陳　敏, 王飛鵬, 黃響珠, 黃恩炯

(1.福建國際旅行衛(wèi)生保健中心，福建 福州 350001；2.福建農(nóng)林大學教育部生物農(nóng)藥與化學生物學重點實驗室，福建 福州 350002;3.三明出入境檢驗檢疫局，福建 三明 365000)

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5種常用殺蟲劑對尖喙庫蠓的毒性測定

陳敏1, 王飛鵬2, 黃響珠3, 黃恩炯1

(1.福建國際旅行衛(wèi)生保健中心，福建 福州 350001；2.福建農(nóng)林大學教育部生物農(nóng)藥與化學生物學重點實驗室，福建 福州 350002;3.三明出入境檢驗檢疫局，福建 三明 365000)

以野外采集的尖喙庫蠓成蟲為試驗對象，通過濾紙接觸法，測定了毒死蜱、敵敵畏、溴氰菊酯、高效氯氰菊酯和高氯·甲維鹽等5種常用殺蟲劑對尖喙庫蠓的毒殺效果.結(jié)果表明：5種殺蟲劑對蠓的毒性差異顯著，毒力大小依次為溴氰菊酯>毒死蜱>高效氯氰菊酯>高氯·甲維鹽>敵敵畏，試蟲接觸藥劑1 h的LC50分別為0.060、0.588、1.741、99.670和600.496 mg·L-1；試蟲經(jīng)藥劑處理1 h后在恢復(fù)筒觀察24 h，其在各種藥劑不同處理濃度下增加的死亡數(shù)不同；以溴氰菊酯為標準藥劑，其相對毒力指數(shù)最大.

尖喙庫蠓; 殺蟲劑; 毒力

尖喙庫蠓(Culicoidesoxystoma)是一種常見的吸血蠓，在我國各地廣泛分布，可傳播多種人獸共患疾病，其與原野庫蠓(C.homotomus)、日本庫蠓(C.nipponensis)在我國藍舌病疫區(qū)中的作用應(yīng)引起重視，予以重點防治[1].但目前有關(guān)吸血蠓對殺蟲劑的敏感性測定方法僅有少數(shù)報道[2-4]，尚無標準可依.本試驗采用濾紙接觸法，測定不同殺蟲劑對尖喙庫蠓的毒殺效果，探討不同殺蟲劑在其田間防治中的適用性，以期為蠓媒疾病的預(yù)防控制奠定理論基礎(chǔ).

1　材料與方法

1.1供試昆蟲

供試尖喙庫蠓于2014年6～8月采自福建省三明市寧化縣(N25°58′- 26°40′，E116°22′-117°02′)，宿主為耕牛和家豬.早晨(6:00-9:00)和黃昏(16:30-18:30)采用60目絹紗制成的口徑20 cm、深60 cm、末端鈍圓的圓錐形捕蟲網(wǎng)捕獲蠓蟲，將蠓蟲集中于網(wǎng)底后帶回室內(nèi)，供測定用.待生物測定結(jié)束后，將供試昆蟲保存于95%乙醇溶液中，進行形態(tài)及分子鑒定.試驗條件：溫度(26±1) ℃，相對濕度(RH)(60±5)%.

1.2試驗材料

器材：204.7 cm2(11.5 cm×17.8 cm)無菌濾紙若干張，無菌脫脂棉，量筒(100 mL)，刻度燒杯(100 mL)，移液槍及無菌槍頭(10、100、200、1 000 μL)，吸蟲管，定時器，計數(shù)器，藥劑接觸筒(圖1)，藥劑恢復(fù)筒(圖2).

試劑：選用近年來市面上應(yīng)用較為廣泛的毒死蜱(45%，華北制藥集團愛諾有限公司)、敵敵畏(80%，陜西皇牌作物科技有限公司)、溴氰菊酯[25 g·L-1，拜耳作物科學(中國)有限公司]、高效氯氰菊酯(4.5%，華北制藥集團愛諾有限公司)和高氯·甲維鹽(2%，廣西安泰化工有限責任公司)等5種殺蟲劑作為供試藥劑.其中，2%高氯·甲維鹽是由1.8%高效氯氰菊酯+0.2%甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽混配而成.

