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      中醫(yī)治法對(duì)高尿酸血癥大鼠模型AngⅠ,AngⅡ水平的影響*

      2015-02-18 05:43:26高萬飛徐厚謙
      西部中醫(yī)藥 2015年5期
      關(guān)鍵詞:灌胃高尿酸造模

      高萬飛,徐厚謙,金 華

      1武威職業(yè)學(xué)院中醫(yī)康復(fù)技術(shù)系,甘肅 武威733000;2甘肅中醫(yī)學(xué)院中醫(yī)內(nèi)科教研室

      高尿酸血癥是一種慢性代謝類疾病,與肥胖、高血壓、胰島素抵抗等代謝綜合征密切相關(guān)[1],成為心血管疾病、腎臟疾病、糖尿病的危險(xiǎn)因素[2]。近年來,隨著人們生活方式和飲食結(jié)構(gòu)的改變,高尿酸血癥的發(fā)病率明顯上升。目前,中醫(yī)藥防治高尿酸血癥取得了一定療效,但具體治療方法卻各有差別,本研究通過觀察不同中醫(yī)基礎(chǔ)方對(duì)高尿酸血癥大鼠AngⅠ,AngⅡ水平的影響,進(jìn)一步甄別本病病機(jī),為治療高尿酸血癥及其并發(fā)癥提供臨床用藥參考。

      1 材料與方法

      1.1 動(dòng)物 雄性Wistar大鼠135只,SPF級(jí),體質(zhì)量(190~210)g。由甘肅中醫(yī)學(xué)院科研實(shí)驗(yàn)中心提供,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證號(hào)為SCXK(甘)2004-007-0001536。

      1.2 藥物試劑及儀器 腺嘌呤(蘭州生物工程化學(xué)試劑公司,批號(hào):F20060526);鹽酸乙胺丁醇片(成都錦華制藥廠,批號(hào):060502);別嘌呤醇片(上海信誼萬象制藥廠,批號(hào):060501);碘[125I]血管緊張素Ⅰ放射免疫分析藥盒(北京科美東雅生物技術(shù)有限公司提供,批號(hào):國(guó)藥準(zhǔn)字S20063121);碘[125I]血管緊張素Ⅱ放射免疫分析藥盒(北京科美東雅生物技術(shù)有限公司提供,批號(hào):國(guó)藥準(zhǔn)字S20063128);主要儀器為全自動(dòng)生化分析儀(日本日立7170A型);KDC-2044型低溫高速離心機(jī)離心機(jī)(科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司生產(chǎn),型號(hào):H.H.S21-4)。

      1.3 方法

      1.3.1 造模劑的配備 將腺嘌呤10 mg/mL,乙胺丁醇片25 mg/mL溶于蒸餾水中配置成混懸液。

      1.3.2 中藥制劑的配備 1)滋腎陰方,藥物組成:熟地黃、山茱萸、山藥,劑量按《小兒藥證直訣》六味地黃丸用量比例,為 2∶1∶1;2)溫腎陽(yáng)方,藥物組成:巴戟天、肉蓯蓉、肉桂,劑量按《圣濟(jì)總錄》地黃飲子用量比例,為 1∶1∶1;3)健脾方,藥物組成:黨參、白術(shù)、白扁豆,劑量按《和劑局方》四君子湯用量比例,為 4∶4∶3;4)活血方,藥物組成:川芎、當(dāng)歸、紅花,劑量按《醫(yī)宗金鑒》桃紅四物湯用量比例,為 2∶3∶2;5)化痰方,藥物組成:半夏、陳皮、茯苓,劑量按《和劑局方》二陳湯用量比例,為2∶2∶1;6)利濕方,藥物組成:萆薢、石菖蒲、車前子,劑量按《醫(yī)學(xué)心悟》程氏萆薢分清飲用量比例,為 5∶2∶4。

      上述6類復(fù)方用藥由甘肅中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院鑒定并提供,按比例稱取,水煎,過濾,濃縮,制成1.8 g/mL的藥液,每kg體質(zhì)量給藥量分別相當(dāng)于成人每kg體質(zhì)量用藥量的30倍[3],藥液裝入瓶中高壓滅菌,4℃保存。

