皮炎洗劑提取液的藥效學(xué)研究

顧玉英??

摘要：目的確定皮炎洗劑提取液的抗炎、止癢、抑菌作用。方法觀察皮炎洗劑提取液對(duì)二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的作用；對(duì)大鼠蛋清性足跖腫脹的作用；對(duì)大鼠止癢作用的影響；以及采用試管連續(xù)稀釋法對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、綠膿桿菌、白色念珠菌和枯草桿菌進(jìn)行皮炎洗劑提取液的體外抑菌試驗(yàn)。結(jié)果皮炎洗劑提取液對(duì)對(duì)二甲苯所致小鼠耳廓腫脹和大鼠蛋清性足跖腫脹具有顯著抑制作用；對(duì)大鼠瘙癢模型具有顯著止癢作用；皮炎洗劑提取液對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、綠膿桿菌、白色念珠菌和枯草桿菌具有不同程度的抑菌，殺菌作用。結(jié)論皮炎洗劑提取液具有抗炎、止癢、抑菌作用。

關(guān)鍵詞：皮炎洗劑；抗炎；止癢；抑菌

中圖分類號(hào)：R2855文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：1007-2349（2017）05-0075-03

隨著環(huán)境污染與生活方式的改變，皮膚病發(fā)病率越來(lái)越高，嚴(yán)重影響著人類的生活質(zhì)量。作為有效的治療藥物，激素制劑雖有強(qiáng)大的抗炎、免疫抑制和抗增生作用，但其副作用所引發(fā)的皮膚損害急劇增加。傳統(tǒng)中藥制劑皮炎洗劑是昆山市中醫(yī)醫(yī)院自制制劑，經(jīng)過(guò)多年臨床實(shí)踐證明安全有效。皮炎洗劑由大黃、黃芩、黃連和苦參四味藥等量組成，具有燥濕止癢的功效，臨床上主要用于治療夏季皮炎、急性濕疹、濕熱、黃水癥等[1]。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)，研究皮炎洗劑提取液的抗炎止癢抑菌作用，為皮炎洗劑的劑型改造奠定基礎(chǔ)。

1材料

11動(dòng)物小鼠（體重20～24 g），SD大鼠（清潔級(jí)，體重180～200 g，許可證號(hào)：SCX2012-0001），均由浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院動(dòng)物中心提供。[HJ2.5mm]

12藥物與試劑皮炎洗劑提取液：用8倍量濃度為70%乙醇回流提取2次，每次2 h，然后濃縮制備皮炎洗劑提取液高劑量（濃度為02 g/mL），中劑量（01 g/mL），低劑量（005 g/mL）；婦膚康噴霧劑（100 mL，每撳01-015 mL，貴州榮發(fā)制藥有限公司，批號(hào)20120201）；100%二甲苯（購(gòu)自杭州華東醫(yī)藥公司，批號(hào)20090301）；10%新鮮蛋清（卵白蛋白，Worhtington產(chǎn)品，批號(hào)：P2c5516）；磷酸組織胺（上海麗珠東風(fēng)生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：0006058）；標(biāo)準(zhǔn)菌株金黃色葡萄球菌ATCC25923、大腸埃希菌ATCC25922、綠膿桿菌ATCC27853、白色念珠菌、枯草桿菌均由昆山市中醫(yī)醫(yī)院檢驗(yàn)科提供；培養(yǎng)基：普通肉湯培養(yǎng)基用前分裝于試管中，每管2 mL，115℃滅菌30 min，營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、沙氏瓊脂培養(yǎng)基，用前于115℃滅菌30 min。

2實(shí)驗(yàn)方法

21對(duì)二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的作用[2，3]取小鼠50只，隨機(jī)分為5組，每組10只。設(shè)模型對(duì)照組，婦膚康噴霧劑陽(yáng)性對(duì)照組，皮炎洗劑提取液高（濃度為02 g/mL）、中（濃度為01 g/mL）、低（濃度為005 g/mL）3個(gè)劑量組。實(shí)驗(yàn)當(dāng)日各組動(dòng)物雙側(cè)耳廓涂藥1次，每次1 mL，空白對(duì)照組涂以蒸餾水005 mL/20 g，1 h后各組以蒸餾水洗去藥液，用棉球擦凈；給小鼠右耳涂二甲苯005 mL/只，左耳作對(duì)照。15 min后斷頸處死動(dòng)物，在每鼠的左右兩耳相同部位分別用打孔器取一耳片進(jìn)行稱重，計(jì)算腫脹度，并求出腫脹抑制率（%）。

