癌性胸腹水中IL-2、IL-4、TNF-α細(xì)胞因子水平的分析研究

趙秘勝，夏雯麗，王海堅（溫州市人民醫(yī)院，浙江 溫州325000）

癌性胸腹水中IL-2、IL-4、TNF-α細(xì)胞因子水平的分析研究

趙秘勝，夏雯麗，王海堅
（溫州市人民醫(yī)院，浙江 溫州325000）

目的研究癌性胸腹水與胸腹水漏出液中細(xì)胞因子白細(xì)胞介素-2（IL-2）、白細(xì)胞介素-4（IL-4）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）的水平，以此探討腫瘤患者的機體免疫狀態(tài)。方法選擇50例癌性胸腹水和30例胸腹水漏出液，采用ELISA法測定細(xì)胞因子IL-2、IL-4水平，采用化學(xué)發(fā)光免疫分析法測定TNF-α水平。結(jié)果與胸腹水漏出液比較，癌性胸腹水中IL-4、IL-2、TNF-α水平升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01或P＜0.05）。結(jié)論癌性胸腹水與胸腹水漏出液中細(xì)胞因子IL-2、IL-4、TNF-α水平存在顯著性差異，對腫瘤患者機體內(nèi)的免疫狀態(tài)具有一定提示作用，為患者的治療提供參考。

IL-2；IL-4；TNF-α；癌性胸腹水；胸腹水漏出液

胸水和腹水是提示惡性腫瘤侵襲以及轉(zhuǎn)移的重要標(biāo)志。在癌性胸腹水中，除Th1及Th2異常升高外，單核-巨噬細(xì)胞的比例也較高，有的甚至占細(xì)胞總數(shù)的30%左右［1-2］。一般將TNF-α歸為單核-巨噬細(xì)胞型細(xì)胞因子，將IL-2、IL-4分別歸為Th1、Th2型細(xì)胞因子。當(dāng)機體Th1型細(xì)胞因子占優(yōu)勢時，機體正處于良好的抗腫瘤狀態(tài)；當(dāng)機體Th2型細(xì)胞因子占優(yōu)勢時，通過抑制干擾素-γ （IFN-γ）和自然殺傷細(xì)胞（NK細(xì)胞）的活化，從而抑制機體的抗腫瘤效應(yīng)。腫瘤患者體內(nèi)Th1/Th2平衡狀態(tài)已受到當(dāng)今國內(nèi)外專家學(xué)者的重視［3］，并有望成為預(yù)測腫瘤預(yù)后的重要指標(biāo)之一。本文通過對癌性胸腹水中IL-2、IL-4、TNF-α水平的檢測，以提示腫瘤患者機體內(nèi)的免疫狀態(tài)，為臨床治療提供更多信息。

1　資料與方法

1.1一般資料收集本院2011年7月～2015年7月的80例胸腹水患者，男64例，女16例，年齡24～91歲，平均（66.5±15.2）歲，按積液性質(zhì)分為兩組：（1）胸腹水漏出液組：30例，男25例，女5例，年齡45～91歲，平均（62.8±11.8）歲，其中21例肝硬化，9例心功能不全。胸腹水生化均符合Light標(biāo)準(zhǔn)、胸腹水常規(guī)檢查 （細(xì)胞數(shù)＜100×106/L，鏡檢未見異常細(xì)胞）、臨床表現(xiàn)及治療結(jié)果確診為漏出液；（2）癌性胸腹水組：50例，男39例，女11例，年齡24～87歲，平均（69.6±17.2）歲，其中肝癌5例，肺癌36例，卵巢惡性腫瘤7例，腹膜惡性腫瘤2例，全部經(jīng)病理組織活檢及胸腹水標(biāo)本中找到腫瘤細(xì)胞確診，標(biāo)本收集前均未作放療、化療治療。兩組性別、年齡構(gòu)成差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2方法

1.2.1儀器與試劑IL-2、IL-4試劑盒均由上海哈靈生物科技有限公司提供，TNF-α試劑盒由西門子醫(yī)學(xué)診斷產(chǎn)品有限公司提供，儀器為西門子化學(xué)發(fā)光免疫分析儀（Immulite 1000）。

1.2.2實驗方法入院后B超引導(dǎo)下胸腹水定位檢查，使用專用穿刺包和EDTA-K2抗凝的胸腹水專用管，經(jīng)胸腹腔穿刺術(shù)無菌抽取患者胸水或腹水約10mL，1500轉(zhuǎn)/min離心5分鐘，取上清液，按每次用量分裝后，置于-70℃低溫冰箱冷凍保存待測。采用ELISA法測定兩組IL-2、IL-4水平，操作步驟嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。在Immulite1000上使用化學(xué)發(fā)光免疫分析原理測定兩組TNF-α水平。

