賈 真

(南陽(yáng)醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，河南南陽(yáng)473000)

急性心肌缺血臨床可見(jiàn)于心肌梗死、冠狀動(dòng)脈搭橋術(shù)后、冠脈痙攣、心搏驟停行心肺復(fù)蘇后等情況。缺血再灌注后會(huì)加重心肌損傷，形成了缺血再灌注損傷。近年研究表明［1］，中藥能通過(guò)抑制炎癥細(xì)胞的趨化性與浸潤(rùn)，調(diào)節(jié)細(xì)胞因子的分泌及合成，減輕心肌的炎癥損傷，從而發(fā)揮心肌保護(hù)作用。銀杏達(dá)莫注射液為復(fù)方制劑，其成分主要是銀杏總黃酮和雙嘧達(dá)莫，前者可擴(kuò)張冠脈血管和腦血管、改善心、腦供血，后者可抑制血小板聚集和釋放。本研究建立大鼠心肌缺血再灌注模型，從炎癥反應(yīng)方面探討銀杏達(dá)莫注射液對(duì)缺血再灌心肌的保護(hù)機(jī)制［2］。

1 材料與方法

1.1 動(dòng) 物

SD大鼠45只，均為雄性，體質(zhì)量200～220 g，由鄭州大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物許可證號(hào):SCXK(豫)2013－0009。常規(guī)喂養(yǎng)。

1.2 藥品與試劑

銀杏達(dá)莫注射液，貴州益佰制藥股份有限公司產(chǎn)品，批號(hào) 130508，5 mL/支，5 mL含銀杏總黃酮4.5 ～5.5 mg、雙嘧達(dá)莫 2.2 ～ 2.8 mg。肌酸激酶(CK-MB)、乳酸脫氫酶(LDH)試劑盒，購(gòu)自南京建成生物工程研究所，批號(hào)依次是201305017，20130825。內(nèi)皮素 －1(ET-1)、腫瘤壞死因子 α(TNF-α)試劑盒，購(gòu)自中國(guó)北京北方生物技術(shù)研究所，批號(hào)依次是20130809，20130910。

1.3 動(dòng)物分組與給藥方法

將45只大鼠隨機(jī)分為以下3組，每組15只。①假手術(shù)組:只穿線不結(jié)扎冠狀動(dòng)脈，腹腔注射生理鹽水1μL/g，2次/d，連續(xù)注射7 d;②模型對(duì)照組即缺血再灌注組:腹腔注射生理鹽水1μL/g，2次/d，連續(xù)注射7 d;③銀杏達(dá)莫組:腹腔注射銀杏達(dá)莫注射液2μL/g，2次/d，連續(xù)腹腔注射7 d。各組末次腹腔注射0.5 h后，對(duì)大鼠實(shí)施麻醉、固定，制備心肌缺血再灌注損傷模型。

1.4 模型的建立

采用質(zhì)量分?jǐn)?shù)30 g/L的戊巴比妥鈉按10μL/g腹腔注射麻醉大鼠，背位固定大鼠于鼠板上。分離氣管并插管，用微型人工呼吸機(jī)(呼吸頻率為53次/min，氧流量20μL/g)正壓呼吸，連續(xù)記錄標(biāo)準(zhǔn)肢體Ⅱ?qū)?lián)心電圖。分離右頸總動(dòng)脈并插管，以備取血用。按現(xiàn)行文獻(xiàn)方法［3］制備心肌缺血再灌注模型:在胸骨旁0.5 cm處第3至5肋骨縱行切開(kāi)1 cm，逐層分離，將第4肋骨剪斷，結(jié)扎肋間動(dòng)脈，打開(kāi)胸腔，分離胸腺，剪開(kāi)心包，暴露出心臟。輕壓右側(cè)胸腔和腹部，以暴露左冠狀動(dòng)脈為標(biāo)志，在左心耳根部下2 mm處進(jìn)針，寬度為2～3 mm，深度為1～1.5 mm，避免過(guò)多觸及心肌和左肺，以0號(hào)無(wú)損傷絲線穿過(guò)心肌淺層，從右肺動(dòng)脈旁出針，立即將一個(gè)直徑2 mm的硅膠管放于血管與結(jié)扎線之間。假手術(shù)組中左冠狀動(dòng)脈前降支下只穿線不結(jié)扎，其余2組均結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支。以結(jié)扎后心電圖ST段明顯抬高、肉眼觀察結(jié)扎線以下心肌顏色蒼白為成功標(biāo)志，快速將心臟送回原位。結(jié)扎30 min后松開(kāi)結(jié)扎線，以抬高的ST段回落1/2以上，左心室前壁紫紺消失為再灌注成功的標(biāo)志，再灌注60 min。

