姜朵生，吳獻(xiàn)群，吳 松,楊會(huì)生，陳 茜，鮑 成

(1.湖北省婦幼保健院,湖北 武漢 430070；2.湖北省中醫(yī)院，湖北 武漢 430061；3.湖北中醫(yī)藥大學(xué)針灸治未病湖北省協(xié)同創(chuàng)新中心，湖北 武漢 430061；4.中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院針灸研究所,北京 100700)

電針聯(lián)合補(bǔ)腎活血方對(duì)多囊卵巢大鼠圍著床期子宮內(nèi)膜組織形態(tài)學(xué)及ER、PR蛋白的影響*

姜朵生1，吳獻(xiàn)群2，吳 松3△,楊會(huì)生4，陳 茜3，鮑 成3

(1.湖北省婦幼保健院,湖北 武漢 430070；2.湖北省中醫(yī)院，湖北 武漢 430061；3.湖北中醫(yī)藥大學(xué)針灸治未病湖北省協(xié)同創(chuàng)新中心，湖北 武漢 430061；4.中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院針灸研究所,北京 100700)

目的：觀察電針聯(lián)合補(bǔ)腎活血方對(duì)多囊卵巢綜合征(PCOS)大鼠圍著床期子宮內(nèi)膜形態(tài)學(xué)及ER、PR蛋白的影響。方法：將70只大鼠分為正常組(G)、模型組(M)、克羅米芬組(CC)、克羅米芬+補(bǔ)佳樂組(CC+PVG)、克羅米芬+電針組(CC+A)、克羅米芬+補(bǔ)腎活血方組(CC+M)和克羅米芬+針?biāo)幗Y(jié)合組(CC+M+A)，每組10只。均于80日齡起進(jìn)行干預(yù)，連續(xù)治療5天。治療結(jié)束后，各組于下午6:00與雄鼠按2：1比例合籠,次日早8:00查陰道涂片,以發(fā)現(xiàn)精蟲者記為妊娠第1天(D1),于妊娠D4、D5下午4：00稱重。電鏡下觀察飽飲突，免疫組化檢測(cè)ER、PR蛋白。結(jié)果：子宮內(nèi)膜組織形態(tài)學(xué)上，CC+M+A組子宮內(nèi)膜發(fā)育分化程度最好；子宮內(nèi)膜成熟度及胞飲突情況比較：正常組與CC+M+A組之間無明顯差異(P>0.05),兩組與CC+A、CC+M組比較明顯升高，有統(tǒng)計(jì)意義(P<0.05)，與CC+PVG、模型組、CC組比較有顯著差異(P<0.01)。各組ER、PR免疫組化比較：正常組、CC+M+A組都有陽性表達(dá)，正常組與CC+M+A組之間無明顯差異(P>0.05),兩組與CC+A、CC+M、CC+PVG組比較明顯升高，有統(tǒng)計(jì)意義(P<0.05)，與模型組、CC組比較有顯著差異(P<0.01)。結(jié)論：在圍著床期，電針、補(bǔ)腎活血方結(jié)合克羅米芬治療多囊卵綜合征與正常子宮內(nèi)膜發(fā)育成熟度最好，這與該治療方法提高子宮內(nèi)膜上ER、PR蛋白表達(dá)有關(guān)。

電針；補(bǔ)腎活血方；PCOS;大鼠；圍著床期；ER、PR蛋白表達(dá)

