赫曉宇

微生物實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)質(zhì)量控制結(jié)果分析

赫曉宇

目的：分析微生物實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)質(zhì)量控制結(jié)果，探討提高實(shí)驗(yàn)室技術(shù)水平和檢驗(yàn)?zāi)芰Φ姆椒?。方法分離和培養(yǎng)選定的盲樣菌種，在多種平板上進(jìn)行接種，同時(shí)進(jìn)行細(xì)菌生化鑒定生長(zhǎng)。選擇W0320a號(hào)TSI斜面菌苔，進(jìn)行沙門血清凝集試驗(yàn)；選擇W0320b號(hào)TSI斜面菌苔，進(jìn)行志賀菌凝集試驗(yàn)、致瀉大腸埃希菌凝集試驗(yàn)。結(jié)果質(zhì)控考核得出結(jié)果，分別為宋內(nèi)氏志賀菌、致病大腸埃希菌、鴨沙門菌、奇異變形桿菌等致病菌，將檢測(cè)結(jié)果上報(bào)到疾病預(yù)防控制中心微生物檢驗(yàn)所，證明結(jié)果正確。結(jié)論通過質(zhì)控考核，能夠檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)質(zhì)量控制情況，對(duì)檢驗(yàn)人員檢測(cè)水平進(jìn)行提升，確保取得滿足檢驗(yàn)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的數(shù)據(jù)。

微生物； 實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)； 質(zhì)量控制； 結(jié)果分析

在微生物質(zhì)量控制中，包括了實(shí)驗(yàn)室間質(zhì)量控制和實(shí)驗(yàn)室內(nèi)質(zhì)量控制。其中實(shí)驗(yàn)室間質(zhì)量控制能夠確保不同實(shí)驗(yàn)室之間，質(zhì)量水平一致，對(duì)實(shí)驗(yàn)室工作不足進(jìn)行發(fā)現(xiàn)，對(duì)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力進(jìn)行了解。實(shí)驗(yàn)室內(nèi)質(zhì)量控制能夠確保準(zhǔn)確的微生物檢驗(yàn)工作。衛(wèi)生行政部門根據(jù)質(zhì)量控制，對(duì)疾病預(yù)防控制方案進(jìn)行制定，將實(shí)驗(yàn)室技術(shù)支持提供給衛(wèi)生監(jiān)督部門，并且將科學(xué)、準(zhǔn)確、公正的依據(jù)提供給社會(huì)。因此，微生物實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)質(zhì)量控制結(jié)果，具有十分重要的意義和作用。

1 材料與方法

1.1 材料和試劑 質(zhì)控樣品采用疾病預(yù)防控制中心微生物檢驗(yàn)所提供的盲樣菌種W0320a，W0320b干粉。采用微生物試劑有限公司提供的細(xì)菌生化鑒定試劑、培養(yǎng)基。診斷血清分別選用30種沙門菌診斷血清、15種腸道致病性大腸埃希菌血清、50種志賀菌診斷血清。所有選用的材料及試劑均在有效期之內(nèi)。

1.2 方法

1.2.1 增菌 在無菌環(huán)境下，將盲樣打開，在營(yíng)養(yǎng)肉湯管中進(jìn)行接種，在37℃環(huán)境下進(jìn)行6 h培養(yǎng)，然后向增菌液中轉(zhuǎn)種。在37℃環(huán)境下，進(jìn)行18～24 h培養(yǎng)，然后進(jìn)行再分離培養(yǎng)，對(duì)增菌液的生長(zhǎng)情況進(jìn)行觀察[1]。W0320a，W0320b菌種分別在GN，SC，腸道增菌肉湯中，呈渾濁生長(zhǎng)，在營(yíng)養(yǎng)肉湯中，呈混濁生長(zhǎng)。

1.2.2 轉(zhuǎn)種 分別取一環(huán)增菌液，向BS，SS，麥康凱中轉(zhuǎn)入，在37℃環(huán)境下，在HE、營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板中進(jìn)行24h培養(yǎng)。在W0320a號(hào)SS，BS平板中，選擇待測(cè)菌落，向TSI中進(jìn)行轉(zhuǎn)種。在W0320b號(hào)SS，He平板中，選擇待測(cè)菌落，向TSI中進(jìn)行轉(zhuǎn)種。采用細(xì)菌生化鑒定法對(duì)W0320a，W0320b號(hào)進(jìn)行鑒定，在37℃環(huán)境下，進(jìn)行24 h的培養(yǎng)，然后對(duì)培養(yǎng)結(jié)果進(jìn)行觀察[2]。