1.5 檢測(cè)指標(biāo)

再灌注結(jié)束即刻，從大鼠頸總動(dòng)脈取血5 mL，離心制備血清，全自動(dòng)生化儀檢測(cè)CK-MB、LDH含量，ELISA法按試劑盒說(shuō)明檢測(cè)ET-1、TNF-α活性。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠血清CK-MB和LDH含量對(duì)比見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠血清CK-MB和LDH含量對(duì)比 ±s

注:與假手術(shù)組對(duì)比，*P ＜0.05;與模型對(duì)照組對(duì)比，#P ＜0.05。

組 別 動(dòng)物數(shù) CK-MB/(U·mL－1) LDH/(U·L－1)15 401.31 ±57.12 12.48 ±3.01模型對(duì)照組 15 825.23 ±61.28* 40.32 ±6.13*銀杏達(dá)莫組 15 665.75 ±40.18# 28.56 ±5.04假手術(shù)組#

2.2 各組大鼠血清中ET-1、TNF-a活性對(duì)比見(jiàn)表2。

表2 各組大鼠血清中ET-1、TNF-α活性對(duì)比

3 討論

心肌缺血是由于冠狀動(dòng)脈血流減少或中斷，不能滿足心肌的能量代謝，導(dǎo)致心肌細(xì)胞損傷甚至死亡。CK-MB和LDH存在于細(xì)胞內(nèi)，尤以心肌細(xì)胞為多。當(dāng)心肌缺血再灌注損傷時(shí)，心肌細(xì)胞中CK-MB和LDH大量溢出到血中，使其在血清中水平升高。CKMB可特異性反映心肌細(xì)胞損傷程度。血清中CKMB和LDH活性越高，反映心肌損傷程度越重。本實(shí)驗(yàn)中，模型對(duì)照組大鼠血清中CK-MB和LDH含量比假手術(shù)組顯著增加，說(shuō)明模型對(duì)照組心肌受損。銀杏達(dá)莫組CK-MB、LDH含量較模型對(duì)照組顯著降低，說(shuō)明銀杏達(dá)莫注射對(duì)大鼠缺血再灌注心肌有保護(hù)作用。心肌缺血再灌注損傷的發(fā)生機(jī)制相關(guān)因素很多，其中炎癥反應(yīng)與再灌注損傷關(guān)系密切。ET-1是主要由血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生的一種強(qiáng)有力的血管收縮因子，可誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞的遷移和增生，并促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的形成，其在血清中含量升高是血管內(nèi)皮損傷的標(biāo)志［4］。TNF-α是心肌缺血再灌注損傷早期白細(xì)胞和心肌細(xì)胞產(chǎn)生的炎癥細(xì)胞因子，能誘導(dǎo)血管炎癥反應(yīng)的發(fā)生，引起內(nèi)皮功能障礙;TNF-α可增加炎癥局部血管通透性，刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞和多形核白細(xì)胞(PMN)內(nèi)皮白細(xì)胞黏附分子的表達(dá)，促進(jìn)PMN聚集，導(dǎo)致PMN釋放活性氧和蛋白水解酶，引起心肌微血管的阻塞和損傷，加重缺血再灌注損傷程度。本實(shí)驗(yàn)中，與假手術(shù)組對(duì)比，模型對(duì)照組大鼠血清中ET-1、TNF-α活性顯著升高;與模型對(duì)照組對(duì)比，銀杏達(dá)莫組血清中ET-1、TNF-α活性顯著降低，差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05)。

本研究提示:銀杏達(dá)莫注射液能通過(guò)降低炎癥因子水平，防止炎癥因子在缺血區(qū)血管中黏附、聚集來(lái)減輕心肌微血管內(nèi)皮損傷，從而起到保護(hù)缺血心肌的作用。

［1］黃燁，王宗仁.中藥干預(yù)心肌缺血再灌注炎癥反應(yīng)的研究進(jìn)展［J］.心臟雜志，2009，21(4):592 －594.

［2］包怡敏，劉愛(ài)華，張志雄，等.銀杏酮酯預(yù)處理對(duì)心肌缺血再灌注大鼠心肌組織炎癥相關(guān)細(xì)胞因子含量的影響［J］.中西醫(yī)結(jié)合學(xué)報(bào)，2010，8(4):373－377.

［3］周學(xué)武，廖自福，陳菁，等.大鼠心肌缺血再灌注損傷模型的建立與評(píng)價(jià)［J］.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與比較醫(yī)學(xué)，2009，20(4):228－232.

［4］趙亞玲，敖虎山.心肌缺血再灌注損傷的研究進(jìn)展［J］.中國(guó)循環(huán)雜志，2011，26(5):396 －398.