目前體外受精胚胎移植技術(shù)雖然已經(jīng)很大程度上解決了不孕問題，但子宮內(nèi)膜容受性降低仍然是導(dǎo)致人工助孕失敗的主要原因。研究表明,發(fā)育良好的胚胎與其同步發(fā)育良好的子宮內(nèi)膜容受性是胚泡成功著床的關(guān)鍵[1-2]。著床是個(gè)高度協(xié)調(diào)的事件，子宮內(nèi)環(huán)境的研究也逐漸被生殖醫(yī)學(xué)界研究者所關(guān)注，目前子宮內(nèi)膜容受性相關(guān)的因子和蛋白也逐漸被重視和研究。有關(guān)影響子宮內(nèi)膜容受性的因素很多,其中包括子宮內(nèi)膜的厚度、形態(tài)、血供、局部的激素分泌、細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子等[3-4]。因此,研究如何改善子宮內(nèi)膜形態(tài),改善胚胎著床環(huán)境,提高子宮內(nèi)膜容受性,使子宮內(nèi)膜發(fā)育與胚胎發(fā)育同步化,以提高胚胎著床率就顯得尤為重要。本研究著重于妊娠D4、D5天，即圍著床期，觀察電針聯(lián)合補(bǔ)腎活血方對(duì)子宮內(nèi)膜容受性相關(guān)的子宮內(nèi)膜形態(tài)變化、胞飲突及ER、PR影響。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

所用實(shí)驗(yàn)大鼠均購(gòu)自于湖北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心，采用清潔級(jí)雌性SD大鼠70只[動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK(鄂)2008-0005]，21日齡，體質(zhì)量60～80 g左右，動(dòng)物喂養(yǎng)于標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物房，大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)3天開始實(shí)驗(yàn)。

1.2 分組與處理

幼年SD清潔雌性大鼠均在21日齡斷奶,喂以顆粒飼料,適應(yīng)性喂養(yǎng)3天。參照Lee MT等[5]的方法制作多囊卵巢綜合征(Polycystic ovary syndrome，PCOS)大鼠模型。實(shí)驗(yàn)組于24日齡皮下注射DHEA(武漢遠(yuǎn)城科技發(fā)展有限公司，批號(hào)：20100405)6 mg/100 g體重/天+0.2 ml注射用油(天津市北辰方正試劑廠，批號(hào)：201407),連續(xù)注射20天。正常組在同期皮下注射0.2 ml/天注射用油。分組：10只皮下注射油作為正常組(G)，造模成功的大鼠采用隨機(jī)數(shù)字表法分為模型組(M)、克羅米芬組(CC)、克羅米芬+補(bǔ)佳樂組(CC+PVG)、克羅米芬+電針組(CC+A)、克羅米芬+補(bǔ)腎活血方組(CC+M)、克羅米芬+針?biāo)幗Y(jié)合組(CC+M+A)，每組10只。處理：每組均于80日齡起進(jìn)行干預(yù)，連續(xù)治療5天；各組均于灌胃克羅米芬同時(shí)加補(bǔ)佳樂、電針、補(bǔ)腎活血方、針?biāo)幗Y(jié)合，聯(lián)合治療5天。

采用許文生氏人與動(dòng)物體表面積換算公式[6]，克羅米芬CC(枸櫞酸氯米芬膠囊，高特制藥有限公司，批號(hào)：H20040352)灌胃：10 mg/100 g，每只大鼠1 ml/100 g灌胃；補(bǔ)佳樂(戊酸雌二醇片，拜耳醫(yī)藥保健有限公司廣州分公司, 批號(hào)：J20130009)灌胃：補(bǔ)佳樂0.104 mg/kg,每只大鼠1 ml/100 g灌胃；中藥顆粒(中國(guó)深圳三九醫(yī)藥公司，批號(hào)：1405271S)灌胃：按1:1比例，將16.5 g溶入30 ml蒸餾水，每只大鼠1 ml/100 g灌胃，均連續(xù)灌胃5天。

