◎?qū)O 偉

（江蘇省食品藥品檢驗(yàn)所,江蘇 南京 210000）

食品中蘇丹紅應(yīng)用新型分離技術(shù)與高效液相色譜聯(lián)合測(cè)定的新方法分析

◎?qū)O 偉

（江蘇省食品藥品檢驗(yàn)所,江蘇 南京 210000）

本文通過(guò)試驗(yàn)的方式,研究以濁點(diǎn)萃取法為前處理技術(shù),聯(lián)合高效液相色譜技術(shù),對(duì)食品樣本中蘇丹紅染料進(jìn)行分離與測(cè)定的方法,收到了良好的效果。

蘇丹紅；分離技術(shù)；高效液相色譜技術(shù)

目前可用于液相色譜測(cè)定前樣品處理的技術(shù)主要有3種，分別為液液萃取法、固相萃取法及濁點(diǎn)萃取法。相較于前兩種處理方法，濁點(diǎn)萃取法反應(yīng)過(guò)程中無(wú)需使用有毒性的揮發(fā)性溶劑。有關(guān)研究指出，濁點(diǎn)萃取技術(shù)最大的優(yōu)勢(shì)即綠色環(huán)保，在生物大分子分離與純化領(lǐng)域中有著非常高的應(yīng)用價(jià)值。

1 試驗(yàn)方法

1.1 試驗(yàn)儀器

研究中所涉及到的試驗(yàn)儀器與設(shè)備包括：超聲波清洗機(jī)，恒溫水浴鍋，離心處理儀，0.22μ m單位有機(jī)濾膜，高效液相色譜儀，紫外分光光度計(jì)，色譜柱，容量瓶，0.1m g感量分析天平，注射器。

1.2 試驗(yàn)試劑

研究中涉及到的試劑包括：蘇丹紅A標(biāo)準(zhǔn)溶液，純度為97%；蘇丹紅B標(biāo)準(zhǔn)溶液，純度為97%；色譜純乙腈；分析純正己烷；色譜純甲醇；分析純氯化鈉；分析純碳酸鈉；分析純磷酸鈉；分析純T rito n x-114。

1.3 試驗(yàn)方法

分別取蘇丹紅A、蘇丹紅B標(biāo)準(zhǔn)系列溶液濃度分別為0.16、0.32、0.64、1.28μ g/m L、及2.56μ g/ m L的標(biāo)準(zhǔn)溶液，置入10.0m L劑量離心管中，一次性加入濃度為1%的T rito n x-114溶液3.0m L及濃度為10%的碳酸鈉溶液2.0m L，用二次水定容至10.0m L。離心管置入恒溫水浴鍋中進(jìn)行水浴加熱，溫度為45℃，反應(yīng)時(shí)間為20.00m in，取出后按照4000r/m in條件進(jìn)行離心處理，反應(yīng)時(shí)間為10.00m in。待溶液分離為完全透明兩相后（下層相為水相，上層相為表面活性劑富集相），用注射器吸出下層水相。上層表面活性富集相中加入一定量正己烷-水溶液（兩者按照7∶3比例配置），體積定容至0.5m L。溶液過(guò)0.22μ m有機(jī)濾膜處理，最后進(jìn)入高效液相色譜儀中進(jìn)行測(cè)定。

1.4 觀察指標(biāo)

按照標(biāo)準(zhǔn)方法分別應(yīng)用液液萃取法、固相萃取法進(jìn)行食品樣本中蘇丹紅含量分析。對(duì)3種不同方法的回收率結(jié)果進(jìn)行對(duì)比。同時(shí)，觀察在濁點(diǎn)萃取法下表面活性劑濃度對(duì)濁點(diǎn)萃取的影響，平衡時(shí)間對(duì)濁點(diǎn)萃取的影響，以及樣本中蘇丹紅染料測(cè)定結(jié)果。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 三種不同處理方法回收率分析

