牛長春，萬雅芳，李甜，廖璞

(重慶市人民醫(yī)院三院院區(qū)檢驗科/重慶市臨床檢驗中心，重慶 400014)

·臨床檢驗技術(shù)研究·

雙水平校準(zhǔn)糾正苦味酸法肌酐檢測偏移*

牛長春，萬雅芳，李甜，廖璞

(重慶市人民醫(yī)院三院院區(qū)檢驗科/重慶市臨床檢驗中心，重慶 400014)

目的通過臨床檢驗實驗室間質(zhì)量評價(室間質(zhì)評)分析苦味酸法檢測肌酐的偏移及校準(zhǔn)對偏移的影響。方法利用重慶市臨床檢驗室間質(zhì)評數(shù)據(jù)，開展冰凍混合人源血清(參考方法賦值)調(diào)查，分析苦味酸法與酶法肌酐檢測結(jié)果間的差異及偏移；用雙濃度水平冰凍混合人源血清(參考方法賦值)校準(zhǔn)常規(guī)檢測系統(tǒng)后檢測室間質(zhì)控品。結(jié)果2012年至2016年重慶市苦味酸法肌酐檢測實驗室數(shù)下降；苦味酸法實驗室穩(wěn)健均值與酶法存在差異，且差值與肌酐水平有相關(guān)性(r=0.774 6)；冰凍混合人源血清(參考方法賦值)調(diào)查及國家衛(wèi)計委臨床檢驗中心正確度驗證結(jié)果均顯示，苦味酸法肌酐在低濃度存在正偏移(最大達10.39%和13.31%)，且偏移與濃度相關(guān)(r=0.988 9)，而酶法肌酐的偏移較小(最大達1.04%和1.49%)；用冰凍混合人源血清校準(zhǔn)常規(guī)檢測系統(tǒng)后，苦味酸法肌酐檢測在低濃度的正偏移被抵消。結(jié)論苦味酸法肌酐檢測在低值范圍存在正偏移，雙濃度水平校準(zhǔn)可糾正此偏移。

校準(zhǔn)；雙濃度水平；肌酐；室間質(zhì)量評價

Abstract:ObjectiveTo evaluate the bias of creatinine testing by external quality assessment (EQA)and analyze the effects of calibration on the bias of tested values using Jaffe assay.MethodsThe EQA data from The Clinical Laboratory Centre of Chongqing City were utilized to investigate the frozen pooled-human serum in which the value of creatinine was determined by reference method. The differences between Jaffe assay and creatine oxidase method were analyzed and the bias was evaluated. After the routine measurement systems were calibrated using the frozen pooled-human sera with double levels, the EQA samples were tested.ResultsThe number of the laboratories using Jaffe method for creatinine measurement reduced significantly in Chongqing from 2012 to 2016. The robust average values of Jaffe assay were different from enzymatic assay significantly and the difference of the values were correlated with the concentration of creatinine (r=0.774 6). The results of the investigation using frozen pooled human serum and the trueness verification program of National Center for Clinical Laboratories indicated the positive bias of Jaffe assay was observed in low levels of creatinine with maximum of 10.39% and 13.31% and the bias correlated with the concentration of creatinine (r=0.988 9), by contrast the bias was low in enzymatic assay with maximum of 1.04% and 1.49% only. After the measurement systems were calibrated by frozen pooled human sera with double-levels, the positive bias of Jaffe assay in the low concentration of creatinine could be corrected.ConclusionThere may be a positive bias of Jaffe assay for the samples with low concentration of creatinine, which could be corrected by using the calibrators with double-levels.

Keywords: calibration; double-levels; creatinine; external quality assessment

雖然診斷腎病的新標(biāo)志物，如中性粒細胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運載蛋白、腎損傷分子1、半胱氨酸蛋白酶抑制劑C等[1-2]，越來越受關(guān)注，但肌酐(creatinine, Cr)作為傳統(tǒng)標(biāo)志物在腎病診斷中依然發(fā)揮重要作用，改善全球腎臟病預(yù)后組織(Kidney Disease Improving Global Outcomes，KDIGO)的腎臟疾病指南中[3]，肌酐是腎病診斷、分級的重要依據(jù)，腎小球濾過率、尿微量清蛋白和肌酐比率等指標(biāo)均基于肌酐濃度計算。肌酐檢測方法主要包括苦味酸法和酶法，雖然越來越多的實驗室使用酶法，但使用苦味酸法的實驗室依然占很大比例。據(jù)2016年國家衛(wèi)生和計劃生育委員會(以下簡稱“衛(wèi)計委”)臨床檢驗中心數(shù)據(jù)，苦味酸法檢測肌酐的實驗室占26.7%(598/2 237)。本研究通過室間質(zhì)量評價(室間質(zhì)評)分析苦味酸法檢測肌酐的偏移及校準(zhǔn)方式對偏移的影響。