中藥補(bǔ)腎活血顆粒組方：當(dāng)歸顆粒3 g/包(相當(dāng)于飲片10 g)、白芍顆粒1 g/包(相當(dāng)于飲片10 g)、熟地顆粒3 g/包(相當(dāng)于飲片10 g)、丹參顆粒1.5 g/包(相當(dāng)于飲片10 g)、山茱萸顆粒1 g/包(相當(dāng)于飲片6 g)、黃芪顆粒1 g/包(相當(dāng)于飲片10 g)、鹽杜仲顆粒1 g/包(相當(dāng)于飲片10 g)、桑寄生顆粒1 g/包(相當(dāng)于飲片15 g)、續(xù)斷顆粒1.5 g/包(相當(dāng)于飲片10 g)、菟絲子顆粒0.5 g/包(相當(dāng)于飲片10 g)、紫河車顆粒1 g/包(相當(dāng)于飲片3 g)、制香附顆粒1 g/包(相當(dāng)于飲片10 g)。均以標(biāo)準(zhǔn)包裝，每味藥1∶1比例相混合并加入適量的沸水，用攪拌機(jī)攪拌均勻，無菌沖劑密封并保存在4℃冰箱。

電針治療：大鼠穿自制鼠衣，選取關(guān)元、雙側(cè)三陰交、子宮穴,參照華興邦等[7]制定的《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物穴位圖譜》取穴,“關(guān)元”在臍下約25 mm處,“三陰交”在后肢內(nèi)踝尖上10 mm左右側(cè)各1穴，“子宮”在腹部前正中線，臍下約35 mm處(中極)，旁開25 mm左右側(cè)各1穴，使用0.30 mm×15 mm毫針針刺，針刺深度分別約 2 mm、5 mm，接HANS-200電針(北京華運(yùn)安特科技有限責(zé)任公司)治療，連續(xù)波，頻率2 Hz，強(qiáng)度1 mA，通電20 min，1次/天，治療5天。

5天治療結(jié)束后，各組于下午6:00與雄鼠按2：1比例合籠,次日早8:00查陰道涂片,以發(fā)現(xiàn)精蟲者記為妊娠第1天(D1),于妊娠D4、D5下午4：00稱重,腹腔注入3%戊巴比妥鈉(50 mg/kg)麻醉,腹部用75%酒精消毒后打開腹腔。摘取雙側(cè)子宮表面的脂肪組織,觀察子宮大體解剖情況，左側(cè)子宮固定于多聚甲醛中,作HE染色,用HIMAS-200高清晰彩色醫(yī)學(xué)圖文分析系統(tǒng)(武漢千屏技術(shù)有限公司)進(jìn)行定量分析，光鏡下觀察子宮內(nèi)膜形態(tài)及微血管密度，電鏡下觀察飽飲突。右側(cè)子宮刮取子宮內(nèi)膜于-80℃保存，采用SP免疫組化及Western blotting蛋白分析技術(shù)，測(cè)定大鼠子宮內(nèi)膜組織ER、PR蛋白表達(dá)。

1.3 主要試劑與儀器

脫氫表雄酮(湖北芳通藥業(yè), 批號(hào)：20120518)；中藥顆粒劑(三九制藥公司, 批號(hào)：1405271S)； ER兔抗大鼠多克隆抗體(北京博奧森生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：A0208)；PR兔抗大鼠多克隆抗體(美國(guó)Santa Cruze公司，批號(hào)：SC-11339)；Actin單克隆抗體(美國(guó)Santa Cruze公司，批號(hào)：SC-146)；HRP標(biāo)記山羊抗兔IgG(武漢飛羿科技有限公司，批號(hào)：KG13378)；HRP標(biāo)記兔抗山羊IgG(武漢飛羿科技有限公司，LA142254)。

1.4 指標(biāo)檢測(cè)

免疫組化檢測(cè)ER、PR的蛋白表達(dá)，用顯微照像系統(tǒng)拍照作記錄，采用HPIAS-1000高清晰彩色病理圖文分析系統(tǒng)進(jìn)行圖象分析，200倍鏡下檢測(cè)各片的平均積分光密度值。在日立S-3000N型掃描電子顯微鏡上觀察子宮內(nèi)膜上皮胞飲突。

