吳 翠，馬玉翠，巢志茂(中國中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所，北京 100700)

【方藥研究】

龍眼肉理化指標(biāo)與兩類貯藏庫溫度積的動態(tài)分析?

吳 翠，馬玉翠，巢志茂△
(中國中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所，北京 100700)

目的: 探究簡易庫與冷藏庫中龍眼肉理化指標(biāo)的變化及其與溫度積的相關(guān)性。方法: 日光下觀察龍眼肉的外觀，烘干法測定水分，高效液相色譜(HPLC)法測定5-羥甲基糠醛(5-HMF)的含量。采用溫度積分析其對5-HMF含量的影響。結(jié)果: 簡易庫的溫度積呈緩急交替上升趨勢，冷藏庫的溫度積直線上升。簡易庫中的龍眼肉從3個月開始析出糖分并質(zhì)地變硬，冷藏庫中的龍眼肉出現(xiàn)輕度的黏軟現(xiàn)象，兩庫中龍眼肉的水分含量呈下降趨勢。龍眼肉在0月時5-HMF的含量為0.001031 mg·g-1，在之后的27個月內(nèi)，5-HMF含量均逐漸升高，且簡易庫中的含量值是冷藏庫對應(yīng)值的2.7～4.6倍。結(jié)論: 龍眼肉中5-HMF含量的升高與貯藏庫的溫度積變化趨勢具有一致性，首次提出溫度積的概念，用于分析中藥在貯藏環(huán)節(jié)中化學(xué)成分的變化規(guī)律。

龍眼；5-羥甲基糠醛；龍眼肉；貯藏；溫度積

龍眼肉為無患子科植物龍眼DimocarpuslonganLour.的假種皮，具有補益心脾、養(yǎng)血安神的功效，用于氣血不足、心悸怔忡、健忘失眠、血虛萎黃等癥[1]。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，龍眼肉具有抗腫瘤[2]、抗焦慮[3]、免疫調(diào)節(jié)[4]、抗自由基[5]等藥理活性。龍眼肉的主要化學(xué)成分有糖類[6]、黃酮類[7]、揮發(fā)性成分[8]、脂類[9]等。龍眼肉具有藥食同源的性質(zhì)，使用廣泛，但目前藥典只從性狀、鑒別等方面作了規(guī)定，缺少內(nèi)在質(zhì)量控制指標(biāo)。研究表明，新鮮龍眼肉中腐胺的含量在室溫貯藏中下降，但在低溫貯藏時先迅速下降后趨于穩(wěn)定；精胺及亞精胺的含量，室溫和低溫貯藏變化均不明顯[10]。目前對作為中藥使用干燥的龍眼肉研究報道較少。

本文將藥用龍眼肉置于簡易庫與冷藏庫中，觀察外觀、測定水分和5-羥甲基糠醛(5-HMF)含量，提出倉庫溫度積的概念，并分析溫度積與5-HMF的動態(tài)變化規(guī)律，為中藥龍眼肉的質(zhì)量評價提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試劑和儀器

Shimadzu LC-20AT型高效液相色譜儀(DGU-20A5型自動脫氣機，LC-20AT型泵，SPD-M20A型二極管陣列檢測器，SIL-20A型自動進(jìn)樣器，CTO-10ASvp柱溫箱，LC-solution色譜工作站)(日本島津公司)，XS105 Dual Range型電子分析天平(感量0.00 001 g，Mettler Toledo儀器系統(tǒng)有限公司)，OHAUS CP224C型電子天平(感量0.0 001 g，奧豪斯(上海)儀器有限公司)，單道可調(diào)量程移液器(艾本德(上海)國際貿(mào)易有限公司)，KQ-100E超聲波清洗器(100 W，40 kHz，昆山市超聲儀器有限公司)，JWS-A5溫濕度表(北京市亞光儀器有限責(zé)任公司)，高翔DL60冷風(fēng)機(浙江高翔工貿(mào)有限公司)，比澤爾5P系統(tǒng)壓縮機(比澤爾制冷技術(shù)(中國)有限公司)。5-HMF對照品(批號BCBF6127V，純度≥99%)購自美國Sigma-Aldrich公司，甲醇(色譜純)購自賽默飛世爾科技(中國)有限公司，水為娃哈哈純凈水，其他試劑均為分析純。