1 材料與方法

1.1室間質(zhì)評冰凍血清樣品的制備 由重慶市人民醫(yī)院三院院區(qū)檢驗科留取檢測后血清，收集肌酐高、中、低水平血清，排除脂血、溶血和高膽紅素標(biāo)本，所有血清HIV、HCV和HBV均陰性。所收集血清分別混合后按每管1 mL分裝，-80 ℃保存。冰凍血清樣品用干冰保存并送國家衛(wèi)計委臨床檢驗中心參考實驗室賦值，方法為同位素稀釋質(zhì)譜法，各水平賦值濃度分別為：436、77、96、274、86 μmol/L。

1.2冰凍混合人源血清室間質(zhì)評調(diào)查 在重慶市范圍內(nèi)選擇44個試驗單位，儀器包括西門子、貝克曼、雅培、Roche、日立、東芝、邁瑞7種品牌9個型號，其中配套系統(tǒng)9家。使用1.1中所制備冰凍血清開展調(diào)查。國家衛(wèi)計委臨床檢驗中心2016年小分子正確度驗證計劃數(shù)據(jù)由國家衛(wèi)計委臨床檢驗中心生化室提供。

1.3雙水平冰凍混合人源血清校準(zhǔn)試驗

1.3.1檢測系統(tǒng)的選擇 選擇17個檢測系統(tǒng)(配套檢測系統(tǒng)7個，開放檢測系統(tǒng)10個)，儀器包括西門子、貝克曼、雅培、Roche、日立、邁瑞6種品牌8個型號，試劑包括原裝試劑及邁克、中生、美康等試劑，苦味酸法及酶法分別包括5個和12個檢測系統(tǒng)。

1.3.2冰凍混合人源血清制備及賦值 同1.1。各水平賦值分別為：95.8、582.3 μmol/L。

1.3.3校準(zhǔn)方式 雙濃度水平校準(zhǔn)。

1.3.4室間質(zhì)評物準(zhǔn)備及檢測 2016年重慶市臨床檢驗中心常規(guī)化學(xué)室間質(zhì)評品由英國朗道公司提供，均勻性和穩(wěn)定性評價均滿足要求。用3.0 mL蒸餾水或去離子水復(fù)溶后，室溫放置30 min，輕微混勻至完全溶解后取樣測定。檢測時樣品分為5份，每份檢測3次，計算均值(共15次檢測)。

1.4統(tǒng)計學(xué)分析 用ClinetEQA軟件統(tǒng)計室間質(zhì)評數(shù)據(jù)，統(tǒng)計方法依據(jù)《GB/T 28043 利用實驗室間比對進行能力驗證的統(tǒng)計方法》，苦味酸法及酶法肌酐檢測分組后數(shù)據(jù)采用穩(wěn)健分析[4]，獲得穩(wěn)健均值。用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件計算相關(guān)系數(shù)(r)。

2 結(jié)果

2.1重慶市肌酐檢測室間質(zhì)評檢測方法變化及結(jié)果比較 2012至2016年共開展室間質(zhì)評13次，苦味酸法由2012年的122個參加實驗室減少為91個實驗室，酶法參加實驗室數(shù)由136家增長為262家。在13次室間質(zhì)評的65個水平中，兩種方法穩(wěn)健均值相關(guān)性較好(r=0.999 2)，但存在較大差異，且差值與肌酐水平具有相關(guān)性(r=0.774 6)。

2.2冰凍人源血清調(diào)查的苦味酸法肌酐檢測的偏移 苦味酸法低濃度(77、86、96 μmol/L)均值高于參考方法賦值(偏移分別為10.39%、8.95%、8.13%)，高濃度均值偏移較小，偏移與濃度相關(guān)(r=0.988 9)；酶法分組的穩(wěn)健均值偏移較小(偏移分別為1.04%、-0.18%、-0.95%)。國家衛(wèi)計委臨床檢驗中心的數(shù)據(jù)(2016年小分子正確度驗證計劃)結(jié)果也顯示，苦味酸方法低值(57.1、120.5 μmol/L)處偏移分別達13.31%和12.95%，高值(558.3 μmol/L)偏移僅為-0.90%；酶法檢測各水平偏移均較小(偏移分別為-0.35%、1.49%、1.34%)。

2.3雙水平冰凍人源血清校準(zhǔn)后苦味酸法肌酐檢測的偏移 在低濃度處相對室間質(zhì)評穩(wěn)健均值，苦味酸法組均值明顯下降(降幅最大為10.67%)，各濃度下降程度與肌酐濃度相關(guān)(r=0.818 0)，即苦味酸法在低濃度的正偏移被糾正。酶法肌酐各濃度水平偏移變化均較小(-1.36%、0、0.07%、0.95%、0.84%)。