1.3統(tǒng)計學(xué)處理用SPSS18.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。計量資料以（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗。

2　結(jié)果

與胸腹水漏出液比較，癌性胸腹水中IL-4（t= 3.790，P=0.001）、IL-2（t=2.568，P=0.015）、TNF-α （t=2.592，P=0.016）水平升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，結(jié)果見表1。

表1　胸腹水中IL-2、IL-4、TNF-α濃度比較（x±s，pg/mL）

3　討論

IL-2是主要由Th1型細(xì)胞產(chǎn)生的具有廣泛生物活性的細(xì)胞因子，是T細(xì)胞亞群的生長因子，并可促進(jìn)活化B細(xì)胞的增殖，是調(diào)控機體免疫應(yīng)答的重要細(xì)胞因子；同時IL-2也可參與抗體反應(yīng)、造血以及腫瘤監(jiān)視［4］。體外實驗表明［5］，其抗腫瘤機理在于剌激、活化效應(yīng)細(xì)胞，對抑制腫瘤細(xì)胞的生長轉(zhuǎn)移具有一定作用。目前臨床上有用IL-2聯(lián)合化療藥物治療癌性胸腹水，取得了良好的療效。同時，腫瘤組織分泌Th2類細(xì)胞因子，機體處于Th2細(xì)胞占優(yōu)勢狀態(tài)是腫瘤免疫逃逸的機制之一，Th2細(xì)胞主要分泌IL-4、IL-10、IL-13，抑制細(xì)胞免疫的抗腫瘤效應(yīng)，其主要通過抑制NK細(xì)胞的活化和降低抗原提呈細(xì)胞的表達(dá)，從而導(dǎo)致機體抗腫瘤的免疫功能減弱，使腫瘤細(xì)胞逃逸免疫監(jiān)視以及免疫攻擊，來實現(xiàn)對腫瘤細(xì)胞的保護(hù)作用［6］。在癌性胸腹水中，除Th1及Th2型細(xì)胞異常升高外，單核-巨噬細(xì)胞的比例也較高，而TNF-α是一種主要由單核-巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的促炎性細(xì)胞因子，參與機體炎癥反應(yīng)和免疫反應(yīng)，是一種能夠直接殺傷腫瘤細(xì)胞并對正常細(xì)胞無明顯毒性的細(xì)胞因子，是迄今為止發(fā)現(xiàn)的直接殺傷腫瘤最強的生物活性因子之一。TNF-α通過與靶細(xì)胞膜上腫瘤壞死因子受體（TNFR）結(jié)合，以增強單核-巨噬細(xì)胞對腫瘤抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用（ADCC效應(yīng)），而達(dá)到抗腫瘤的目的。目前國內(nèi)有學(xué)者發(fā)現(xiàn)TNF-α能降低內(nèi)皮細(xì)胞膜鈣黏蛋白的表達(dá)和激活絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）的活性［7］，以達(dá)到增加血管內(nèi)皮細(xì)胞通透性的目的，這有利于TNF-α通過血管壁滲入胸腹腔內(nèi)，這些原因都有可能會導(dǎo)致癌癥患者胸腹水中TNF-α水平的增高。

本文對癌性胸腹水和胸腹水漏出液中部分細(xì)胞因子的水平進(jìn)行檢測，對腫瘤患者體內(nèi)的免疫狀態(tài)具有一定的提示作用。本文結(jié)果顯示，癌性胸腹水IL-2、IL-4、TNF-α水平高于胸腹水漏出液。其原因可能是由于腫瘤的刺激，使得機體內(nèi)Th1型細(xì)胞增多，分泌IL-2水平升高，以達(dá)到抗腫瘤的作用，但由于腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸作用，導(dǎo)致Th2型細(xì)胞異常增高，分泌IL-4水平升高，使得Th2類細(xì)胞占優(yōu)勢，在一定程度上抑制Th1類細(xì)胞，產(chǎn)生Th1/Th2漂移，使得腫瘤細(xì)胞通過這一機制而逃離宿主的免疫攻擊［8］。

綜上所述，檢測癌性胸腹水中 IL-2、IL-4、TNF-α細(xì)胞因子水平，有助于了解癌癥患者機體免疫狀態(tài)，且對臨床上使用細(xì)胞因子抗腫瘤治療提供一定依據(jù)。

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溫州市衛(wèi)生局科研基金資助項目（2011B025）