      1.3.3 西藥的制備 將別嘌呤醇以5.4mg/kg按5.4mg/mL溶于蒸餾水中配置成混懸液。

      1.4 動(dòng)物分組、造模及給藥

      1.4.1 動(dòng)物分組 將大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)(室溫20~24℃)7天,隨機(jī)分為9組,分別為空白對(duì)照組、模型組、西藥治療組與不同中醫(yī)治法的滋腎陰組、溫腎陽(yáng)組、健脾組、活血組、化痰組、利濕組,每組15只??瞻讓?duì)照組予10mL/kg蒸餾水灌胃,1次/d。其余各組參照文獻(xiàn)[3]造模方法及預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果,將“1.3.1”項(xiàng)下混懸液(造模劑)按體質(zhì)量10mL/kg劑量灌胃,連續(xù)灌胃21天。第21天大鼠尾靜脈取血1mL,分離血清,用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定各組血清尿酸水平。

      1.4.2 給藥及指標(biāo)檢測(cè)

      1.4.2.1 給藥 第22天開始給各組大鼠早、晚8時(shí)各灌胃1次,連續(xù)灌胃14天。空白對(duì)照組予10mL/kg蒸餾水灌胃。模型組上午予造模劑10mL/kg,下午10 mL/kg蒸餾水灌胃;中藥滋腎陰組、溫腎陽(yáng)組、健脾組、活血組、化痰組、利濕組分別給予相應(yīng)藥物灌胃3mL/次;西藥治療組給予別嘌呤醇混懸液1mL/kg灌胃。第35天末給藥60分鐘后,25%烏拉坦腹腔注射麻醉各組大鼠,股動(dòng)脈取血,離心,分離血清,測(cè)定各組血清尿酸水平。

      1.4.2.2 血漿AngⅠ、AngⅡ測(cè)定 靜脈取血5mL,迅速注入放在冰水浴冷卻的酶抑制抗凝試管中,搖勻,立即放回冰水浴中冷卻,待離心時(shí)取出。1 000 rpm離心5分鐘 (4℃離心機(jī)),分離出血漿(此操作應(yīng)在15分鐘內(nèi)完成),-25℃(AngⅠ)或-20℃(AngⅡ)保存待測(cè)(按說明書以放免法測(cè)定,單位:ng/mL)。

      1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件處理,計(jì)量資料以(χ±s)表示,各組間比較采用單因素方差分析,各組均數(shù)間的兩兩比較采用LSD-t法,檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α=0.05。

      2 結(jié)果

      2.1 造模結(jié)果 造模第21天剔除各組血清UA沒有升高和自然死亡的大鼠,其余各組UA水平與空白對(duì)照組相比顯著升高(P<0.05),說明該實(shí)驗(yàn)造模成功[4],見表 1。

      表1 第21天、第35天各組大鼠血清UA水平變化情況(χ±s)μmol/L

      2.2 血漿AngⅠ、AngⅡ水平 AngⅡ水平方面,與空白對(duì)照組比較,模型組、溫腎陽(yáng)組、滋腎陰組、健脾組,P<0.01,其余各治療組P>0.05;與模型組比較,西藥治療組、活血組、利濕組、化痰組P<0.01,其余各治療組P>0.05;與西藥治療組比較,活血組、利濕組、化痰組P>0.05,溫腎陽(yáng)組、滋腎陰組、健脾組P<0.01;活血組、利濕組、化痰組組間比較P>0.05,溫腎陽(yáng)組、滋腎陰組、健脾組組間比較P>0.05。

      AngⅠ水平方面,與模型組比較,除活血組有顯著性差異外,其余中醫(yī)治療組血清AngⅠ濃度無明顯差異,但西藥治療組、利濕組、化痰組血清AngⅠ濃度低于模型組。說明活血法有明顯降低血清AngⅠ作用,利濕、化痰法有降低血清AngⅠ的趨勢(shì);模型組AngⅡ含量與空白對(duì)照組比較均升高(P<0.01),說明腺嘌呤和乙胺丁醇能顯著升高高血漿中AngⅡ的濃度?;钛M、利濕組、化痰組AngⅡ濃度低于模型組(P<0.01),與西藥治療組比較無顯著性差異(P>0.05),與其余各中藥治療組相比有顯著差異(P<0.01),表明活血、利濕、化痰法能明顯降低血漿中AngⅡ的濃度,且治療效果高于其他中藥治療組(P<0.01),見表2。