1.5 統(tǒng)計(jì)方法

2 結(jié)果

2.1 各組妊娠D4、D5子宮內(nèi)膜成熟度比較

各組子宮內(nèi)膜成熟度情況比較：正常組與CC+M+A組之間無明顯差異(P>0.05),子宮內(nèi)膜成熟度均較高,但與CC+A、CC+M組比較明顯升高，有統(tǒng)計(jì)意義(P<0.05)，而與CC+PVG、模型組、CC組比較有顯著差異(P<0.01)；CC+M、CC+A兩組之間無明顯差異(P>0.05)，兩組與CC+PVG、CC、模型組比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；CC+PVG、CC、模型組3組比較，3組間子宮內(nèi)膜成熟度無明顯差異(P<0.05)；在發(fā)育不同步上，模型組明顯較其它幾組比例高，與正常組、CC+M+A組比較，有顯著差異(P<0.01)，與CC+M、CC+A組比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

2.2 妊娠D4、D5子宮內(nèi)膜組織的胞飲突變化

胞飲突是子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞膜頂端形成的大而平滑的突起，在電鏡下觀察胞飲突，胞飲突發(fā)育按Nikas等[8]制定的標(biāo)準(zhǔn)分為發(fā)育期、成熟期、衰退期3個(gè)發(fā)育階段。各組子宮胞飲突情況比較：正常組與CC+M+A組之間無明顯差異(P>0.05),子宮內(nèi)膜胞飲突發(fā)育完全較高,但與CC+A、CC+M組比較明顯升高，有統(tǒng)計(jì)意義(P<0.05)，而與CC+PVG、模型組、CC組比較有顯著差異(P<0.01)；CC+M、CC+A兩組之間無明顯差異(P>0.05)，兩組與CC+PVG、CC、模型組比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；CC+PVG、CC、模型組3組比較，3組間無明顯差異，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；在發(fā)育中期胞飲突上，模型組明顯較其它幾組比例高，與正常組、CC+M+A組比較，有顯著差異(P<0.01)，與CC+M、CC+A組比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表1 各組子宮內(nèi)膜成熟度比較

注:與正常組比較，*P<0.01,DP<0.05；與CC+M+A組比較,#P<0.01,CP<0.05;與CC+A組比較，▲P<0.05；與CC+M組比較，△P<0.05

表2 各組子宮內(nèi)膜胞飲突發(fā)育情況比較

注:與正常組比較，*P<0.01,DP<0.05；與CC+M+A組比較，#P<0.01,CP<0.05;與CC+A組比較，▲P<0.05；與CC+M組比較,△P<0.05

2.3 大鼠妊娠D4、D5子宮內(nèi)膜組織ER、PR免疫組化情況比較

見表3及圖1、圖2，將SP染色切片置于顯微鏡下觀察，陽性部位為棕黃色，根據(jù)光學(xué)顯微鏡觀察著色深淺，將結(jié)果分為:陰性(-)、弱陽性(+)、陽性(++)、強(qiáng)陽性(+++)。陰性(-)：細(xì)胞核和胞漿內(nèi)無棕色顆粒出現(xiàn)；弱陽性(+)：細(xì)胞核和胞漿內(nèi)有較淺的棕色顆粒；陽性(++)：細(xì)胞核和胞漿內(nèi)棕色顆粒清晰；強(qiáng)陽性(+++)：細(xì)胞核和胞漿內(nèi)有明顯的棕色顆粒出現(xiàn)。對(duì)于免疫組化標(biāo)本在相同的環(huán)境條件下，對(duì)免疫組化組織切片進(jìn)行計(jì)算機(jī)圖像分析，檢測(cè)各因子表達(dá)的平均光密度，以此來表示各因子表達(dá)的陽性率。

圖1 各組子宮內(nèi)膜組織ER免疫組化

圖2 各組子宮內(nèi)膜組織PR免疫組化

組別(n=10)ER表達(dá)強(qiáng)度PR表達(dá)強(qiáng)度-++++++-++++++正常組01270532模型組2224?▲#△○2351?▲#△○CC組3322?▲#△○2332?▲#△○CC+PVG組1234DC4312DCCC+M組1324DC3313DCCC+A組2224DC4222DCCC+M+A組11261342

