食品非法添加劑蘇丹紅及其檢測方法研究進展

馬密霞　胡文祥

【摘 要】本文介紹了食品非添加劑蘇丹紅的結(jié)構(gòu)及危害，綜述了蘇丹紅的檢測方法，包括：液相色譜法、薄層色譜- 紫外可見分光光度測定方法、液相色譜-質(zhì)譜法、氣相色譜-質(zhì)譜法等方法。旨在引導人們正確理解食品添加劑與非添加劑與食品安全的關系，合理合法使用食品添加劑，維護食品安全。

【關鍵詞】蘇丹紅；檢測方法；食品添加劑

Advances in the Examination Methods of Food Illegal Additives and its Effect

MA Mi-xia1 HU Wen-xiang2

（1.Special Education College of Beijing Union University， Beijing 100075， Beijing China；

2.Capital Normal University，Beijing 100048， Beijing China）

【Abstract】This paper introduces the Structure of Sudan of food illegal additives and its potential danger to human body. Summarizes the detection method of Sudan. Including： liquid chromatography， the thin layer chromatography and the ultraviolet visible spectrophotometry， liquid chromatography-mass spectrometry， gas chromatography-mass spectrometry method. To guide people to the correct understanding of food additives and illegal additives and food safety， reasonable and legitimate use food additives， Maintain food safety.

【Key words】Sudan； Food additives； Detection methods

0 引言

蘇丹紅是一種人工合成的親脂性偶氮化合物， 屬于化工染料，被廣泛應用于各種產(chǎn)品中做著色劑，比如用于紡織品、紙張、皮革、汽油、食品、化妝品的增色或增光等。蘇丹紅不是食品添加劑，但部分食品商為了使食物外表更加光鮮美觀，在辣椒粉、腌制調(diào)料、鴨蛋、調(diào)料中添加蘇丹紅[1-2]。1995年歐盟（European Union ， EU）等國家禁止在食品中添加蘇丹紅；2005年2月， 英國食品標準署下令將亨氏、聯(lián)合利華等30家企業(yè)生產(chǎn)的可能含有蘇丹紅I號的400余種食品召回， 引發(fā)了全球的“蘇丹紅” 風暴[3-4]。從2005年，我國研究者對蘇丹紅的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)、應用以及檢測方法等方面進行更深入的研究。

1 蘇丹紅的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)

1.1 食品添加劑及非法添加劑概念

2011年4月20日我國發(fā)布了《食品添加劑使用衛(wèi)生標準》（GB 2760-2011），食品添加劑的定義為“為改善食品品質(zhì)和色、香、味，以及為防腐、保鮮和加工工藝的需要而加入食品中的人工合成或者天然物質(zhì)” [5]，食品添加劑只要使用品種、使用范圍和用量符合國家標準，就不會對人體健康造成損害。食品非法添加劑一般都是非食用物質(zhì)，對人體產(chǎn)生不同程度的毒害作用。一般認為不屬于傳統(tǒng)上認為是食品原料的，不屬于批準使用的新資源食品的，不屬于衛(wèi)生部門公布的食藥兩用或作為普通食品管理物質(zhì)的，未列入各國食品添加劑的和其他法律法規(guī)允許使用的物質(zhì)，都是非法添加劑[6]。蘇丹紅就屬于食品非法添加劑，是我國明令禁止添加在食品中的，也是世界上多數(shù)國家命令禁止添加到食品中的一種染料。

1.2 蘇丹紅的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)

蘇丹紅是一種人工合成的偶氮類、油溶性的化工染料。2005年，劉麗娜[7]等人就給出了蘇丹紅的結(jié)構(gòu)，包括蘇丹紅Ⅰ、蘇丹紅Ⅱ、蘇丹紅Ⅲ、蘇丹紅Ⅳ，描述了偶氮化合物的偶合及還原過程。以后人們相繼研究了和蘇丹紅同類別的偶氮類染料，包括蘇丹橙G、蘇丹紅G、蘇丹黑B、蘇丹紅7B等。

1.3 蘇丹紅的毒性研究

蘇丹紅具有的偶氮結(jié)構(gòu)，決定了它具有致癌性，具有致突變性、致癌性、致敏性、損傷性，還具有遺傳毒性，代謝產(chǎn)物毒性。短期內(nèi)大量食用Sudan，會直接引起死亡；長期攝入，會在體內(nèi)蓄積而對機體造成損傷或基因突變而致癌[8-9]。