1.3毒力測定

因目前尚無蠓類對殺蟲劑敏感性程度的生物學測定相關(guān)規(guī)范，本試驗參照WHO[5]推薦的成蚊濾紙接觸法[6]進行測定.

1.3.1試驗藥紙的制備將殺蟲劑用蒸餾水稀釋成5～6個不同質(zhì)量濃度的工作液(表1).分別吸取2.04 mL供試藥劑均勻滴于不同的濾紙上，制備成約 0.01 mL·cm-2的藥劑接觸濾紙，并標明殺蟲劑種名及其質(zhì)量濃度.用無菌水制備對照濾紙.制成的接觸濾紙在室溫下自然晾干后即可使用，并在6 h內(nèi)使用完畢.

表1　供試殺蟲劑質(zhì)量濃度

1.3.2試蟲與藥紙的接觸試驗打開接觸筒螺紋蓋，將藥膜濾紙襯貼于筒中并將筒直立，紗網(wǎng)一端朝上為宜，用吸蟲管吸取試驗所需吸血蠓并從膜處小心移入接觸筒中.因蟲體微小，操作困難，每個接觸筒設(shè)(30±5)只試蟲，每個處理和空白對照重復(fù)3次.分別記錄各組首只蠓蟲被擊倒時間和20、40、60 min的死亡蟲數(shù)，分別測定同一質(zhì)量濃度不同時間和同一時間不同質(zhì)量濃度下蠓的死亡情況.

1.3.3恢復(fù)觀察試蟲接觸藥紙1 h后，將接觸筒內(nèi)的蠓蟲移至恢復(fù)筒內(nèi)，并在紗網(wǎng)一端放置一團浸有5%葡萄糖水的棉球，恢復(fù)飼養(yǎng)24 h后觀察蠓蟲死亡數(shù)，記錄和計算各處理組及對照組的蠓蟲死亡率.蟲體側(cè)躺或6足抽搐皺縮成團，用毛筆尖輕觸蠓腹部后，不能翻身或爬行者則判定為死亡.

1.4數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

1.4.1統(tǒng)計公式根據(jù)公式(1)計算各處理組的死亡率.

P1=M/N×100

(1)

式中：P1為試蟲死亡率/%，M為死亡蟲數(shù)，N為供試蟲數(shù).

若對照組死亡率<5%，處理組的死亡率無需校正；若對照組死亡率為5%～20%時，處理組的死亡率用Abbott公式[7]校正，求出校正死亡率；對照組死亡率超過20%時，則該組試驗作廢并重做.校正死亡率按照公式(2)計算.

P2=(P1-P0)/(1-P0)×100

(2)

式中：P2為校正死亡率/%；P1為處理死亡率；P0為對照死亡率.

1.4.2數(shù)據(jù)分析采用OriginLab 9.0分別繪制每種殺蟲劑的“濃度—首只蠓擊倒時間”圖，繪柱狀圖和折線圖比較試蟲接觸藥劑1 h至恢復(fù)24 h后的死亡率變化趨勢；通過SPSS 16.0單因素ANOVA分析各個處理的死亡率，對死亡總體情況做Prohit(概率單位回歸)模塊分析[8]，并計算毒力回歸方程、致死中濃度(LC50)、LC90、相關(guān)系數(shù)(R2)及95%置信區(qū)間(CI)，繪制不同藥劑濃度對數(shù)所對應(yīng)的概率單位曲線圖(LC-p)，通過比較95%置信區(qū)間下LC50、LC90的大小和是否重疊分析不同藥劑間的毒力差異.

1.4.3相對毒力指數(shù)計算以衛(wèi)生害蟲常用的殺蟲劑溴氰菊酯對蠓的LC50為標準，設(shè)相對毒力指數(shù)為100，與其他藥劑的LC50比較，用公式(3)計算相對毒力指數(shù).