22對(duì)大鼠蛋清性足跖腫脹的作用[2，4]取SD大鼠50只，隨機(jī)分為5組，每組10只。設(shè)空白模型對(duì)照組，婦膚康噴霧劑陽(yáng)性對(duì)照組，皮炎洗劑提取液高（濃度為02 g/mL）、中（濃度為01 g/mL）、低（濃度為005 g/mL）3個(gè)劑量組，每次1 mL。實(shí)驗(yàn)當(dāng)日首先用自制容積測(cè)定裝置測(cè)定各組大鼠右后足正常體積，然后給各組涂藥，對(duì)照組涂等量蒸餾水。1 h后，各組右后足皮下注射10%新鮮蛋清005 mL/只。測(cè)定注射蛋清后1、2、4、6 h的右后足體積。致炎前后右后足體積的變化值為腫脹度，比較各組腫脹度的差異。

23對(duì)大鼠止癢作用的影響[5，6]取SD大鼠50只，隨機(jī)分為5組，每組10只。設(shè)模型對(duì)照組，婦膚康噴霧劑陽(yáng)性對(duì)照組，皮炎洗劑提取液高（濃度為02 g/mL）、中（濃度為01 g/mL）、低（濃度為005 g/mL）3個(gè)劑量組，每次1 mL。實(shí)驗(yàn)前24 h，給各組大鼠右后足背剃毛，涂藥1次，空白對(duì)照組涂以蒸餾水。實(shí)驗(yàn)當(dāng)日，用粗砂紙擦傷右后足剃毛處，面積1 cm2。局部再涂藥1次，10 min后開始在創(chuàng)面處滴001%磷酸組織胺005 mL/只，此后每隔3 min依002%，003%……遞增濃度，每次均為005 mL/只。直至大鼠回頭舔右后足時(shí)所給予的磷酸組織胺總量（μg）為致癢閾。記錄并比較各組的致癢閾。

24試管連續(xù)稀釋法體外抑菌試驗(yàn)[7]金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、枯草桿菌、大腸桿菌均于實(shí)驗(yàn)前從保存菌種斜面上沾取少量菌苔接種于10 mL營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，于37℃培養(yǎng)24 h，取出作原菌液，再用無(wú)菌生理鹽水稀釋，經(jīng)比濁儀判定菌量，配制成1×106 CFU/mL菌液。白色念珠菌于實(shí)驗(yàn)前從保存菌種斜面上沾取少量菌苔接種于10 mL真菌培養(yǎng)基中，于25℃培養(yǎng)72 h，取出作原菌液，再用無(wú)菌生理鹽水稀釋，經(jīng)比濁儀判定菌量，配制成1×105 CFU/ml菌液。

取裝有2 mL普通肉湯培養(yǎng)基12管，排列于試管架上，編號(hào)。然后以無(wú)菌操作法在第1管中加入皮炎洗劑提取液高劑量（濃度為02 g/mL）溶液2 mL，搖勻，吸取2 mL加入第2管中，搖勻，同法稀釋至第10支試管，棄去2 mL；以上各管均加入備妥的1×106 CFU/ml菌液或1×105 CFU/mL白色念珠菌液01 mL。第11管中只加入01 mL菌液作陽(yáng)性生長(zhǎng)對(duì)照管；第12管加入2 mL供試液后混勻，棄去2 mL不加菌液作陰性對(duì)照管。將加入金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、大腸桿菌、枯草桿菌的各管置于37℃培養(yǎng)24 h，將加入白色念珠菌的各管置于25℃培養(yǎng)48 h，觀察結(jié)果，確定最低抑菌濃度（MIC）。經(jīng)培養(yǎng)后無(wú)菌生長(zhǎng)的各管，用滅菌接種環(huán)沾取少許抹于營(yíng)養(yǎng)瓊脂或沙氏瓊脂平板上，37℃培養(yǎng)24 h（金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、大腸桿菌、枯草桿菌）或25℃培養(yǎng)72 h（白色念珠菌），觀察結(jié)果，確定最低殺菌濃度（MBC）。

