腎綜合征出血熱患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群的變化及意義

王麗娜，　韓增磊，　李曉斐

(1.青島市傳染病醫(yī)院，山東 青島 266033；2. 青島市市立醫(yī)院，山東 青島 266033)

腎綜合征出血熱患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群的變化及意義

王麗娜1，韓增磊2，李曉斐1

(1.青島市傳染病醫(yī)院，山東 青島 266033；2. 青島市市立醫(yī)院，山東 青島 266033)

摘要：目的研究腎綜合征出血熱(HFRS)患者淋巴細(xì)胞亞群絕對(duì)值及比率的變化，以探討淋巴細(xì)胞亞群在疾病的分期、治療和預(yù)后判斷中的作用，為臨床治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)95例HFRS患者及30名正常對(duì)照者外周血T淋巴細(xì)胞亞群絕對(duì)值及比率。結(jié)果在HFRS各病期之間，CD3+T淋巴細(xì)胞絕對(duì)值差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，CD4+T細(xì)胞絕對(duì)值從輕型到危重型呈進(jìn)行性下降，而CD8+T細(xì)胞絕對(duì)值升高；HFRS患者在發(fā)熱期CD4+T細(xì)胞比率已顯著下降，CD8+T細(xì)胞比率顯著升高，CD4+/CD8+比值顯著下降并倒置，與正常對(duì)照者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，至低血壓期和少尿期達(dá)極值。結(jié)論HFRS患者各病期淋巴細(xì)胞亞群比例嚴(yán)重失衡，動(dòng)態(tài)檢測(cè)淋巴細(xì)胞亞群有助于疾病的分期、治療和預(yù)后判斷。

關(guān)鍵詞：T淋巴細(xì)胞亞群；腎綜合征出血熱；流式細(xì)胞術(shù)

中圖分類號(hào)：

文章編號(hào)：1673-8640(2015)01-0058-03R446.63

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：碼：A

DOI：10.3969/j.issn.1673-8640.2015.01.014

作者簡(jiǎn)介：王麗娜，女，1978年生，碩士，主管技師，主要從事分子生物學(xué)及傳染病臨床檢驗(yàn)研究。

通訊作者：李曉斐，聯(lián)系電話：0532-81636139。

收稿日期：(2014-09-02)

腎綜合征出血熱( hemorrhagic fever with renal syndrome , HFRS)是由漢坦病毒引起的以鼠類為主要傳染源的自然疫源性疾病。臨床上以發(fā)熱、出血、腎功能損害為主要表現(xiàn)[1]。嚴(yán)重者可導(dǎo)致多臟器功能損害，危及生命。其發(fā)病機(jī)制與機(jī)體免疫功能有關(guān)，因此機(jī)體免疫功能研究在漢坦病毒致病機(jī)制中的作用越來(lái)越受到重視，為探討HFRS患者的免疫功能變化，我們對(duì)95例HFRS患者的CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞進(jìn)行了研究。

材料和方法

一、研究對(duì)象

95例患者均為青島市傳染病醫(yī)院2010年1月至2012年12月收入院患者，男76例，女19例，年齡 (43±12)歲。診斷標(biāo)準(zhǔn)：嚴(yán)格按國(guó)家衛(wèi)生部1997年頒布的《流行性出血熱防治方案》制定的診斷標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行診斷分型。其中輕型16例、中型47例、重型22例、危重型3例、非典型7例。所有病例經(jīng)特異性HFRS IgM、IgG檢查均為陽(yáng)性，臨床表現(xiàn)典型。正常對(duì)照組30名為健康獻(xiàn)血者，男20名，女10名，年齡 (29±10)歲。

二、方法

采靜脈血2 mL，乙二胺四乙酸抗凝后立即進(jìn)行檢測(cè)。采用美國(guó)BD公司CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒對(duì)細(xì)胞作熒光標(biāo)記，F(xiàn)ACS Calibur流式細(xì)胞儀測(cè)定其絕對(duì)值及比率。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

結(jié)果

一、CD3+T細(xì)胞在HFRS患者不同病期略有減低(P>0.05)；CD4+T細(xì)胞在各病期呈進(jìn)行性減低，與正常對(duì)照組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01或0.05)，多尿期開(kāi)始恢復(fù)；CD8+T細(xì)胞絕對(duì)值在各病期減少，而CD8+T細(xì)胞比率明顯升高，CD4+/CD8+比值各期均顯著下降，與正常對(duì)照組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01或P<0.05)。HFRS患者病程中CD3+T細(xì)胞基本保持不變是由CD8+T細(xì)胞升高引起，表現(xiàn)為T細(xì)胞亞群中CD8+T細(xì)胞比率升高，而CD4+T細(xì)胞數(shù)比率在各期有不同程度降低(P<0.01或P<0.05)。見(jiàn)表1。

二、不同臨床病型HFRS患者除輕型外均存在不同程度的T淋巴細(xì)胞及亞群CD4+、CD8+T細(xì)胞絕對(duì)值的降低；隨病型的加重，CD4+T細(xì)胞絕對(duì)值在危重型達(dá)最低值。危重型患者CD3+T細(xì)胞的回升是以CD8+T細(xì)胞為主。CD4+T細(xì)胞比率隨病型的加重越來(lái)越低，而CD8+T細(xì)胞比率則顯著升高(P<0.01或P<0.05)，CD4+/CD8+比值愈低，病情愈重。見(jiàn)表2。