I=D/K×100%

(3)

式中：I為相對毒力指數(shù)；D為溴氰菊酯的LC50；K為其他各藥劑的LC50.

2　結(jié)果與分析

2.1供試昆蟲

經(jīng)形態(tài)及分子鑒定，共捕獲2 891只試蟲，包含2屬5種蠓.其中，尖喙庫蠓占97.56%，日本庫蠓占1%，琉球庫蠓(C.actoni)占0.67%，撫須庫蠓(C.palfier)占0.67%，拜氏鋏蠓(F.bikanni)占0.1%.

2.25種殺蟲劑對蠓的室內(nèi)毒性

由于各種殺蟲劑的擊倒活性不同，導(dǎo)致首只試蟲的死亡時間不同.試驗表明：5種試劑在最高質(zhì)量濃度的擊倒時間順序為溴氰菊酯<敵敵畏<高效氯氰菊酯<高氯·甲維鹽<毒死蜱，提示溴氰菊酯對試蟲的擊倒活性最強，敵敵畏次之；而對于同一殺蟲劑，質(zhì)量濃度越高則擊倒活性越強(表2～6).

表2　不同質(zhì)量濃度毒死蜱在不同作用時間對蠓的毒力1)

1)同一質(zhì)量濃度不同作用時間、同一時間不同質(zhì)量濃度下的死亡率差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05).

表3　不同質(zhì)量濃度敵敵畏在不同作用時間對蠓的毒力1)

1)同一質(zhì)量濃度不同作用時間、同一時間不同質(zhì)量濃度下的死亡率差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05).

單因子方差分析表明，各個組分中P值均小于0.05(表2～6)，說明組內(nèi)重復(fù)性良好.就同一殺蟲劑而言，濃度與死亡率、作用時間呈現(xiàn)一定的梯度，同一濃度下死亡率隨作用時間的延長而上升，不同濃度間高濃度效果優(yōu)于低濃度；就不同殺蟲劑而言，各個殺蟲劑間防治效果不盡相同，藥效的持續(xù)時間也有區(qū)別，總體來說，溴氰菊酯效果較好，敵敵畏和高氯·甲維鹽效果較不理想.

表4　不同質(zhì)量濃度溴氰菊酯在不同作用時間對蠓的毒力1)

1)同一質(zhì)量濃度不同作用時間、同一時間不同質(zhì)量濃度下的死亡率差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05).

表5　不同質(zhì)量濃度高效氯氰菊酯在不同作用時間對蠓的毒力1)

1)同一質(zhì)量濃度不同作用時間、同一時間不同質(zhì)量濃度下的死亡率差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05).

表6　不同質(zhì)量濃度高氯·甲維鹽在不同作用時間對蠓的毒力1)

1)同一質(zhì)量濃度不同作用時間、同一時間不同質(zhì)量濃度下的死亡率差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05).

2.3試蟲接觸藥劑1 h至恢復(fù)24 h內(nèi)死亡率的變化

試驗結(jié)果表明：隨著質(zhì)量濃度的增大，毒死蜱和高氯·甲維鹽處理組中試蟲的死亡數(shù)量增多，且高濃度的死亡蟲數(shù)多于低濃度(表2、表6)；溴氰菊酯和高效氯氰菊酯擊倒性較強，試蟲在接觸最高濃度(分別為250和450 mg·L-1)藥劑1 h后已基本死亡，因此，恢復(fù)24 h內(nèi)試蟲死亡數(shù)增加不多(表4～5)；而敵敵畏質(zhì)量濃度為100 mg·L-1時試蟲死亡率的增量(4.49%)略高于200 mg·L-1時的死亡率增量(3.43%)，移至恢復(fù)筒后仍有蠓相繼死亡(表3)，這可能是由于試蟲對該藥劑的短期分解和代謝能力有限，殺蟲劑在體內(nèi)滯留積累.

