鄺紅芳，陳鳳鳴，葉 梅，黃文莉河源龍川婦幼保健院，廣東 河源 517300

臨床研究

無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前基因檢測(cè)胎兒染色體非整倍體的臨床研究

鄺紅芳，陳鳳鳴，葉 梅，黃文莉
河源龍川婦幼保健院，廣東 河源 517300

目的 探討無(wú)創(chuàng)性產(chǎn)前基因檢測(cè)胎兒染色體非整倍體在臨床的應(yīng)用。方法 選擇2015年1～12月在我院產(chǎn)科門診就診的孕婦920例，先行無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前基因檢測(cè)（實(shí)驗(yàn)組），對(duì)于無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前基因檢測(cè)高風(fēng)險(xiǎn)和中等風(fēng)險(xiǎn)者再行羊水或臍血穿刺染色體核型分析（對(duì)照組）。兩組檢測(cè)結(jié)果為陰性的孕婦，出生后進(jìn)行隨訪，確定是否有無(wú)漏診。通過(guò)兩組陽(yáng)性結(jié)果的比較及出生后的觀察隨訪情況來(lái)衡量無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前基因檢測(cè)的檢查胎兒非整倍體疾病的準(zhǔn)確率，再來(lái)判斷其臨床應(yīng)用價(jià)值。結(jié)果實(shí)施無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前基因檢查920例，陽(yáng)性結(jié)果為5例，其中21三體綜合征為3例，18三體綜合征為1例，13三體綜合征為1例，陰性為915例；陽(yáng)性結(jié)果以羊水或臍血穿刺染色體核型分析的結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行結(jié)果對(duì)照，21三體綜合征有1例假陽(yáng)性，18三體綜合征與13三體綜合征無(wú)假陽(yáng)性。檢查結(jié)果陰性的孕婦，經(jīng)產(chǎn)后隨訪無(wú)漏診率。結(jié)論 無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前胎兒非整倍體基因檢測(cè)可提高產(chǎn)前診斷效率，減少患兒的出生。該項(xiàng)技術(shù)具有最佳檢測(cè)時(shí)間、無(wú)創(chuàng)取樣、無(wú)流產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)、高靈敏度及準(zhǔn)確度的特點(diǎn)，更適宜基層醫(yī)院開展。

關(guān)健詞：胎兒染色體；無(wú)創(chuàng)性基因檢測(cè)；臨床應(yīng)用

隨著我國(guó)經(jīng)濟(jì)快速發(fā)展，整體生活水平提高，人類正走向全力提高出生人口素質(zhì)方向，特別是開放單獨(dú)二胎政策以來(lái)，某些特殊情況，如高齡產(chǎn)婦逐年增加，各種原因?qū)е鲁錾毕菥痈卟幌隆Ｗ畛Ｒ?jiàn)的染色體畸形是胎兒染色體非整倍體病變，其中尤以21-三體綜合征（唐氏綜合征）最常見(jiàn)［1］。據(jù)調(diào)查全國(guó)累積有近三千萬(wàn)個(gè)家庭曾生育過(guò)缺陷患兒，對(duì)胎兒染色體異常的產(chǎn)前診斷可降低出生缺陷，所以推廣檢測(cè)胎兒染色體診斷迫在眉睫。目前研究人員推測(cè)染色體病發(fā)生頻率與染色體長(zhǎng)度及其基因數(shù)量有關(guān)，長(zhǎng)度越短、基因數(shù)目越少，染色體病發(fā)生機(jī)率越高，因此成功完成胚胎發(fā)育并順利進(jìn)行早孕期和中孕期的異常胎兒以21、18、13-三體較為常見(jiàn)?；純和ǔ６即嬖趯W(xué)習(xí)障礙、智能障礙或伴有臟器畸形等問(wèn)題。2015年1月我院開展了無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前胎兒非整倍體基因檢測(cè)，可提高產(chǎn)前診斷效率，減少患兒的出生，是快捷、安全、較介入性產(chǎn)前診斷易于接受、值得推廣的安全可靠的產(chǎn)前診斷方法，效果顯著現(xiàn)匯報(bào)如下。