1975年，國際癌癥研究機構(gòu)將蘇丹紅歸為動物致癌物。蘇丹紅對機體具有致癌、致突變、致氧化損傷、皮膚過敏等毒性作用已經(jīng)通過研究得到驗證[10]。

曾鐳[11]利用蘇丹紅Ⅰ處理蠶豆根尖，研究了不同濃度的蘇丹紅對蠶豆根尖細胞的遺傳毒性。用不同濃度的蘇丹紅Ⅰ處理蠶豆種子和催芽，結(jié)果蘇丹紅Ⅰ嚴重影響了蠶豆有絲分裂的正常發(fā)生，誘發(fā)DNA 分子斷裂，游離在細胞中而形成微核。蘇丹紅I能引起DNA鏈斷裂和染色體斷裂，產(chǎn)生遺傳毒性作用，使氧化性DNA損傷[12-13]。常重杰[14]以蘇丹紅Ⅲ為誘變劑，研究了其對泥鰍的急性毒性效應，在研究中，檢測出泥鰍染毒肝臟組織中的谷草轉(zhuǎn)氨酶（GOT） 和谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ GPT） 活性降低，表明蘇丹紅Ⅲ能嚴重影響泥鰍肝組織的功能。

蘇丹紅的代謝產(chǎn)物毒性，苯胺是SudanⅠ的代謝產(chǎn)物，苯胺是制造染料、橡膠促進劑及抗氧劑等的原料。研究發(fā)現(xiàn)，苯胺在體內(nèi)外均具有遺傳毒性。產(chǎn)蛋期的母雞[15]喂飼含蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的飼料，取其產(chǎn)下的蛋，分別制得蛋液樣品和全蛋液的凍干粉樣品；研究蛋液和全蛋液的凍干粉中蘇丹紅的降解，結(jié)果表明，蛋液中的降解明顯，降解率為83.5%～95.7%，但蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ在蛋粉基體中降解率僅為9.3%～22.3%。降解的蘇丹紅代謝產(chǎn)物可能會含有遺傳毒性的苯胺，未降解的蘇丹紅對機體本身就具有毒性。

動物實驗表明，蘇丹紅I能夠引起小鼠肺組織的損傷[16]，通過連續(xù)給小鼠胃灌蘇丹紅Ⅰ兩周，對比空白對照組進行研究，實驗進行過程中，實驗小鼠在食入蘇丹紅Ⅰ后，就出現(xiàn)了不同程度的中毒癥狀如精神萎靡不振、行動遲緩、被毛疏松無光澤，小便呈不同程度的紅色。兩周后實驗組小鼠解剖呈現(xiàn)肺泡隔增厚，肺組織損傷更嚴重。官佳懿[17]等人探討了蘇丹紅對小鼠肝臟和腎臟功能的影響。結(jié)果表明蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ致小鼠肝臟和腎組織不同程度的損傷。

2 蘇丹紅檢測技術

近年來，食品中蘇丹紅的檢測分析技術不斷發(fā)展，文獻報道的用于檢測蘇丹紅的方法有高效液相色譜法、薄層色譜法、酶聯(lián)免疫法、電化學傳感、化學發(fā)光法等[18-19]。

2.1 高效液相色譜法

文獻報道的用高效液相色譜法（ HPLC）檢測食品中蘇丹紅含量的研究較多。曹麗芬[20]用高效液相色譜法，檢測食品中的蘇丹紅。該方法樣品處理簡單、成本低，準確度和精密度高。劉瀚升[21]采用高效液相色譜法，定性定量同時測定熟肉制品中的十種工業(yè)染料，包括羅丹明B、蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、堿性橙2、21、22、酸性橙Ⅱ、紅2G等。結(jié)果在2.0～8.0μg /ml線性范圍內(nèi)，10種工業(yè)染料的回收率在82.7%～93.9%之間，該方法具有良好的穩(wěn)定性和重現(xiàn)性。