1.2.3 血清學(xué)鑒定 采用沙門血清凝集試驗(yàn)對(duì)W0320a號(hào)TSI斜面菌苔進(jìn)行試驗(yàn)，采用志賀菌凝集試驗(yàn)、止瀉大腸埃細(xì)菌凝集試驗(yàn)對(duì)W0320b號(hào)TSI斜面菌苔進(jìn)行試驗(yàn)。

2 結(jié)果

在BS平板中，W0320a號(hào)菌落形態(tài)為黑色具有金屬光澤，在SS平板中，形態(tài)為中心黑點(diǎn)、半透明、圓形，在營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板中，形態(tài)為蔓延擴(kuò)散生長(zhǎng)。在SS平板、麥康凱中，W0320b號(hào)形態(tài)為無色、粗糙、扁平、乳黃色、中等大小、濕潤(rùn)光滑、邊緣整齊、凸起、半透明。在HE平板中，形態(tài)為藍(lán)綠色、中等大、半透明菌落，以及不透明黃色菌落。

在TSI中，W0320a動(dòng)力(+)、硫化氫(+)、底層A、斜面K，同時(shí)產(chǎn)氣。在細(xì)菌生化鑒定中，W0320a生長(zhǎng)情況為木膠糖(+)、側(cè)金花醇(-)、山梨醇(-)、鳥氨酸(+)、賴氨酸(-)、枸櫞酸鹽(+)、靛基質(zhì)(-)、甲基紅(+)等相同結(jié)果。同時(shí)存在尿素(+++/-)、葡萄酸鹽(+/-)、本丙酸銨(+/-)等不同結(jié)果。所以，在W0320a號(hào)質(zhì)控樣品中，具有2種致病菌。進(jìn)行進(jìn)一步細(xì)化鑒定，得出結(jié)果為沙門菌、奇異變形桿菌。

在TSI中，W0320b產(chǎn)氣(+/-)、動(dòng)力(+/-)、硫化氫(-/-)、底層(A/A)、斜面(A/K)。在細(xì)菌生化鑒定中，木膠糖(+/-)、山梨醇(+/-)，其余結(jié)果與W0320a相同。因此，在W0320b號(hào)質(zhì)控樣品中，具有2種致病菌。進(jìn)行進(jìn)一步細(xì)化鑒定，得出結(jié)果為志賀菌屬、大腸埃希菌屬。

采用沙門血清凝集試驗(yàn)對(duì)W0320a號(hào)TSI斜面菌苔進(jìn)行鑒定，得出結(jié)果O抗原鑒定，A-F多價(jià)O血清(+++)、O10因子血清(+++)、H抗原第Ⅰ相e，h(+++)、第Ⅱ相1，6(+++)、生理鹽水對(duì)照(-)，因此判定為鴨沙門菌。

采用志賀菌凝集試驗(yàn)鑒定W0320b號(hào)TSI斜面菌苔，得出結(jié)果為D群Ⅰ相(+++)、志賀菌多價(jià)(+++)、生理鹽水對(duì)照(-)，因此判定為宋內(nèi)氏志賀菌。采用大腸埃希菌凝集試驗(yàn)鑒定W0320b號(hào)TSI斜面菌苔，得出結(jié)果為，與大腸桿菌多價(jià)血清進(jìn)行凝集，同時(shí)與所含單價(jià)O111：K58(B4)進(jìn)行凝集，生理鹽水對(duì)照(-)，進(jìn)行定量凝集試驗(yàn)，O111：K58效價(jià)1：1280進(jìn)行凝集。生理鹽水對(duì)照(-)。與大腸埃希菌多價(jià)血清進(jìn)行凝集，同時(shí)與所含單價(jià)O111：K58(B4)進(jìn)行凝集，生理鹽水對(duì)照(-)，進(jìn)行定量凝集試驗(yàn)，O111：K58效價(jià)1∶1280進(jìn)行凝集。生理鹽水對(duì)照(-)。因此判定為致病大腸埃希菌。