2.4毒力測定回歸分析

從表7可以看出，回歸方程線性良好.LC50大小順序為溴氰菊酯<毒死蜱<高效氯氰菊酯<高氯·甲維鹽<敵敵畏；LC90大小順序與LC50一致；LC50下的相對毒力指數(shù)(I)大小順序為溴氰菊酯>毒死蜱>高效氯氰菊酯>高氯·甲維鹽>敵敵畏.可見，采用接觸濾紙法測定時，試蟲對溴氰菊酯最敏感.

表7　5種殺蟲劑對蠓成蟲的毒力回歸方程

3　討論

本試驗采用自制吸蟲管將蠓轉(zhuǎn)移至一定體積的接觸筒內(nèi)進行生測，減小了試驗操作對試蟲的傷害，有效減少了人為誤差，降低了試驗成本.飽血的雌蠓在生測中容易掉落，死亡率偏高，因此不宜用于生測[4]；而用吸蟲管從捕蟲網(wǎng)中吸取供試蠓蟲時便于肉眼觀察試蟲是否飽血，從而大大減少了飽血對生測結(jié)果的影響.但由于蠓體型微小，每次試驗的試蟲數(shù)量難以統(tǒng)一，只能控制在一個范圍內(nèi)，因此本試驗每個重復(fù)的試蟲數(shù)量為(30±5)只.

實驗室繼代飼養(yǎng)吸血蠓存在較大難度，卵和幼蟲也較難獲得，因此實驗室開展蠓對藥劑的敏感性測定時主要選用成蟲.而在田間試驗中，可采用施撒粉劑或顆粒劑的方式對蠓的孳生地進行處理以毒殺其蛹和幼蟲[9].目前，室內(nèi)測定的殺蟲劑中毒死蜱[10]和溴氰菊酯[2]可有效用于蠓的田間防治，而其他殺蟲劑在野外的適用性有待進一步驗證.

本研究嘗試從有機磷殺蟲劑(2種)、擬除蟲菊酯類殺蟲劑(2種)和混配殺蟲劑(1種)中篩選出有效的殺蠓藥劑.結(jié)果表明，常用衛(wèi)生殺蟲劑溴氰菊酯對蠓的防治效果最佳(LC50=0.060 mg·L-1)，毒死蜱次之(LC50=0.588 mg·L-1)，而敵敵畏的LC50高達600.496 mg·L-1，提示田間不宜選用敵敵畏對蠓進行防治；混配殺蟲劑高氯·甲維鹽的效果(LC50=99.670 mg·L-1)不及單配劑高效氯氰菊酯(LC50=1.741 mg·L-1)，這可能是由于高效氯氰菊酯是主要殺蟲成分，其在混配殺蟲劑中含量較低.殺蟲活性隨著質(zhì)量濃度的增大而增強，但當死亡率達到一定程度后隨著作用時間的延長，殺蟲活性有所降低.擬除蟲菊酯類殺蟲劑對蠓的毒殺活性優(yōu)于有機磷殺蟲劑，且更為環(huán)保、安全；但不同品種的擬除蟲菊酯類殺蟲劑活性存在差異，在控制使用劑量的情況下，溴氰菊酯可作為蠓類防治的首選藥劑.

在害蟲防治中，藥劑使用劑量越高，安全系數(shù)就越低.隨著害蟲對藥劑抗性的增強，盲目加大用藥量不僅增加防治成本，而且可能污染環(huán)境和傷害天敵.因此，在蠓類的防治中，只有正確選擇殺蟲劑，并采用合理的施藥方式(如輪用和混用)，才能取得最佳防治效果.

[1] 王飛鵬,黃恩炯,蔡亨忠,等.吸血蠓及其傳播的疾病[J].昆蟲知識,2010,47(6):1 270-1 273.

[2] DEL RIO R, BARCELO C, PAREDES-ESQUIVEL C, et al. Susceptibility ofCulicoidesspecies biting midges to deltamethrin-treated nets as determined under laboratory and field conditions in the Balearic Islands, Spain[J]. Medical and Veterinary Entomology, 2014,28(4):414-420.