高效液相色譜法也常用于測定調(diào)味品中的蘇丹紅含量。王坤等人[22]用自制中性氧化鋁固相萃取小柱吸附辣椒油中的蘇丹紅染料，丙酮洗脫，用高效液相色譜-紫外檢測器測定。對市售10個辣椒油樣品進行了檢測。結(jié)果顯示測定的回收率高，穩(wěn)定性好。用高效液相色譜測定辣椒面中蘇丹紅染料，選合適波長和梯度洗脫比例，實驗結(jié)果滿意[23-24]。

2.2 薄層色譜法

利用薄層色譜—紫外可見分光光度法檢測食品中蘇丹紅的方法，操作簡單，方法精密度高， 靈敏度好，對儀器設備要求較低，是一種簡便可行的方法。蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的檢測波長分別在474nm，488nm，503nm，510nm處。利用該方法可以檢測葡萄酒樣品中SudanⅠ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ號的含量。樣品經(jīng)乙腈溶解， 超聲振蕩后萃取， 分離提純后用乙腈定容， 點樣、展層， 刮取與標準品同水平位置的樣品空白硅膠， 用乙腈溶解定容，測定樣品的吸光度， 計算蘇丹紅的含量[25]。用薄層色譜檢測山楂片中蘇丹紅的含量[26]，用正己烷： 丙酮： 乙酸乙酯（100： 6： 8）為展開劑，選擇合適的波長檢測樣品含量，建立標準工作曲線，測定并計算山楂片中的蘇丹紅含量。

李春香[27]采用薄層色譜法定量檢測，采用硅膠板將蘇丹紅與雜質(zhì)分離，選擇合適的色譜條件，測得濃度范圍在0.1～20.0μg /mL內(nèi)，線性關系良好。將該法應用于辣椒粉、辣椒油、番茄醬等中的蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ的檢測。其精密度高，準確度好。王躍群[28]采用薄層色譜法，檢測中成藥是否添加蘇丹紅。檢測結(jié)果10批樣品中檢出1批可能殘留有蘇丹紅Ⅰ、Ⅳ，1 批殘留有蘇丹紅Ⅳ。薄層色譜法分離度好、重現(xiàn)性強，操作簡便，薄層色譜和高效液相色譜檢測方法可用于血竭、龍血竭等樹脂類中成藥樣本制劑中殘留“蘇丹紅”的初步檢測。

2.3 酶聯(lián)免疫法

酶聯(lián)免疫分析（CLEIA）法檢測食品中蘇丹紅含量。匡華等人[29]制備了抗蘇丹紅Ⅰ號單抗，建立了用于檢測食品中蘇丹紅含量酶聯(lián)免疫方法。通過對蘇丹紅分子結(jié)構(gòu)進行改造，制備半抗原及人工抗原，免疫動物，制備了蘇丹紅特異性抗體。該抗體靈敏度為0.5μg/L。基于該抗體建立了簡介競爭性酶聯(lián)免疫法檢測辣椒醬最低檢測限（LOD）為27.64μg/kg，這種對蘇丹紅殘留酶聯(lián)免疫檢測技術，可初步用于蘇丹紅的實驗室分析[30]。

文獻報道[31]建立間接競爭化學發(fā)光酶聯(lián)免疫分析（CLEIA）法檢測食品中蘇丹紅Ⅰ殘留。通過優(yōu)化包被抗原中本抗原與載體物質(zhì)的量比、包被抗原質(zhì)量濃度、抗體稀釋比例，建立競爭抑制曲線。在線性范圍為0.156～5ng/mL時，最低檢測限為0.0789ng/mL，IC50為0.679ng/mL。將該方法與酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法進行比較，具有較高的靈敏度。

2.4 電化學方法

根據(jù)蘇丹紅Ⅰ對luminol-KIO4化學發(fā)光體系增強的作用，郭光美[32]采用靜態(tài)注射化學發(fā)光方法對食品中蘇丹紅Ⅰ的含量進行測定。結(jié)果表明，化學發(fā)光強度的增加值與蘇丹紅Ⅰ在0.005～0.20μg/m L的范圍內(nèi)呈良好的線性關系，檢出限為0.0017μg/m L。本方法準確度高、靈敏好，為食品中蘇丹紅Ⅰ的檢測提供了快速的分析方法。黃露[33]首次采用非水毛細管電泳法對兩種蘇丹紅染色劑-蘇丹紅I和II 進行了分離檢測?？疾炝穗娪窘橘|(zhì)、背景電解質(zhì)、SDS 濃度對分離的影響。實驗檢測到辣椒樣品中含有蘇丹紅II 濃度為3.040mg/g。

