA和IgM等免疫球蛋白普遍存在于動(dòng)物的血液、分泌液及組織液中，可促進(jìn)仔豬免疫器官的發(fā)育與成熟，在抗體介導(dǎo)的防衛(wèi)過程中起著極其重要的作用。占秀安（2011）研究報(bào)道，在雙低菜粕日糧中添加復(fù)合酶制劑，可使肥育豬IgA、IgM顯著提高37.74%、27.43%。王海燕（2008）研究發(fā)現(xiàn)，0.3%β-葡萄糖苷酶可提高育肥豬血清IgA、IgM水平。本試驗(yàn)中，各處理組血清IgA水平差異不顯著（P＞0.05）；處理4、5組IgM較處理3組高0.20（g/l），其余各組間差異不顯著（P＞0.05）；說明脂肪粉、脂肪酶在提高機(jī)體體液免疫力方面效果不明顯。

3.4 不同脂肪粉、脂肪酶水平對斷奶仔豬血清激素指標(biāo)的影響

Ooi等（2004）報(bào)道，T3和T4可促進(jìn)機(jī)體脂肪、蛋白質(zhì)和糖原的分解，以滿足能量的供給。各處理組間T4差異不顯著（P＞0.05），水平漸增；處理4、6組T3水平顯著高于處理1、3組（P＜0.05）；由此可知，添加脂肪酶、脂肪粉可一定程度上提高仔豬血清T3、T4水平。潘興華等（1996）研究發(fā)現(xiàn)，動(dòng)物處于應(yīng)激時(shí)，機(jī)體合成、分泌甲狀腺激素會(huì)有所減少；由本研究結(jié)果可知仔豬日糧脂肪酶、脂肪粉可緩解仔豬斷奶應(yīng)激，提高生產(chǎn)性能。

GH主要是通過調(diào)節(jié)營養(yǎng)物質(zhì)在機(jī)體的分布，抑制脂肪生成和促進(jìn)蛋白質(zhì)的合成來發(fā)揮作用的，總體表現(xiàn)為豬體瘦肉率及體增重的提高。本研究結(jié)果顯示，處理4組GH水平較處理1組有所提高，可知添加脂肪粉可一定程度上提高仔豬血清GH水平；GH，處理4、6組顯著高于處理2組（P＜0.05）；處理4、5、6組間GH水平差異不顯著（P＞0.05），但均高于1、2、3組；說明脂肪酶、脂肪粉一定程度上可提高仔豬GH水平，進(jìn)而促進(jìn)仔豬生長。

INS是一種由胰腺β細(xì)胞分泌的蛋白質(zhì)激素，可通過降低血糖，促進(jìn)蛋白質(zhì)合成來發(fā)揮其對機(jī)體合成代謝的作用。處理6組INS極顯著低于處理5組（P＜0.01），顯著低于處理1、2、4組（P＜0.05），本試驗(yàn)結(jié)果與夏枚生（2000)、許梓榮等（2002b)、Gao等（2007）報(bào)道的外源酶制劑的添加能在一定程度上提高仔豬血清INS含量的結(jié)果一致。

4 結(jié)論

綜合本試驗(yàn)指標(biāo)測定，日糧中添加1%脂肪粉+0.03%脂肪酶可在一定程度上提高斷奶仔豬的健康及生長性能，可在斷奶仔豬日糧中進(jìn)一步推廣使用。

（參考文獻(xiàn)15篇，刊略，需者可函索）