曹廷生胡海軍莊讓笑潘旭旺陳 怡曹麗萍

復方川紫方提取工藝研究

曹廷生1胡海軍1莊讓笑2潘旭旺2陳 怡3曹麗萍3

復方川紫方；正交設計；提取工藝；阿魏酸；紫草素

復方川紫方是本院經驗方，由川芎、紫草、羌活等十余味藥組成，功能抗菌消炎、通絡止痛、行氣活血散瘀，臨床以油劑外敷，用于治療肩周炎、網球肘等，療效較好。其采用油炸古法制作，在有效成分提取、用藥安全等方面存在一定不足。為進一步提高產品質量，保證臨床應用安全有效、穩(wěn)定可控，我們采用正交設計對該復方的提取工藝進行考察，優(yōu)選最佳提取條件，為產品的生產工藝改進提供依據。

1 材 料

Agilent 1200高效液相色譜儀（美國安捷倫科技公司）；UV-2550型紫外-可見分光光度計（日本SHIMADZU公司）；FA2004型分析天平（上海精科天平）；98-1-c型數字控溫電熱套（天津市泰斯特儀器有限公司）；RE-2000A旋轉蒸發(fā)器（上海亞龍生化儀器廠）。實驗所用川芎（Chuanxiong Rhizoma，141109）、紫草（Arnebiae Radix，141120）、羌活（Notoptergh Rhizoma Et Radix，141222）等藥材均購自杭州華東中藥飲片有限公司，經杭州市西溪醫(yī)院潘旭旺主管中藥師鑒定均為《中國藥典》2010年版收載品種；對照品阿魏酸（批號110773-201313）由中國食品藥品檢定研究院提供，左旋紫草素（批號110769-200405）由中國藥品生物制品檢定所提供；甲醇、乙腈為色譜純，水為純化水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 測定方法建立

2.1.1 HPLC法測定阿魏酸 （1）色譜條件：ODSHypersil色譜柱（4.6mm×250mm，5μm），流動相3%冰醋酸：乙腈：甲醇（85：10：5），流速1.2mL/min，柱溫20℃，檢測波長320nm，進樣量20μL。（2）對照品溶液的制備：阿魏酸對照品經五氧化二磷真空干燥12h以上。精密稱取阿魏酸對照品0.00199g，至25mL量瓶中，用流動相溶解并定容，搖勻，即得。（3）供試樣品溶液制備：量取提取物濃縮液25mL，用乙醚1：1萃取3次，合并萃取液，回收乙醚，殘渣加流動相2mL溶解，18 000r/min，離心10min，取上清液1mL用流動相稀釋，并定容至10mL，搖勻，即得。（4）線性關系考察：精密吸取對照品溶液1、2、4、6mL至10mL容量瓶并定容，搖勻，分別進樣20μL，按上述色譜條件測定峰面積，以峰面積（A）對濃度（C，μg/mL）進行線性回歸，得回歸方程Y=52.31X-3.766.R2=1，線性范圍7.96～79.6μg/mL。（5）精密度和穩(wěn)定性考察：精密吸取濃度分別為7.96、31.84、79.6μg/mL的對照品溶液，連續(xù)進樣測定5次，考察日內精密度，峰面積的RSD均＜1.0%；冷藏，隔日連續(xù)測定5次，考察日間精密度，峰面積的RSD均＜1.0%；將樣品置于室溫條件下，隔日連續(xù)測定5次，考察穩(wěn)定性，峰面積的RSD均＜0.50%，表明該法精密度和穩(wěn)定性良好。

2.1.2 UV測定紫草素 （1）對照品溶液的配制：精密稱取左旋紫草素對照品0.00261mg，置50mL量瓶中，加無水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取1、2、4、6、8、10mL至10mL量瓶中，分別加無水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。（2）供試品溶液的配制：量取提取物濃縮液25mL，用石油醚1：1萃取3次，合并萃取液，回收石油醚，殘渣加無水乙醇4mL溶解，稀釋至一定濃度，作為供試品。（3）線性關系考察：UV于516nm檢測各濃度對照品吸光度，以吸光度（A）對濃度（C，μg/mL）進行線性回歸，得回歸方程Y=0.020X-0.006，R2=0.999，線性范圍5.22～41.76μg/ mL。

2.2 復方川紫方回流提取方法 按處方比例稱取藥材，于寬口圓底燒瓶中，加入一定濃度乙醇為提取溶媒，密閉浸泡0.5h，至電熱套中回流提取至規(guī)定時間。

2.3 正交實驗優(yōu)化工藝 根據文獻[1-2]，確定提取溶劑為乙醇，浸泡時間為0.5h，確定以下4個因素作為考察對象，即乙醇濃度（A）、料液比（B）、提取時間（C）、提取溫度（D），每個因素3個水平，根據正交設計原理，取L9（34）正交試驗表進行試驗，見表1。以紫草素（S1）和阿魏酸含量（S2）加權求和值S（S=S1+ S2）進行綜合評分，優(yōu)選最佳工藝條件，見表2。影響含量的主次順序分別為乙醇濃度（A）、料液比（B）、提取溫度（D）、提取時間（C），最佳制備工藝為A3B3C1D2，即90%乙醇，料液比1：12，提取時間1h，提取溫度60℃。

表1 因素水平表

表2 正交實驗方案及結果

2.4 最佳工藝驗證 為進一步考察最佳工藝的穩(wěn)定性及可靠性，按上述優(yōu)選的最佳工藝條件進行3次驗證實驗，結果見表3，表明該工藝穩(wěn)定可控，重復性好。

表3 驗證實驗結果

3 討 論

復方川紫方由十多味中藥組成，藥味多，有效成分較復雜。川芎和紫草是該復方君藥，其活血通絡、散瘀消斑主要有效成分為阿魏酸和紫草素，因此，在正交實驗中選擇阿魏酸和紫草素作為指標來優(yōu)化提取工藝。綜合兩個指標，能較好控制藥物成分的損失，提高工藝質量。

在優(yōu)化提取工藝時運用正交設計，該法根據正交性從全面試驗中挑選出部分有代表性的點進行試驗，實驗次數少，數據點分布均勻，結論的可靠性較好，在制藥工藝優(yōu)化方面得到廣泛應用[3-5]。

［1］黃國興，季芳，楊文丹.川芎中阿魏酸的提取工藝研究［J］.中國現代應用藥學，2007，24（3）：203-205.

［2］白研，宋粉云，毋福海，等.正交試驗優(yōu)選紫草提取工藝［J］.中藥新藥與臨床藥理，2006，17（4）：288-290.

［3］羅夫來，張云淋，趙致.正交設計優(yōu)化艾納香總黃酮提取工藝研究［J］.中華中醫(yī)藥學刊，2013，31（12）：2735-2737.

［4］潘旭旺，田靜，蔣小琴，等.茵柏顆粒的噴霧干燥工藝研究［J］.中草藥，2009，40（11）：1746-1749.

［5］段賢春，陳曦，汪永忠，等.正交設計法優(yōu)選蓯歸益腎膠囊提取工藝［J］.中草藥，2014，36（7）：1413-1417.

（收稿：2016-01-31 修回：2016-03-11）

杭州市衛(wèi)生科技計劃項目（No.2014D51）

1杭州市富陽區(qū)第二人民醫(yī)院骨傷科（杭州 311404）；2浙江中醫(yī)藥大學附屬杭州市西溪醫(yī)院制劑室（杭州310023）；3杭州市富陽區(qū)福光中草藥?？漆t(yī)院中醫(yī)科（杭州 311404）

潘旭旺，Tel：（0571）85463955；E-mail：pxuwang@163.com