1　資料與方法

1.1臨床資料

選擇2015年1～12月來(lái)我院產(chǎn)科門診就診并要求產(chǎn)前DNA檢測(cè)的孕婦920例，12～26孕周，單胎妊娠的人群。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）12～26孕周，單胎妊娠的人群；（2）高齡（大于35歲）；（3）唐氏血清學(xué)篩查結(jié)果為高、中度風(fēng)險(xiǎn)；（4）孕期B超胎兒NT值增高，軟指標(biāo)異常，超聲提示異常；（5）羊水穿刺培養(yǎng)失??；（6）不愿選擇穿刺或不適宜進(jìn)行有創(chuàng)產(chǎn)前診斷的孕婦；（7）自愿選擇進(jìn)行無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前檢測(cè)的孕婦。

1.2方法

抽取孕婦外周血5 mL，提取血液中游離DNA，通過(guò)胎兒染色體非整倍體無(wú)創(chuàng)基因檢測(cè)，結(jié)合生物信息學(xué)分析的方法，即可準(zhǔn)確判斷胎兒是否患唐氏綜合征（T21），愛(ài)德華氏綜合征（T18），帕陶氏綜合征（T13）3大染色體非整倍體疾病。T21檢出率可達(dá)99%以上，孕12周以上即可檢測(cè)，采血后10～12 d出報(bào)告。該技術(shù)安全性高，無(wú)創(chuàng)傷，無(wú)感染，無(wú)流產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)。對(duì)于無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前基因檢測(cè)高風(fēng)險(xiǎn)和中等風(fēng)險(xiǎn)者再行羊水或臍血穿刺染色體核型分析［2-4］。

2　結(jié)果

實(shí)施無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前基因檢查920例，陽(yáng)性結(jié)果為5例，其中21-三體綜合征為3例，18-三體綜合征為1例，13-三體綜合征為1例，陰性為915例；陽(yáng)性結(jié)果以羊水或臍血穿刺染色體核型分析的結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行結(jié)果對(duì)照，21三體綜合征有1例假陽(yáng)性，18三體綜合征與13三體綜合征無(wú)假陽(yáng)性。

3　討論

我國(guó)為出生缺陷的高發(fā)國(guó)家，降低出生缺陷，以預(yù)防為主。目前我國(guó)以產(chǎn)前血清學(xué)篩查、超聲檢測(cè)和產(chǎn)前診斷技術(shù)為主要預(yù)防手段，隨著母體外周血中游離DNA的發(fā)現(xiàn)和基因測(cè)序技術(shù)的發(fā)展，無(wú)創(chuàng)胎兒染色體非整倍體檢測(cè)技術(shù)集合了多項(xiàng)優(yōu)勢(shì)，為臨床提供新的技術(shù)支持，本研究對(duì)近年來(lái)無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前診斷國(guó)內(nèi)外發(fā)展?fàn)顩r進(jìn)行綜述，為進(jìn)一步臨床研究與應(yīng)用提供參考。目前對(duì)于該疾病的檢測(cè)主要是基于血清學(xué)和超聲診斷學(xué)檢查的無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前篩查和有創(chuàng)取樣的產(chǎn)前診斷，根據(jù)檢測(cè)結(jié)果對(duì)患胎采取選擇性流產(chǎn)的方法，以達(dá)到優(yōu)生優(yōu)育的目的。傳統(tǒng)產(chǎn)前篩查方法的假陽(yáng)性和假陰性比例均較高，且檢測(cè)時(shí)間有所限制，在有創(chuàng)取樣過(guò)程中存在一定的流產(chǎn)、致畸等風(fēng)險(xiǎn)，這使得目前的產(chǎn)前檢測(cè)方法的患者依從性較差，從而導(dǎo)致許多21、18、13-三體等非整倍體患兒出生。該項(xiàng)技術(shù)具有無(wú)創(chuàng)取樣、無(wú)流產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)、高靈敏度及準(zhǔn)確度的特點(diǎn)，更易被廣大孕婦接受檢測(cè)。