病期 例數(shù)CD3+T細(xì)胞絕對(duì)值(個(gè)/μL)CD4+T細(xì)胞絕對(duì)值(個(gè)/μL)比率CD8+T細(xì)胞絕對(duì)值(個(gè)/μL)比率CD4+/CD8+發(fā)熱期301917.6±483.31035.5±257.6*0.29±0.10*864.8±291.7**0.34±0.17*0.89±0.15**低血壓期181532.5±384.4642.4±284.5*0.21±0.20**907.3±128.3**0.39±0.15**0.46±0.20**少尿期191194.7±475.8363.8±113.5**0.25±0.11**975.8±101.5**0.40±0.21**0.54±0.23**多尿期181475.6±346.8401.4±193.4**0.33±0.22*1097.9±183.6*0.32±0.18*1.07±0.49*正常對(duì)照組302024.5±373.51328.5±353.60.42±0.191198.3±355.60.28±0.111.65±0.68

注：與正常對(duì)照組比較， *P<0.05、 **P<0.01

臨床病型例數(shù)CD3+T細(xì)胞絕對(duì)值(個(gè)/μL)CD4+T細(xì)胞絕對(duì)值(個(gè)/μL)比率CD8+T細(xì)胞絕對(duì)值(個(gè)/μL)比率CD4+/CD8+輕型162035.6±352.71071.6±293.5 0.38±0.21*1085.6±289.4 0.32±0.20*1.10±0.33中型471786.1±513.5*829.7±271.4**0.25±0.15**975.3±225.9*0.37±0.18*0.71±0.20*重型221017.6±524.3**525.6±297.5**0.20±0.10**625.4±273.5**0.47±0.15**0.40±0.13**危重型3883.5±158.6**325.8±142.1**0.15±0.04**515.7±183.6**0.64±0.34**0.21±0.07**正常對(duì)照組302024.5±373.51328.5±353.60.42±0.191198.3±355.60.28±0.111.65±0.68

注：與正常對(duì)照組比較，*P<0.05、 **P<0.01

討論

HFRS是由漢坦病毒引起的自然疫源性疾病,屬于病毒性出血熱中的HFRS，嚴(yán)重危害人類身體健康，病死率為3%～5%[2]。我國(guó)是世界上受漢坦病毒危害最為嚴(yán)重的國(guó)家[3]。HFRS的發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明,多數(shù)研究資料提示該病的發(fā)生與病毒及機(jī)體的異常免疫反應(yīng)有關(guān)。本研究結(jié)果表明，HFRS患者T淋巴細(xì)胞亞群比例失調(diào)，CD4+T細(xì)胞絕對(duì)值及比率進(jìn)行性減少，CD8+T細(xì)胞比率相對(duì)升高，但絕對(duì)值減少(P<0.01)，與文獻(xiàn)報(bào)道[4-5]結(jié)果一致?；颊唧w內(nèi)存在免疫反應(yīng)紊亂,在出血熱發(fā)病期內(nèi)存在體液免疫和細(xì)胞免疫功能紊亂：(1)漢坦病毒感染后CD4+T細(xì)胞相對(duì)減少，并激活CD4+T細(xì)胞分泌Th2類細(xì)胞因子[白細(xì)胞介素6(interlenkin 6, IL-6)等[6]],從而促進(jìn)B細(xì)胞的活化和增殖，引起體液免疫功能亢進(jìn)及病理?yè)p傷：(2)病毒感染后CD8+T細(xì)胞增多,尤以發(fā)熱期和低血壓少尿期為甚，CD8+T細(xì)胞中的細(xì)胞毒性T細(xì)胞(cytotoxic T cell，CTL)直接作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞清除病毒,同時(shí)也破壞靶細(xì)胞造成免疫病理?yè)p傷,導(dǎo)致全身微小血管廣泛損害,組織臟器充血、水腫、出血[7],尤其是腎臟的損傷最為嚴(yán)重。

各種T淋巴細(xì)胞亞群的比例失調(diào)與該病病情嚴(yán)重程度密切相關(guān)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明，漢坦病毒感染可使CTL數(shù)量增多，活性增強(qiáng)，CD8+T細(xì)胞增加越多，病情越重，對(duì)機(jī)體造成的損害也越重。對(duì)患者T細(xì)胞(CD3+)及其亞群CD4+、CD8+T細(xì)胞的檢測(cè)及分析CD4+/CD8+比值可反映機(jī)體細(xì)胞免疫的功能。本研究應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)T淋巴細(xì)胞及其亞群發(fā)現(xiàn)，CD3+T細(xì)胞中的2類亞群CD4+和CD8+T細(xì)胞的變化正好相反，CD4+T細(xì)胞百分比在發(fā)熱期、低血壓少尿期呈進(jìn)行性降低，到低血壓少尿期時(shí)只有正常的1/2左右；CD8+T細(xì)胞在發(fā)熱期、低血壓少尿期呈進(jìn)行性升高,到低血壓少尿期時(shí)達(dá)到頂峰,進(jìn)而引起CD4+/CD8+比例減低甚至倒置。至多尿期淋巴細(xì)胞亞群各指標(biāo)開(kāi)始逐漸好轉(zhuǎn),但至恢復(fù)期仍未完全正常，表明HFRS患者有嚴(yán)重的細(xì)胞免疫功能紊亂。危重型患者CD3+T細(xì)胞的回升是以CD8+T細(xì)胞為主。CD4+T細(xì)胞百分比隨病型加重越來(lái)越低，而CD8+T細(xì)胞百分比顯著升高(P<0.01或P<0.05)，CD4+/CD8+比值越低，病情越重，提示HFRS患者病程中存在細(xì)胞免疫功能紊亂，特別是危重型患者細(xì)胞免疫功能嚴(yán)重紊亂，可能是致病情加重的原因之一。

綜上所述,淋巴細(xì)胞亞群在HFRS患者各病期均存在紊亂,與病程的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后有明顯的關(guān)系。因此外周血淋巴細(xì)胞亞群的檢測(cè)有助于HFRS的分期、治療和預(yù)后判斷。

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(本文編輯：姜敏)