[3] DEL RIO R, VENAIL R, CALVETE C, et al. Sensitivity ofCulicoidesobsoletus(Meigen) (Diptera: Ceratopogonidae) to deltamethrin determined by an adapted WHO standard susceptibility test[J]. Parasitology, 2014,141(4):542-546.

[4] VENAIL R, MATHIEU B, SETIER-RIO M L, et al. Laboratory and field-based tests of deltamethrin insecticides against adult culicoides biting midges[J]. Journal of Medical Entomology, 2011,48(2):351-357.

[5] WHO. Instructions for Determining the Susceptibility or Resistance of Adult Blackflies, Sandflies and Biting Midges to Insecticides: Mimeographed Document (WHO/VBC/81.810)[M]. Geneva, Switzerland: WHO, 1981.

[6] 中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局，中國國家標準化管理委員會.蚊類對殺蟲劑抗藥性的生物學測定方法：GB/T 29566-2013[S].北京:中國標準出版社,2013.

[7] 田素芬，顧曉軍，劉文靜，等.應(yīng)用葉片保護率評價阿維菌素對小菜蛾的毒力[J].中國農(nóng)學通報，2008,24(12):396-400.

[8] 賈春生.利用SPSS軟件計算殺蟲劑的LC50[J].昆蟲知識，2006,43(3)：414-417.

[9] 孟祥瑞,薛健,于曉敏.明斑庫蠓孳生習性的調(diào)查和防治效果[J].中國寄生蟲病防治雜志,1989,2(S1):88-89.

[10] WALL W J, MARGANIAN W M. Control ofCulicoidesmelleus(Coq.) (Diptera: Ceratopogonidae) with granular organophosphorus pesticides, and the direct effect on other fauna[J]. Mosquito News, 1971,31:209-214.

(責任編輯:楊郁霞)

Toxicity of 5 insecticides toCulicoidesoxystomaKieffer (Diptera: Ceratopogonidae)

CHEN Min1, WANG Feipeng2, HUANG Xiangzhu3, HUANG Enjiong1

(1.Fujian International Travel Healthcare Center, Fuzhou, Fujian 350001, China; 2.Key Laboratory of Biopesticide and Chemical Biology, Ministry of Education, Fujian Agriculture and Forestry University, Fuzhou, Fujian 350002,China; 3.Sanming Entry-Exit Inspection & Quarantine Bureau, Sanming, Fujian 365000, China)

Field-collectedCulicoidesoxystomawere exposed to different concentrations of commercial insecticides, including chlorpyrifos, DDVP, deltamethyrin, beta-cypermethrin and beta-cypermethrin·emamectin benzoate via filter paper method, so that the toxicity effects of different insecticides onC.oxystomawere determined. Results showed that toxicities varied significantly among insecticides. Biting midges were the most susceptible to deltamethyrin (0.060 mg·L-1), and followed by chlorpyrifos (0.588 mg·L-1), beta-cypermethrin (1.741 mg·L-1), beta-cypermethrin·emamectin benzoate (99.670 mg·L-1), DDVP (600.496 mg·L-1) in a descending order. After exposed to insecticides for 1 h, tested midges were transferred to recovery chamber and observed for another 24 hours, increased mortality within this period was different under the different concentrations of each insecticide. Relative toxicity index was maximal when using deltamethrin as standard reagent.

Culicoidesoxystoma; insecticide; toxicity

2015-10-14

2016-04-06

福建省科技重點項目(2014I0001)；國家質(zhì)檢總局科技計劃項目(2015IK036).

陳敏(1977-)，女，副主任醫(yī)師，碩士.研究方向：流行病學.Email：345868027@qq.com.通訊作者黃恩炯(1981-)，男，副主任技師.研究方向：媒介生物學及控制.Email：enjiong@163.com.

Q96

A

1671-5470(2016)03-0247-05

10.13323/j.cnki.j.fafu(nat.sci.).2016.03.002