      表2 對(duì)高尿酸血癥大鼠模型血漿AngⅠ、AngⅡ水平的影響

      3 討論

      AngⅠ、AngⅡ是腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)的主要物質(zhì),AngⅠ由腎素作用于血管緊張素原形成,它的生理活性很弱,可引起輕微縮血管反應(yīng)。AngⅡ由AngⅠ經(jīng)AngⅠ轉(zhuǎn)化酶作用而形成,AngⅡ的受體廣泛分布于心肌、血管、肝、腎等器官,通過與受體介導(dǎo)結(jié)合而引起強(qiáng)烈縮血管作用,促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞增值,久之出現(xiàn)血管壁彈性減弱[5];尿酸可增加腎皮質(zhì)腎素的表達(dá)[6],增加AngⅡ釋放,兩者都可使腎血管收縮,導(dǎo)致高血壓病、動(dòng)脈硬化或腎性高血壓。

      AngⅡ不但引起大血管病變,而且可造成微血管損害。微血管病變可導(dǎo)致組織缺氧,不僅使血乳酸水平增高致腎臟清除尿酸減少,而且使尿酸形成過程中的底物,如腺嘌呤、次黃嘌呤以及酶增加,導(dǎo)致血尿酸增加。

      高尿酸血癥臨床表現(xiàn)多以水腫、關(guān)節(jié)疼痛、尿少等為主,辨證為“瘀血”“痰”“濕”。與先天腎精不足,氣化功能衰退;后天飲食失養(yǎng),過食肥甘厚味及辛辣炙煿之品,傷及脾胃,致津液不歸正化,停而為濕濁,或聚而為痰。濕阻氣機(jī),釀久成痰;痰阻經(jīng)脈,津停而為濕濁。二者相互影響,相互為病。久而阻滯經(jīng)絡(luò),血行瘀滯。因此,隨年齡的增加腎精衰少,發(fā)病率升高。遇寒冷、饑餓、飲酒、吸煙、食“腥膻”等“發(fā)物”而誘使本病發(fā)作,病機(jī)為脾腎虧虛,痰濕內(nèi)蘊(yùn),瘀血阻滯,虛為本,實(shí)為標(biāo),臨床多見虛實(shí)夾雜證。本研究結(jié)果表明,活血、化痰、利濕治法優(yōu)于其他治療方法,進(jìn)一步證明痰、濕、瘀是本病的基本病機(jī)。

      對(duì)于高尿酸血癥患者,實(shí)驗(yàn)室檢查僅可見血尿酸增高,無其他明顯癥狀可辨。但此類患者一般伴有肥胖、血脂及血液黏稠度增高等痰、濕、瘀血之證,此時(shí)給予化痰、利濕、活血法辨證論治,配合使用具有短期內(nèi)降低血清尿酸濃度的藥物可緩解患者癥狀、預(yù)防腎臟功能損害的發(fā)生。

      [1] Kim Es,Kwon HS,Ahn CW,et al.Serum uric acid level is associated w ith metabolic syndrome and m icroalbuminuria in Korean patients with type 2 diabetes mellitus[J].JournalofDiabetesand ItsComplications,2010,25(5):309-313.

      [2] M linar B,Marc J,Janez A,et al.Molecular mechanisms of insulin resistance and associated diseases[J].Clin Chim Acta,2007,375(1-2):20-35.

      [3] 熊湘明,曲竹秋.大鼠高尿酸血癥模型建立[J].天津中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2001,20(4):28-29.

      [4] 楊維杰,徐厚謙,金華,等.不同中醫(yī)治法對(duì)高尿酸血癥模型大鼠血清尿酸水平的影響比較[J].中醫(yī)兒科雜志,2007,3(2):25-27.

      [5] Jin M,Yang F,Yang I,et al.Uric acid,hyperuricemia and vascular diseases[J].Front Biosci,2012,17:656-669.

      [6] Filtopoulos V,Hadjiyannakos D,Vlassopoulos D.New insights into uric acid effects on the progression and prognosis of chronic kidney disease[J].Ren Fail,2012,34(4):510-520.

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