從以上研究結(jié)果可以表明無(wú)創(chuàng)性產(chǎn)前基因檢測(cè)胎兒染色體非整倍體在臨床的應(yīng)用是可行的適用于孕周在12～24周的孕婦進(jìn)行胎兒21、18、13等染色體非整倍體檢測(cè)。適應(yīng)癥：（1）所有希望進(jìn)行21、18、13-三體產(chǎn)前篩查的孕婦；（2）孕婦年齡達(dá)到35歲或以上的高齡孕婦，拒絕做羊水穿刺者；（3）孕早、中期血清篩查21、18、13-三體高危者；（4）早期超聲提示胎兒異常者；（5）有穿刺禁忌癥孕婦（胎盤前置、流產(chǎn)征兆、感染乙肝、HIV、TP等）；（6）IVF、習(xí)慣性流產(chǎn)及其他原因的“珍貴兒”。無(wú)創(chuàng)性產(chǎn)前篩查和診斷非整倍體疾病將是未來(lái)產(chǎn)前診斷的發(fā)展方向。1997年Lo等［5］在懷有男胎的母體血漿和血清中檢測(cè)到了性別決定區(qū)基因Y，證實(shí)了胎兒游離DNA存在于母體外周血中，從而為無(wú)創(chuàng)性產(chǎn)前診斷提供了一個(gè)可供選擇的胎兒遺傳物質(zhì)源［6］。胎兒染色體非整倍體無(wú)創(chuàng)基因檢測(cè)技術(shù)是以胎兒游離DNA為檢測(cè)原料。Guibert等［7］發(fā)現(xiàn)胎兒游離DNA可出現(xiàn)于胚胎檢查植入后18～37 d，其可懷孕早期即可檢測(cè)到，在分娩后，它將迅速?gòu)哪阁w中被清除掉，從而能成為妊娠的特異性標(biāo)志［8］。故運(yùn)用該技術(shù)，能更早發(fā)現(xiàn)胎兒異常，為早期流產(chǎn)手術(shù)做好準(zhǔn)備。且因該操作為無(wú)創(chuàng)技術(shù)，能有效減少對(duì)孕婦及胎兒造成的創(chuàng)傷的風(fēng)險(xiǎn)，從而降低孕婦的心理及精神負(fù)擔(dān)。

研究結(jié)果表明無(wú)創(chuàng)性產(chǎn)前基因檢測(cè)胎兒染色體非整倍體在臨床的應(yīng)用是可行的適用于孕周在12～24周的孕婦進(jìn)行胎兒21、18、13等染色體非整倍體檢測(cè)。更適宜在基層醫(yī)院開展。

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Clinical application of non-invasive prenatal gene detection for fetal chromosomal aneuploid

KUANG Kongfang，CHEN Fengming，YE Mei，HUANG Wenli
Longchuan Maternal and Child Health Care Hospital，Heyuan 517300，China

Objective To investigate the clinical application of non-invasive prenatal gene detection for fetal chromosomal aneuploidy.Methods We recruited 920 pregnant women who visited the Obstetrics Department of our hospital from January 2015 to December 2015.The experimental group were consisted of who received non-invasive prenatal gene detection.The control group were consisted of those who are determined as high-risk and medium-risk pregnant woman by non-invasive prenatal gene detection and received chromosome karyotype analysis of amniotic fluid and umbilical cord blood.Pregnant women whose test results were both negative were followed up after giving birth，in order to determine whether there is missed diagnosis.The Diagnostic accuracy and clinical application value of non-invasive prenatal gene detection for fetal chromosomal aneuploidy is determined by comparison of positive results in both group and the follow-up after birth.Results A total of 920 cases received non-invasive prenatal gene detection，5 positive results（3 cases of trisomy 21 syndrome，1 case of trisomy 18 syndrome，1 case of trisomy 13 syndrome）and 915 negative results.The results of chromosome karyotype analysis of amniotic fluid and umbilical cord blood as gold standard，comparison study were carried out.There was a false positive in trisomy 21 syndrome and no false positive in trisomy 18 syndrome and trisomy 13 syndrome.Follow-up study showed no missed diagnosis for negative results.Conclusion Non-invasive prenatal gene detection for fetal chromosomal aneuploid can improve the efficiency of prenatal diagnosis and reduce the birth of defective baby.The technology has characteristics of best detection time，non-invasive sampling，no abortion risk，high sensitivity and accuracy，which are more suitable for primary hospital.

fetal chromosome；non-invasive；gene detection；clinical application

2016-05-11

鄺紅芳，副主任醫(yī)師，E-mail:18028677813@163.com