1.2 藥材

龍眼肉2013年秋天產(chǎn)于廣西，經(jīng)中國中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所巢志茂研究員鑒定為無患子科植物龍眼DimocarpuslonganLour.的干燥假種皮，樣本放置于該所的1016實驗室。

1.3 貯藏庫

簡易庫為中國中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所1016室隔出來的一部分，未做溫度和濕度的調(diào)節(jié)。冷藏庫為具有冷風(fēng)機控制系統(tǒng)的恒溫倉庫。

2014年7月11日將龍眼肉藥材置于白色塑料袋中，分別貯藏于簡易庫和冷藏庫中，作為0月的樣品。2014年10月31日、2015年4月30日、2015年10月31日、2016年4月30日、2016年10月31日從庫中取出樣品，作為第3、9、15、21、27個月的樣品。

1.4 溫濕度

圖1顯示，冷藏庫，保持3.5～5.0 ℃的恒溫，65%～75%相對濕度的恒濕環(huán)境。簡易庫每日記錄溫度和濕度，入庫之日起的日歷月作為0月，之后的每個日歷月作為1個月，實際貯藏28個月。

圖1 簡易庫與冷藏庫溫濕度記錄圖

圖2 簡易庫與冷藏庫溫度積及龍眼肉中5-HMF含量

1.5 溫度積

其中，Ti為簡易庫當(dāng)日上午10點時的溫度，Dm為每個月記錄的天數(shù)，Ta為冷藏庫的平均溫度即4.25 ℃，D為每個月的天數(shù)。圖2顯示，兩庫中0～27個月逐月的溫度積。

1.6 外觀觀察

表1顯示，從庫中取出樣品置于白色搪瓷盤中，于日光下觀察外觀。

1.7 水分測定

表1顯示，從庫中取出樣品粉碎過3號篩，按《中國藥典》規(guī)定的烘干法[11]測定水分。

1.8 5-HMF含量測定

1.8.1 色譜條件 圖3顯示，ODS色譜柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)，流動相為甲醇-水(5∶95，v/v)，流速1.0 mL·min-1，檢測波長284 nm，柱溫35 ℃，進(jìn)樣量10 μL。

表1 簡易庫與冷藏庫中龍眼肉的水分和5-HMF的含量

注：1、2.龍眼肉藥材批次

圖3 5-HMF對照品與供試品HPLC圖注：A.對照品；B.供試品；1.5-HMF

1.8.2 對照品溶液的制備 精密稱取5-HMF對照品3.97 mg置于10 mL棕色量瓶中，以80%甲醇溶解、定容，制成0.397 mg·mL-1的5-HMF對照品溶液。

1.8.3 供試品溶液的制備 取“1.7”項下的樣品1.0 g精密稱定，置于25 mL具塞錐形瓶中，精密加入80%甲醇溶液25 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理25 min放至室溫，再次稱定質(zhì)量，用80%甲醇補足減失的質(zhì)量，過濾取續(xù)濾液，過0.22 μm濾膜，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