液液萃取法、固相萃取法及濁點(diǎn)萃取法對(duì)樣品中蘇丹紅的回收率試驗(yàn)結(jié)果如表1所示。

結(jié)合以上結(jié)果可知：應(yīng)用濁點(diǎn)萃取法進(jìn)行前處理后的回收率，與液液萃取法、固相萃取法的回收率對(duì)比基本相當(dāng)，加之濁點(diǎn)萃取法兼具綠色環(huán)保、操作簡(jiǎn)便的優(yōu)勢(shì)，故具有確切的應(yīng)用價(jià)值。

表1 三種不同處理方法回收率對(duì)比表

2.2 表面活性劑濃度對(duì)濁點(diǎn)萃取的影響分析

圖1 表面活性劑濃度對(duì)濁點(diǎn)萃取的影響結(jié)果示意圖

濁點(diǎn)萃取以T rito n x-114為主，其濁點(diǎn)溫度較低，在22℃左右。濁點(diǎn)萃取效果將直接受反應(yīng)過(guò)程中所使用表面活性劑用量、濃度的影響。因此，在萃取反應(yīng)中，為充分提取目標(biāo)分析物體，必須對(duì)表面活性劑濃度進(jìn)行優(yōu)化。一方面，當(dāng)濃度過(guò)小時(shí)，表面活性劑難以定量自體系中萃取所需要的分析物；另一方面，當(dāng)濃度過(guò)大時(shí)，表面活性劑會(huì)在離心管內(nèi)壁產(chǎn)生吸附反應(yīng)，對(duì)數(shù)據(jù)分析產(chǎn)生影響。因此，為提高食品中對(duì)蘇丹紅的萃取率，必須在確保萃取徹底的前提下，盡可能減小相比。具體試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖1。

結(jié)合圖1數(shù)據(jù)可知：當(dāng)T rito n x-114濃度＜0.30%時(shí)，食品樣本中蘇丹紅提取效率呈顯著上升的趨勢(shì)，當(dāng)T rito n x-114濃度在0.30%～0.35%時(shí)，蘇丹紅的提取速度開(kāi)始減慢，而當(dāng)T rito n x-114濃度＞0.35%時(shí)，蘇丹紅提取效率基本保持不變（或也可能伴隨T rito n x-114濃度的繼續(xù)上升而有一定的下降趨勢(shì)）。同時(shí)，考慮到蘇丹紅為疏水性化合物，可知用T rito n x-114對(duì)蘇丹紅燃料進(jìn)行提取的原理是基于蘇丹紅染料與疏水性膠束在水溶液中的疏水作用差異。換言之，隨著T rito n x-114濃度的提高，水溶液中疏水性膠束的數(shù)量有所增加，同步會(huì)使T rito n x-114對(duì)蘇丹紅染料的提取能力提高。但當(dāng)T rito n x-114提高至表面活性劑富集相最終體積時(shí)，預(yù)濃縮因子將有所下降，導(dǎo)致隨著T rito n x-114濃度的增加，分析信號(hào)反而變差。因此，結(jié)合實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可知：在對(duì)食品樣本中蘇丹紅染料進(jìn)行提取時(shí)，T rito n x-114濃度以0.30%為理想狀態(tài)。

2.3 平衡時(shí)間對(duì)濁點(diǎn)萃取的影響分析

本研究中分析在10.00～25.00m in這一時(shí)間范圍內(nèi)，因平衡時(shí)間變化而對(duì)濁點(diǎn)萃取蘇丹紅A、B溶液萃取效率產(chǎn)生的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖2。在樣品溶液靜置于溫度45℃水浴環(huán)境中，保持20.00m in后，基本能夠?qū)崿F(xiàn)徹底的萃取；同時(shí)，在20.00m in后，繼續(xù)增加水浴反應(yīng)的時(shí)間對(duì)萃取效率的影響并不顯著。故結(jié)合實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可知：在對(duì)食品樣本中蘇丹紅染料進(jìn)行提取時(shí)，平衡時(shí)間以20.00m in為理想狀態(tài)。