注：與正常組比較，*P<0.01,DP<0.05；與CC+M+A組比較,#P<0.01,CP<0.05;與CC+PVG組比較，▲P<0.05；與CC+A組比較,△P<0.05;與CC+M組比較,○P<0.05

ER、PR表達(dá)主要在細(xì)胞核，ER、PR在正常組、CC+M+A組上都有陽性表達(dá)。ER在正常組中表達(dá)量(光密度值):0.80±0.13，CC+M+A組表達(dá)量(光密度值):0.76±0.11，二者間無明顯差異；兩組與CC+A組表達(dá)量(0.46±0.14)、CC+M組表達(dá)量(0.36±0.21)、CC+PVG組表達(dá)量(0.44±0.21)比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，3組間無明顯差異(P>0.05)；正常組、CC+M+A組與CC組表達(dá)量(0.27±0.22)、模型組表達(dá)量(0.26±0.31)比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

PR在內(nèi)膜上的表達(dá)多呈弱陽性，陽性顆粒表達(dá)位于腺細(xì)胞漿內(nèi)和核內(nèi)、間質(zhì)細(xì)胞膜上和核內(nèi)，呈棕黃色細(xì)胞顆粒。PR在正常組中表達(dá)量(光密度值):0.60±0.23，CC+M+A組表達(dá)量(光密度值):0.66±0.21，二者間無明顯差異；兩組與CC+A組表達(dá)量(0.36±0.24)、CC+M組表達(dá)量(0.36±0.31)、CC+PVG組表達(dá)量(0.34±0.23)比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，3組間無明顯差異(P>0.05)；正常組、CC+M+A組與CC組表達(dá)量(0.24±0.12)、模型組表達(dá)量(0.26±0.20)比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

3 討論

目前認(rèn)為子宮內(nèi)膜胚胎容受性反應(yīng)母體子宮內(nèi)膜對(duì)胚胎的接受能力,與著床過程密切相關(guān)。在正常的排卵月經(jīng)周期中,子宮內(nèi)膜僅在極短的時(shí)期內(nèi)允許胚胎著床,這一時(shí)期提示子宮內(nèi)膜容受性達(dá)到最高狀態(tài),稱之為“種植窗期”，在人類,這一時(shí)期通常在正常月經(jīng)周期第20～24天,即LH高峰后的第6～10天,僅持續(xù)24～48 h。有研究表明該種植窗期，也即圍著床期在小鼠是妊娠D3、D4天，而在大鼠其周期為在妊娠D4、D5天，此期子宮內(nèi)膜在形態(tài)、生化方面會(huì)產(chǎn)生一系列規(guī)律性變化,如有絲分裂減少、腺體分泌增加、間質(zhì)水腫及細(xì)胞因子含量改變等，均為胚胎著床作準(zhǔn)備,此期子宮內(nèi)膜表現(xiàn)出對(duì)胚泡最大的容受性[9-10]。

胞飲突是出現(xiàn)在子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞膜頂端上大而平滑的突起，大量研究證實(shí),胞飲突是子宮內(nèi)膜容受性的超微結(jié)構(gòu)標(biāo)志物，這種結(jié)構(gòu)只在自然周期第21天左右出現(xiàn),且僅持續(xù)24～48 h后消失，與子宮內(nèi)膜容受性有顯著的時(shí)空特異性，對(duì)子宮內(nèi)膜容受性有非常重要的作用。完全發(fā)育胞飲突形成是子宮內(nèi)膜容受性良好的形態(tài)學(xué)標(biāo)志,研究認(rèn)為子宮內(nèi)膜胞飲突的發(fā)育與其組織形態(tài)發(fā)育存在同步性。因此，對(duì)于子宮內(nèi)膜發(fā)育不良所導(dǎo)致多次移植失敗的患者,進(jìn)行胞飲突的發(fā)育情況檢查具有重要臨床價(jià)值[11-12]。雌、孕激素以及雌、孕激素受體是形成良好內(nèi)膜容受性的重要因素,其中任一因素表達(dá)失常將導(dǎo)致著床失敗[13-14]。雌激素啟動(dòng)子宮內(nèi)膜增殖反應(yīng)，通過與雌激素受體結(jié)合作用于子宮內(nèi)膜，而孕激素使增殖的子宮內(nèi)膜及時(shí)轉(zhuǎn)化為分泌型子宮內(nèi)膜, 使子宮內(nèi)膜由非黏附狀態(tài)進(jìn)入黏附狀態(tài),呈可容受狀態(tài),促進(jìn)蛻膜形成和發(fā)育,為胚泡成功著床提供良好的內(nèi)膜環(huán)境。