1.8.4 方法學(xué)考察 ①線性關(guān)系考察:將對照品溶液用80%甲醇稀釋配成濃度為0.06352、0.0397、0.01985、0.00397、0.00006625、0.00 002 914 mg·mL-1的系列溶液，分別進(jìn)樣10 μL，按“1.8.1”的色譜條件測定峰面積。以進(jìn)樣量(mg)為橫坐標(biāo)，峰面積(mAU)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。線性方程為：y=6797937x+4341 (r2=0.9998),表明進(jìn)樣量在0.0002914-0.6 352 mg范圍內(nèi)，與峰面積線性關(guān)系良好；②精密度試驗:精密吸取對照品溶液，稀釋成0.00 397 mg·mL-1后，按“1.8.1”項下色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次，每次10 μL，測定5-HMF的峰面積，計算得RSD為0.21%(n=6)，表明儀器精密度良好。③重復(fù)性試驗:精密稱取同一供試品6份(簡易庫27個月樣品1)，按“1.8.3”項下制備供試品溶液，按“1.8.1”項下色譜條件進(jìn)樣測定，5-HMF平均含量為0.009 017 mg·mL-1，計算得RSD為2.29%(n=6)，表明本方法重復(fù)性良好；④穩(wěn)定性試驗:精密吸取同一供試品溶液(簡易庫27個月樣品1)，室溫放置，分別在0、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣分析，測定5-HMF峰面積，計算RSD為1.85%(n=6)，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好；⑤加樣回收率試驗:表2顯示，稱取同一供試品6份(簡易庫27個月樣品1)，每份約0.5 g精密稱定，分別精密加入稀釋的5-HMF對照品溶液(0.0 397 mg·mL-1)163 mL，按“1.8.3”項下制備供試品溶液，按“1.8.1”項下色譜條件測定5-HMF含量，計算平均回收率為98.53%，RSD為2.20%(n=6)；⑥檢測限與定量限:在“1.8.1”色譜條件下將對照品溶液逐漸稀釋，最終確定檢測限(S/N=3)為1.457×10-4mg，定量限(S/N=10)為3.312×10-4mg。

表2 龍眼肉中5-HMF的加樣回收率

1.8.5 樣品含量測定 表1顯示，各樣品按“1.8.3”項下制備供試品溶液，在“1.8.1”色譜條件下測定，用外標(biāo)一點法計算干品中5-HMF含量。

2 結(jié)果

2.1 貯藏庫溫濕度比較

圖1結(jié)果顯示，從2014年7月11日開始到2016年10月31日的28個月中，冷藏庫保持了恒溫恒濕狀態(tài)，溫度較低為3.5～5.0 ℃，濕度較高維持在65～75%RH。簡易庫經(jīng)過3個夏天2個冬天的過程，夏天的溫度和濕度均比冬天要高，溫度的最高值為42 ℃、最低值為15 ℃，濕度的最高值為74%RH、最低值為30%RH。

2.2 外觀比較

表1顯示，簡易庫中龍眼肉從第3個月開始，質(zhì)地變硬，表面有糖分析出。冷藏庫中龍眼肉質(zhì)地柔潤，表面無糖分析出，但有輕度的黏軟現(xiàn)象。龍眼肉色澤較深為棕褐色，在貯藏過程中未見明顯變化。

2.3 水分含量

簡易庫與冷藏庫各兩批龍眼肉中的水分含量比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，在0月時的水分高于藥典規(guī)定的15%。貯藏27個月后，簡易庫中水分下降了4.66%、4.86%，冷藏庫中下降3.98%、3.82%。

2.4 5-HMF含量

龍眼肉的5-HMF含量在0月時為0.001 031 mg·g-1，貯藏后均得到升高。第3個月時簡易庫與冷藏庫分別升高到0.005191、0.005173和0.001134、0.001 430 mg·g-1。貯藏到第27個月時，簡易庫樣品是0月時含量的10.0、10.1倍，冷藏庫則為3.8、3.2倍。簡易庫5-HMF的含量是冷藏庫對應(yīng)時間的2.7～4.6倍，同一庫中2批樣品之間5-HMF的含量基本一致。