圖2 平衡時(shí)間對(duì)濁點(diǎn)萃取的影響結(jié)果示意圖

2.4 樣本中蘇丹紅染料測(cè)定結(jié)果分析

用高效液相色譜法對(duì)蘇丹紅染料標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果顯示：兩種蘇丹紅染料標(biāo)準(zhǔn)溶液均可在10.00m in內(nèi)取得滿意的分離效果，且反應(yīng)過(guò)程中最高峰互不干涉，其中A標(biāo)準(zhǔn)溶液保留時(shí)間為5.35m in，B標(biāo)準(zhǔn)溶液保留時(shí)間為6.45m in。

在樣本溶液中加標(biāo)濃度為0.32μ g/m L的蘇丹紅標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照上述試驗(yàn)方法中的濁點(diǎn)萃取前處理過(guò)程，表面活性劑富集相用正己烷-水溶液稀釋處理后，過(guò)0.22μ m有機(jī)濾膜并進(jìn)樣，可得高效液相色譜-紫外檢測(cè)色譜圖（見(jiàn)圖3）。

如圖2所示，有2個(gè)峰分別與A、B兩個(gè)蘇丹紅標(biāo)準(zhǔn)溶液相對(duì)應(yīng)，其他強(qiáng)度較高峰則出現(xiàn)在色譜圖開(kāi)始部分，應(yīng)為樣品中的其他物質(zhì)所致，后續(xù)色譜圖基線相對(duì)清晰與平穩(wěn)，故處理得到不受零散峰干擾的峰。經(jīng)過(guò)濁點(diǎn)萃取程序處理后，高效液相色譜圖提示樣品中未檢出蘇丹紅A、B號(hào)染料峰，故表明該分析樣品中未含蘇丹紅染料，食品安全。

3 結(jié)語(yǔ)

本文以濁點(diǎn)萃取法為前處理技術(shù)，聯(lián)合高效液相色譜技術(shù)，對(duì)食品樣本中蘇丹紅染料進(jìn)行分離與測(cè)定，基于對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的分析，得出以下結(jié)論：1）應(yīng)用濁點(diǎn)萃取法進(jìn)行前處理后的回收率與液液萃取法、固相萃取法下回收率對(duì)比基本相當(dāng)，加之濁點(diǎn)萃取法兼具綠色環(huán)保、操作簡(jiǎn)便的優(yōu)勢(shì)，故具有確切的應(yīng)用價(jià)值；2）在對(duì)食品樣本中蘇丹紅染料進(jìn)行提取時(shí)，T rito n x-114濃度以0.30%為理想狀態(tài)；3）在對(duì)食品樣本中蘇丹紅染料進(jìn)行提取時(shí)，平衡時(shí)間以20.00m in為理想狀態(tài)；4）高效液相色譜圖提示樣品中未檢出蘇丹紅A、B號(hào)染料峰，故表明該分析樣品中未含蘇丹紅染料，食品安全。

[1]陳靜，劉召金，安寶超，等.全自動(dòng)在線固相萃取-二維高效液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用測(cè)定辣椒油中蘇丹紅[J].分析化學(xué)，2013，41（9）：1418-1422.

[2]朱成晶，朱鴨梅，高宏，等.黑色糧谷類食品中蘇丹黑B和蘇丹紅B檢測(cè)方法研究[C].第六屆華東地區(qū)色譜質(zhì)譜學(xué)術(shù)報(bào)告會(huì)論文集，2014：1-7.

A New Method for the Analysis of the Joint Determination of Tonyred Application of New Separation Technology with High Performance Liquid Chromatography in Food

Sun Wei
（Jiangsu Institute for Food and Drug Control, Jiangsu Nanjing 210000, China）

Through the experiment, this paper studied on pretreatment technology with cloud point extraction method, combined with high performance liquid chromatography method for separation and determination of tonyred dyes in food samples, received good results.

Tonyred; Separation technology; High performance liquid chromatography

TS207.3；O657.72

孫偉（1982-），男，漢族，江蘇南通人，助理工程師，主要研究方向：食品質(zhì)量檢測(cè)。