3 討論

在微生物實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)質(zhì)量控制當(dāng)中，能夠取得準(zhǔn)確、真實(shí)的結(jié)果，與樣品保存采集、環(huán)境、設(shè)備等都具有密切的聯(lián)系。在實(shí)驗(yàn)室中，對(duì)于各個(gè)環(huán)節(jié)的質(zhì)量監(jiān)督、技術(shù)校核等，都應(yīng)當(dāng)加以重視[3]。同時(shí)對(duì)實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)范進(jìn)行完善，對(duì)質(zhì)量評(píng)價(jià)工作進(jìn)行強(qiáng)化，針對(duì)存在的問題和不足，要及時(shí)采取相應(yīng)措施加以糾正，確保實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)得到良好的控制和保證。

在樣品接受當(dāng)中，應(yīng)報(bào)以謹(jǐn)慎的態(tài)度，確保得到全面的樣品信息，保證樣品符合要求。在質(zhì)控活動(dòng)當(dāng)中，要進(jìn)行妥善的人員分配，對(duì)責(zé)任意識(shí)、技術(shù)要求進(jìn)行強(qiáng)化，使檢測(cè)人員的高疑似菌落識(shí)別技術(shù)、平板分離技術(shù)等進(jìn)行提升。對(duì)于常用的儀器設(shè)備，要進(jìn)行妥善的質(zhì)量管理，保證清潔的器皿，確保設(shè)備良好的運(yùn)行狀態(tài)及應(yīng)用性能[4]。在培養(yǎng)基質(zhì)量控制管理中，要嚴(yán)格遵循相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，防止試劑或培養(yǎng)基過期，使其保有良好的適用性。在培養(yǎng)基分配中，要少量多次，注重有效滅菌，保存環(huán)境也應(yīng)注重避光。在細(xì)菌鑒定當(dāng)中，進(jìn)行生化反應(yīng)，對(duì)特殊反應(yīng)過程進(jìn)行密切觀察，對(duì)其它相似菌進(jìn)行逐步排除，從而使分析多株細(xì)菌結(jié)果更加清晰明確，能夠有效的鑒定一些生化反應(yīng)獨(dú)特的細(xì)菌。如果細(xì)菌生化反應(yīng)不典型，可反復(fù)進(jìn)行試驗(yàn)。在培養(yǎng)、鑒定過程中，根據(jù)細(xì)菌情況和血清鑒定，對(duì)鑒定結(jié)果進(jìn)行綜合性的判斷[5]。經(jīng)本文研究表明，對(duì)兩組盲樣菌種進(jìn)行培養(yǎng)和鑒定，得到的結(jié)果均正確。

綜上所述，微生物實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)是一項(xiàng)十分重要的工作，通過檢驗(yàn)判斷和鑒定盲樣菌種，明確盲樣中包含細(xì)菌種類，從而為疾病的預(yù)防和控制提供充足的依據(jù)。微生物實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)質(zhì)量控制對(duì)于檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性至關(guān)重要，因此應(yīng)當(dāng)?shù)玫礁叩闹匾暋?/p>

[1] 劉緒剛.微生物實(shí)驗(yàn)室開展室間質(zhì)量控制結(jié)果評(píng)價(jià)研究[J].臨床醫(yī)藥文獻(xiàn)電子雜志,2014,1(7):1103,1106.

[2] 賈紅兵,李爽,鄢盛愷.醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可在臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域的實(shí)踐[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2011,29(4):339-342.

[3] 張維娜.微生物檢驗(yàn)標(biāo)本不合格原因分析及質(zhì)量控制對(duì)策探討[J]. 世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘,2015,11(74):199-200.

[4] 韓淑娥,孟芝君.臨床微生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)標(biāo)本不合格的原因分析及解決對(duì)策[J].山西醫(yī)藥雜志,2013,42(12):1433-1434.

[5] 官江明,劉濱璐,李成波.關(guān)于纖維檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制體系的探討[J].國(guó)際紡織導(dǎo)報(bào),2012(3):64,66,82.

河南省禹州市疾病預(yù)防控制中心 檢驗(yàn)科，461670

赫曉宇(1979-)，男，主管檢驗(yàn)師，大學(xué)。

10.14126/j.cnki.1008-7044.2017.06.016

R 446.5

A

1008-7044(2017)06-0673-02

2016-11-01)