3 討論

臨床實驗室肌酐檢測準(zhǔn)確性對腎臟疾病患者的診斷、預(yù)后、監(jiān)測有重要的意義，目前腎小球濾過率估計值、尿液微量清蛋白和肌酐比率等計算項目在腎臟疾病診療中廣泛應(yīng)用，對肌酐檢測提出了更高要求。美國國家腎臟疾病教育計劃(National Kidney Disease Education Program，NKDEP)對肌酐提出的正確度要求為與參考方法間的偏移<4.4 μmol/L[5]。

臨床檢驗室間質(zhì)評可有效監(jiān)測一定區(qū)域內(nèi)肌酐檢測狀況，用室間質(zhì)評數(shù)據(jù)可評價和分析肌酐檢測準(zhǔn)確性。目前，雖然各臨床實驗室由于檢測性能[6-7]而選擇了酶法檢測肌酐，用苦味酸法的實驗室數(shù)明顯下降，但苦味酸法在重慶市及全國范圍內(nèi)仍占有一定比例，因此仍然需要關(guān)注苦味酸法檢測肌酐的質(zhì)量。近5年室間質(zhì)評結(jié)果顯示，苦味酸法與酶法檢測肌酐雖然相關(guān)性較好，但差值也比較明顯，且差值與肌酐濃度相關(guān)性明顯，出現(xiàn)此現(xiàn)象原因可能有二，一是校準(zhǔn)的差異，另一是由于質(zhì)控品互通性。

在室間質(zhì)評中，冰凍人源血清有較好的互通性[8-9]。為去除基質(zhì)效應(yīng)對結(jié)果的影響，我們用冰凍人源血清(參考方法賦值)進行了室間質(zhì)評，苦味酸法檢測肌酐在低值存在正偏移(最高達10.39%)，高值存在負偏移，酶法檢測肌酐與參考方法定值間差異較小(最高僅1.04%)。此結(jié)果與國家衛(wèi)計委臨床檢驗中心2016年小分子正確度驗證計劃一致，也與意大利室間質(zhì)評正確度評價中表現(xiàn)相似[10]：在70～90 μmol/L的肌酐范圍內(nèi)，包括貝克曼、西門子等10個檢測系統(tǒng)幾乎全部正偏移，5～7個檢測系統(tǒng)偏移超過9%，在160～175 μmol/L的肌酐范圍偏移明顯減小。因此，在排除基質(zhì)效應(yīng)對肌酐檢測方法間差異的影響后，我們認(rèn)為校準(zhǔn)可能是導(dǎo)致苦味酸肌酐在低值范圍處正偏倚的原因。

國內(nèi)體外診斷試劑生產(chǎn)商提供的校準(zhǔn)品大多僅一個濃度水平，而苦味酸法檢測肌酐0濃度處吸光度并非為零點，即使使用空白補償?shù)姆绞揭膊⒉荒芡耆鉀Q此問題[7]。不同體外診斷試劑生產(chǎn)商的校準(zhǔn)品存在基質(zhì)差異。在本研究中，我們使用冰凍人源血清(參考方法賦值)對檢測系統(tǒng)進行兩點校準(zhǔn)，以去除試劑空白對檢測的影響。冰凍血清經(jīng)參考方法定值后作為檢測系統(tǒng)校準(zhǔn)品，此種校準(zhǔn)方式可將正確度從參考方法傳遞到常規(guī)方法，由于校準(zhǔn)品具備較好的互通性，校準(zhǔn)品的定值不依賴于所使用的分析系統(tǒng)，且此賦值血清在溯源鏈中有較高的級別。國內(nèi)也曾報道該種校準(zhǔn)方式[11]。檢測系統(tǒng)被校準(zhǔn)后，多次檢測室間質(zhì)評物，結(jié)果顯示具備正偏移的室間質(zhì)評穩(wěn)健均值下降10.67%，苦味酸法檢測肌酐在低值范圍被糾正。因此，使用雙水平校準(zhǔn)品可以糾正低濃度的正偏倚。

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CorrectingbiasofcreatininetestingusingJaffeassaybydouble-levelscalibration

NIUChang-chun,WANYa-fang,LITian,LIAOPu

(DepartmentofLaboratoryMedicine,ChongqingGeneralHospital/TheClinicalLaboratoryCentreofChongqingCity,Chongqing400014,China)

R446

A

2017-04-12)

(本文編輯王海燕)

重慶市衛(wèi)生和計劃生育委員會重點項目(2015ZDXM023)；重慶市科學(xué)委員會項目(cstc2016jcyja0177)。

牛長春，1982年生，男，副主任技師，博士，主要從事臨床生化檢驗工作。

廖璞，主任技師，E-mail：liaopu2015@163.com。

10.13602/j.cnki.jcls.2017.09.04