2.5 溫度積對5-HMF含量變化的影響

圖2顯示，簡易庫與冷藏庫溫度積均隨著貯藏時間的延長而升高。簡易庫的溫度積受季節(jié)的影響，其升高呈急緩相間的變化。冷藏庫的溫度常年維持穩(wěn)定，其溫度積的升高呈直線累積。兩庫的龍眼肉中5-HMF的變化趨勢與兩庫的溫度積具對應(yīng)的一致性。

3 討論

牛膝、大棗、五味子、栝樓等中藥，隨著色澤的加深，5-HMF含量逐漸升高[12-15]。山萸肉隨著貯藏時間的延長相應(yīng)地產(chǎn)生色澤加深和5-HMF含量升高[16]。而龍眼肉隨著貯藏時間的延長，產(chǎn)生了5-HMF含量升高的現(xiàn)象，但未見色澤的加深，這種現(xiàn)象系首次報道。由于5-HMF的產(chǎn)生與美拉德反應(yīng)[17]的產(chǎn)生有關(guān)，該反應(yīng)又受到溫度的影響，這與本文中簡易庫產(chǎn)生更多的5-HMF現(xiàn)象一致。

通過HPLC的分析，首次說明龍眼肉中含有5-HMF，對其進(jìn)行含量測定，將有助于龍眼肉質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提高，對質(zhì)量控制具有參考意義的熱分析動力學(xué)中，采用了溫度積的概念[18]。溫度積也曾被用來評價不同季節(jié)鋪筑不同砂礫的抗裂性能[19]、不同季節(jié)鋪筑半剛性材料的力學(xué)性能[20]，對于與時間跨度有關(guān)的動態(tài)變化具有較好的評價意義。本文將溫度積的概念首次應(yīng)用于分析溫度對中藥在貯藏過程中化學(xué)成分變化的影響。

從外觀變化和5-HMF含量的升高考慮，我們建議龍眼肉的貯藏以低溫為好。

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Dynamic Analysis between Physic-chemical Indexes of Longan Arillus and Temperature-integral of Two Kinds of Warehouse

WU Cui, MA Yu-cui, CHAO Zhi-mao△
(InstituteofChineseMateriaMedica,ChinaAcademyofChineseMedicalSciences,Beijing100700,China)

Objective: To study the dynamic change between temperature-integral and physic-chemical indexes of Longan Arillus (dried arillus ofDimocarpuslonganLour.) stored in simple and cool warehouses. Methods: The properties of Longan Arillus were observed under sunlight. The water content was determined based on the drying method. The content of 5-hydroxymethylfurfural (5-HMF) was determined by HPLC method. The temperature-integral was used to analyze its effect on 5-HMF content. Results: The temperature-integral showed a fast and slow alternating increasing trend of simple warehouse and linear upward trend of cool warehouse. The white sugar powder and hard texture of Longan Arillus were appeared since the third month in simple warehouse. The slight soft and moist of Longan Arillus were appeared in cool warehouse. The water content of Longan Arillus was decreased in both warehouses. The 5-HMF content at the 0 month was 0.001031 mg·g-1and was gradually increasing in the succedent month with a range of 2.7～4.6 times in simple warehouse than in cool warehouse. Conclusion: The increase trend of 5-HMF content of Longan Arillus was consistent with the change trend of temperature-integral. The concept of temperature-integral was put forward and used to analyze the change of chemical composition in Chinese medicine during the storage link for the first time.

Dimocarpuslongan; 5-hydroxymethylfurfural; Longan Arillus; storage; temperature integral

中醫(yī)藥行業(yè)科研專項(201407005)-中藥材貯藏庫及配套技術(shù)

吳 翠(1993-),女,江蘇徐州人,醫(yī)學(xué)碩士,從事中藥材貯藏與包裝研究。

△通訊作者：巢志茂(1963-),男,江蘇常州人,研究員,醫(yī)學(xué)碩士,從事中藥材貯藏與包裝研究,Tel：13522705161，E-mail: chaozhimao@163.com。

R284.1

A

1006-3250(2017)08-1158-04

2017-03-28