本實(shí)驗(yàn)旨在觀察妊娠D4、D5天圍著床期大鼠子宮內(nèi)膜容受性，在此期間，正常子宮內(nèi)膜容受性表現(xiàn)為ER蛋白的高表達(dá)，PR略有下調(diào)，胞飲突數(shù)量多，子宮內(nèi)膜發(fā)育良好，而PCOS模型組由于內(nèi)分泌的紊亂，其子宮內(nèi)膜容受性出現(xiàn)發(fā)育不同步、飽飲突數(shù)量減少的同時(shí)，各蛋白表達(dá)也出現(xiàn)低表達(dá)，CC促排卵后加劇了這種不同步和低表達(dá)。中醫(yī)理論認(rèn)為，PCOS發(fā)生主要是腎-天癸-沖任-胞宮之間相互調(diào)節(jié)失約，肝、脾、腎功能失調(diào)，導(dǎo)致痰濕瘀結(jié)胞宮，其中“腎虛血瘀”是發(fā)病的主要環(huán)節(jié)[15]。治療以“補(bǔ)腎活血”為法，補(bǔ)腎重在溫補(bǔ)腎陽。中藥補(bǔ)腎活血方組方：當(dāng)歸、白芍、熟地、丹參、山茱萸、黃芪、鹽杜仲、桑寄生、續(xù)斷、菟絲子、紫河車、制香附。四物湯去川芎作為基礎(chǔ)方，加補(bǔ)腎陰藥山茱萸；補(bǔ)腎陽藥鹽杜仲、菟絲子、桑寄生、續(xù)斷、紫河車“血肉有情之品”；補(bǔ)氣活血藥丹參、黃芪、制香附。此方補(bǔ)腎陽“于陰中求陽，陽得陰助而生化無窮”，同時(shí)配合補(bǔ)氣活血藥，整個(gè)方藥旨在為著床期提高黃體水平，補(bǔ)腎陽活血，一補(bǔ)一瀉，補(bǔ)中有疏。腎主生殖，能調(diào)控腎-天癸-沖任-胞宮生殖軸，腎氣強(qiáng)弱直接影響和調(diào)控胞宮；補(bǔ)氣活血能改善肝、脾、腎功能失調(diào)導(dǎo)致的痰、濕、瘀蘊(yùn)結(jié)胞宮，改善腎虛血瘀。電針選取“關(guān)元”“子宮”穴，關(guān)元穴是任脈要穴和小腸之募穴，且位居丹田，為元陰、元陽之氣閉藏之處，能補(bǔ)益一身先天之本，有培元固本、益腎填精、調(diào)理沖任之功。子宮穴和關(guān)元穴的傳入纖維與支配泌尿、生殖器官的傳入纖維重疊，婦科疾病首選子宮、關(guān)元穴[16]。因此針刺子宮、關(guān)元穴，能直達(dá)病所，改善子宮血流灌注，通過神經(jīng)纖維內(nèi)分泌調(diào)節(jié)改善內(nèi)分泌紊亂狀態(tài)。針刺選取三陰交，為肝脾腎三經(jīng)的交會(huì)穴,肝藏血、脾統(tǒng)血、腎藏精，精血同源互化，補(bǔ)腎活血,調(diào)整肝、脾、腎三臟及沖、任、督、帶等經(jīng)脈氣血失常[17]。