張劍德[34]采用預鍍法將Bi3+還原成金屬鉍固定在玻碳電極表面，制成穩(wěn)定的鉍膜修飾玻碳電極，利用循環(huán)伏安法、方波伏安法研究了蘇丹紅Ⅰ在該電極上的電化學行為。結(jié)果表明，在優(yōu)化的實驗條件下，在1.0×10-7～1.6×10-5mol/L范圍內(nèi)有良好的線性關系，實驗靈敏度高，為檢測蘇丹紅Ⅰ提供了一種安全有效的新方法。

鄧光輝[35]建立了毛細管電泳安培法測定蘇丹紅Ⅰ號的方法。考察了緩沖液種類、濃度和pH值等因素的影響。濃度與峰面積具有良好的線性關系。該方法成功應用于辣椒粉樣品的檢測，結(jié)果令人滿意。研究[36]采用高效毛細管電泳法同時分離及測定蘇丹紅Ⅰ和蘇丹紅Ⅱ。優(yōu)化選擇檢測波長、緩沖溶液種類、進樣時間等參數(shù)后進行分離測定。結(jié)果在最佳實驗條件下較好地實現(xiàn)了蘇丹紅Ⅰ和蘇丹紅Ⅱ 的基線分離及檢測。利用膠束電動毛細管電泳分析方法，胡江濤等人[37]建立了同時測定辣椒粉、辣椒油和辣椒醬中蘇丹紅Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ，G 的方法，樣品經(jīng)處理后進樣，提供了一種安全有效的方法。

核磁共振內(nèi)標法能夠快速、準確地測定蘇丹紅I對照品含量。耿巖玲[38]采用核磁共振儀，優(yōu)選條件是：氘代氯仿為溶劑，苯甲酸為內(nèi)標，25℃時，采集蘇丹紅I和苯甲酸混合物的核磁共振氫譜。結(jié)果表明，在沒有對照品的情況下，核磁共振內(nèi)標法可用于蘇丹紅I對照品的含量測定和質(zhì)量控制。

2.5 聯(lián)合檢測法

有些聯(lián)合檢測分析方法可以檢測不同類型的食品添加劑及非食品添加劑，包括液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法、凝膠滲透色譜凈化-高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法、超聲輔助分散乳液微萃取/高效液相色譜法、基質(zhì)固相分散-超快速液相色譜、固相萃取-二維高效液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用、氣相色譜-質(zhì)譜法[39]等方法。聯(lián)合檢測具有靈敏度高、定性準確和分析速度快等優(yōu)點。缺點是分析檢測操作繁瑣、設備昂貴，不能進行現(xiàn)場檢測。

用凝膠滲透色譜凈化-高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法，對食品中的蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、G、7B、蘇丹橙G、蘇丹黑B和奶油黃9種偶氮類工業(yè)染料進行檢測。結(jié)果表明，樣品提取液經(jīng)凝膠滲透色譜系統(tǒng)（ GPC） 凈化后，基質(zhì)干擾明顯降低，檢測靈敏度提高，且重現(xiàn)性好，能夠準確定量分析食品中的蘇丹紅Ⅰ等9種染料[40]。馬育松[41]采用凝膠滲透色譜凈化/高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定辣椒制品和肉制品中蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、、G、柑桔紅2號等11種染料。聯(lián)合應用高效液相色譜檢測蘇丹紅，靈敏度高、結(jié)果準確可靠，能夠提供檢測效率和準確性故應用廣泛。

3 結(jié)語

我國食品安全事件，原因是超范圍、超量食品添加劑或使用非食品添加劑造成的。因此，對于食品添加劑要加大宣傳力度，要求企業(yè)自律，正確使用食品添加劑，嚴禁在食品中使用非食品添加劑；加強檢測分析技術，建立檢測標準體系；增加懲罰力度，依法制裁違規(guī)使用食品添加劑的企業(yè)。使每個人合理使用食品添加劑，保證食品安全，維護人們身體健康。

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[責任編輯：朱麗娜]