25數(shù)據(jù)處理藥理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用（x[TX-*3/8]±s）表示，采用Students t-test進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。*P<005表示實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有顯著性差異，*[KG-*3]*P<001，表示實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有極顯著性差異。

3實(shí)驗(yàn)結(jié)果

31對(duì)二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的作用結(jié)果見表1。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明不同劑量的皮炎洗劑提取液對(duì)二甲苯致小鼠耳腫脹均有顯著抑制作用，且隨皮炎洗劑濃度的增加抑制作用也增大（P<005）。

32對(duì)大鼠蛋清性足跖腫脹的作用結(jié)果見表2。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明在不同時(shí)間段里皮炎洗劑提取液高、中劑量均能有效減輕蛋清所致大鼠足趾腫，以藥后6 h左右作用最強(qiáng)（P<005）。

33對(duì)大鼠止癢作用的影響結(jié)果見表3。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明不同劑量的皮炎洗劑提取液對(duì)瘙癢模型均有顯著止癢作用（P<001）。

34試管連續(xù)稀釋法體外抑菌試驗(yàn)結(jié)果見表4。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明皮炎洗劑提取液對(duì)金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、大腸桿菌、枯草桿菌、白色念珠菌具有抑殺作用。

4討論

炎癥是機(jī)體組織對(duì)局部損傷的反應(yīng)，是人類賴以生存的防御性和保護(hù)性反應(yīng)。在炎癥的早期，炎癥介質(zhì)刺激血管，使血管擴(kuò)張，血管內(nèi)皮間隙擴(kuò)大，血管壁通透性增加，血漿內(nèi)的液體、蛋白質(zhì)和白細(xì)胞等滲出到組織間隙，隨著滲出的增加，造成組織腫脹[3]。二甲苯致小鼠耳廓腫脹試驗(yàn)和蛋清致大鼠足跖腫脹試驗(yàn)是研究藥物抗炎作用的常用試驗(yàn)方法。不同劑量的皮炎洗劑提取液對(duì)二甲苯致小鼠耳腫脹均有顯著抑制作用（P<005）；不同時(shí)間段里高、中劑量皮炎洗劑提取液均能有效減輕蛋清所致大鼠足趾腫脹，給藥后6 h左右作用最強(qiáng)（P<005），表明皮炎洗劑提取液對(duì)炎癥早期血管通透性增高和水腫有明顯的抑制作用，為臨床應(yīng)用皮炎洗劑提供了試驗(yàn)依據(jù)。但其抗炎機(jī)制還需進(jìn)一步研究。

瘙癢是皮膚病中最常見和最痛苦的癥狀之一，組織胺是一種可以引起皮膚瘙癢的最常見介質(zhì)[8]。本研究用外源性組織胺誘導(dǎo)釋放內(nèi)源性組織胺建立動(dòng)物瘙癢模型。高、中、低劑量組的皮炎洗劑提取液對(duì)瘙癢模型均有顯著止癢作用（P<001），表明皮炎洗劑提取液有顯著的抗組織胺作用，為皮炎洗劑臨床治療皮膚病提供了理論基礎(chǔ)。

金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、綠膿桿菌、白色念珠菌和枯草桿菌是目前常見的4種病原菌。體外抑菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明皮炎洗劑提取液對(duì)這4種病原菌均有較強(qiáng)的抑殺作用，特別是對(duì)大腸埃希菌，在較低濃度即有抑殺作用。結(jié)果說(shuō)明皮炎洗劑提取液對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌、革蘭氏陰性、真菌均有抑殺作用，表示皮炎洗劑提取液具有廣譜抗菌作用，可以減少損傷皮膚的感染幾率。

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