從實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，CC+M、CC+A、CC+M+A組明顯較模型組、CC組、CC+PVG組子宮內(nèi)膜容受性改善明顯，是通過提高子宮內(nèi)膜組織雌激素受體、孕激素受體表達(dá)而起作用。為此，各組采用補(bǔ)佳樂、補(bǔ)腎活血中藥、電針、針?biāo)幗Y(jié)合來改善CC促排卵后子宮內(nèi)膜容受性。本實(shí)驗(yàn)觀察到CC+M+A組較之于CC+M、CC+A、CC+PVG組比較，針?biāo)幝?lián)合治療效果更理想。這一有效作用可能是針?biāo)幗Y(jié)合通過上調(diào)子宮內(nèi)膜組織ER、PR蛋白水平來實(shí)現(xiàn)的。

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Effect of Electroacupuncture Combined with Bushen Huoxue Prescription on Polycystic Ovary Syndrome in Rats around the Time of Implantation of Endometrial Tissue Morphology and ER and PR Protein

JIANG Duo-sheng1,WU Xian-qun2,WU Song3△,YANG Hui-sheng4,CHEN Qian3,BAO Cheng3

(1.MaternalandChildHealthHospitalofHubeiProvince，Wuhan430070,China；2.ChineseMedicineHospitalofHubeiProvince,Wuhan430061,China；3.HubeiUniversityofChineseMedicine,HubeiProvincialCollaborativeInnovationCenterofPreventiveTreatmentbyAcupunctureandMoxibustion,Wuhan430061,China； 4.InstituteofAcupunctureandMoxibustion,ChineseAcademyofChineseMedicine,Beijing100700,China)

Objective：To observe the effect on the endometrial morphology and ER, PR protein around the time of implantation of PCOS rats by electroacupuncture combined with Bushen Huoxue prescription.Methods：Seventy SD rats were divided into normal group (g), model group (m), clomiphene citrate group (CC), CC+PGV group (CC+PVG), clomiphene citrate+EA group (CC+A), clomiphene plus Bushen Huoxue prescription group (CC+M), clomiphene citrate plus acupuncture combined with medicine group (CC+M+A),with each group of 10 rats. Intervention was performed on the 80th day of the age,with continuous treatment for five days. At the end of treatment,in each group the rats were in cage with male rats by 2∶1 ratio at 6 P.M. and check vaginal smear on the next day, and detect sperm which was marked as the first day of gestation (D1), weigh at 4 P.M. of D4 and D5. The ER and PR protein were detected by immunohistochemistry.Results：For the endometrial tissue morphology, endometrial maturity and pinocytosis by comparison,in CC+M+A group the endometrium got the best split growth; CC+M+A group and the normal group had no significant difference (P>0.05); compared with CC+A and CC + M groups, the two groups increased significantly with statistical significance (P<0.05); compared with CC+PVG of the model group and CC group, there were significant differences (P<0.01).Compared ER and PR in serum and endometrial hormone between groups, CC+M+A group and the normal group showed a positive expression and had no significant difference (P>0.05); compared with CC+A, CC+M and CC+PVG group, the two groups increased significantly with statistical significance (P<0.05), and compared with model group and CC group, there were significant differences (P<0.01).Conclusion：Normal endometrium development maturity is the best when electroacupuncture,Bushen Huoxue prescription combined with clomiphene are used for polycystic ovary syndrome around the time of implantation, which is related to the increase of endometrial ER and PR protein expression.

Electro-acupuncture;Bushen Huoxue prescription;PCOS;Rats;Around the time of implantation;ER,PR protein expression

湖北省婦幼保健院科研課題,編號(hào):220933013。

姜朵生(1983-)，女，主治醫(yī)師，主要從事針刺治療內(nèi)分泌與不孕癥疾病研究。

△通訊作者：吳松(1980-)，男，副教授，副主任醫(yī)師，主要從事針灸效應(yīng)的基礎(chǔ)及臨床研究。

R246.3

A

1005-0779(2017)02-0053-05

2016-07-15