慢性乙型肝炎患者外周血T細胞亞群的表達及意義

覃羽華岑光旅1王俊利許桂丹唐任光

(右江民族醫(yī)學院附屬醫(yī)院，廣西百色533000)

關(guān)鍵詞〔〕慢性乙型肝炎；T細胞亞群；細胞免疫功能

中圖分類號〔〕R512.6+2〔

基金項目：百色市科學研究與技術(shù)開發(fā)計劃項目(No.1005004)

通訊作者：唐任光(1966-)，男，教授，碩士生導(dǎo)師，主要從事臨床醫(yī)學檢驗和臨床輸血檢驗研究。

1百色市人民醫(yī)院

第一作者：覃羽華(1985-)，女，副主任技師，主要從事細胞免疫學研究。

慢性乙型肝炎(CHB)可發(fā)展為肝硬化，肝衰竭以及肝細胞癌等。機體在感染乙型肝炎病毒(HBV)后，通過誘發(fā)機體的免疫反應(yīng)間接損傷肝細胞，病毒的控制和清除有賴于機體的免疫系統(tǒng)，因此疾病發(fā)生、發(fā)展與宿主的細胞免疫功能狀態(tài)密切相關(guān)〔1〕。桂西地區(qū)是乙型肝炎的高發(fā)地區(qū)，對其進行相應(yīng)的研究具有重要的意義。為此，本文檢測該地區(qū)105例CHB患者T細胞亞群的表達規(guī)律，以了解患者機體的細胞免疫功能變化及與臨床的關(guān)系。

1對象與方法

1.1對象①CHB組：選取2010年1月至2011年3月間桂西地區(qū)臨床診斷為CHB的住院及門診患者105例(輕度26例，中度34例，重度32例,肝炎后肝硬化13例)，其中男63例，女42例，年齡26～68歲，平均(47.2±19.8)歲。診斷標準符合2000年中華醫(yī)學會傳染病與寄生蟲病學會和肝病學分會學術(shù)會議制定的標準〔2〕，所選病例均不合并其他病毒感染，如甲、丙、戊、庚型肝炎病毒和HIV病毒感染等。②對照組：20例，男12例，女8例，年齡24～58歲，平均(41.2±17.6)歲，均為醫(yī)院健康查體和醫(yī)務(wù)工作者。

1.2試劑和儀器實驗中使用三標記單克隆抗體CD3-PC5/CD4-FITC/CD8-PE，雙標記單克隆抗體CD3/CD16+CD56-PE，CD28-FITC，均購自BECKMAN COULTER公司產(chǎn)品。流式細胞儀為美國BD FACSCalibur型。

1.3方法分別在兩個試管中先加入擬標記抗體10 μl，再加入EDTA抗凝的外周靜脈血50 μl(另設(shè)一管陰性對照)，輕微振蕩混勻，室溫避光放置15 min,每管加入溶血劑300 μl充分混勻，室溫避光放置15 min，待完全溶血后1 200 r/min離心5 min，棄去上清，加入1 000 μl鞘液，混勻1 200 r/min離心5 min，棄上清，加鞘液500 μl，充分混勻使細胞懸浮，流式細胞儀檢測，每管獲取細胞10 000個。T細胞亞群及NK細胞的測定結(jié)果用CellQuest 軟件分析。

2結(jié)果

與對照組相比較，CHB組CD3+CD4+CD8-和CD8+CD28+的百分率及CD4+/CD8+比值均有所降低，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，尤其是重度CHB和肝炎后硬化組下降更為顯著，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，下降幅度與疾病的嚴重程度有關(guān)；肝炎后硬化組CD3+CD4-CD8+和CD8+CD28-的百分率比對照組偏高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；重度CHB和肝炎后肝硬化組CD3-/CD16+56+的百分率則比對照組偏低，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05和P<0.01)，其余組與對照組相比均無明顯改變(P>0.05)；各組CD3+T細胞的百分率無明顯改變(P>0.05)。見表1。

表1　CHB患者外周血T細胞亞群檢測結(jié)果

與對照組比較：1)P<0.05,2)P<0.01

3討論

人體感染HBV后,體內(nèi)抗病毒的免疫反應(yīng)主要是細胞免疫,而T細胞在特異性免疫應(yīng)答中起關(guān)鍵作用,當細胞免疫功能正常時，T細胞通過有效地溶細胞或非溶細胞機制清除病毒,感染可得到控制，但細胞免疫功能低下時，機體不能有效清除HBV導(dǎo)致病毒長期存在引發(fā)肝炎慢性化〔3，4〕。T細胞亞群是目前臨床上最常用的反映細胞免疫功能狀態(tài)的指標，本研究從對照組到肝炎后肝硬化組，CD4+T細胞百分比和CD4+/CD8+比值逐漸下降，與文獻〔5〕報道相同。CD4+T細胞主要為輔助性T細胞(Th細胞)，被抗原激活后可促進CD8+T細胞的活化與增殖，同時使B細胞分泌抗體,誘導(dǎo)細胞免疫和體液免疫的產(chǎn)生，對HBV的清除起重要作用。本結(jié)果表明在CHB患者中存在細胞免疫功能紊亂、低下，使得HBV復(fù)制增強不能被有效清除，與李鴻賓等〔6〕報道一致。本文顯示，各CHB組患者CD8+和CD8+CD28-的比例與對照組無明顯差異，在肝炎后肝硬化組中的百分率比對照組略高，CD8+CD28+的比例則隨著病程的進展而降低。CD8+T細胞具有特異性殺傷靶細胞抗感染的功能，但在清除病毒的同時也引起了肝細胞的破壞、凋亡，肝功能的損害，與肝炎后肝硬化、肝腹水的形成有一定的關(guān)系。CD8+CD28+T細胞的降低和CD8+CD28-T細胞的增多是T細胞功能下降的標志〔7〕。CD8+CD28+T細胞的減少使特異性細胞免疫功能降低，CD8+CD28-T細胞相對增多而抑制CD4+T細胞，使機體對病毒反應(yīng)性減弱，引起清除病毒的能力降低，這兩方面與HBV存在持續(xù)感染、病情遷延不愈相關(guān)〔8，9〕。NK細胞不表達特異性抗原識別受體，屬非特異性免疫細胞，無需抗原預(yù)先致敏，就可直接殺傷病毒感染的靶細胞，在維持和調(diào)節(jié)特異性免疫中起重要作用。本研究表明，HBV侵入人體會破壞機體NK細胞的功能,表現(xiàn)為重度CHB和肝炎后肝硬化患者外周血CD16+56+細胞比例顯著低于對照組，說明機體細胞免疫功能處于抑制狀態(tài)，對NK細胞進行動態(tài)觀察有助于判定免疫增強類藥物的療效。

綜上所述，特異性免疫及非特異性免疫在CHB損傷中都發(fā)揮了重要的作用，值得深入研究〔10〕。了解CHB患者外周血T細胞亞群的表達，對尋找能夠有效抑制或消除HBV，減少和防止不良預(yù)后發(fā)生的治療方法或藥物有著重要的意義。

4參考文獻

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〔2013-03-01修回〕

(編輯曹夢園)