鄭 麗

（貴陽中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，貴州 貴陽 550001）

?基礎(chǔ)研究?

養(yǎng)陰行血方對視網(wǎng)膜光損傷保護作用的動物實驗研究

鄭 麗

（貴陽中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，貴州 貴陽 550001）

目的觀察養(yǎng)陰行血方對大鼠視網(wǎng)膜光損傷的保護作用。方法 60只大鼠隨機分成三組，實驗周期均為1個月。結(jié)果 分別測試視網(wǎng)膜中NF-kB、NOS、Caspase-3的含量，養(yǎng)陰行血方組的含量低于其他兩組。結(jié)論 養(yǎng)陰行血方對視網(wǎng)膜光損傷具有保護作用。

視網(wǎng)膜光損傷；養(yǎng)陰行血方；大鼠

研究認(rèn)為只要光照時間足夠長，視網(wǎng)膜能被周圍的自然光及所有的光損傷。視網(wǎng)膜作為形成視覺、接受光能的關(guān)鍵部分，一旦光照強度及時間超過了它的承受范圍，就會對它造成光損傷。筆者通過動物實驗探索養(yǎng)陰行血方對視網(wǎng)膜光損傷的保護作用，現(xiàn)具體報到如下。

1 對象與方法

1.1 實驗動物

選取健康3月齡SD大鼠60只作為研究對象，將其根據(jù)隨機分組法分為A組為空白對照組、B組為模型對照組、C組為養(yǎng)陰行血方組，各20只。A組正常喂養(yǎng)，B、C組施行光照造模。

1.2 造模

參照Xie Z，Wu X，Gong Y[1]的方法進(jìn)行造模，將B、C組放入光照箱，光照12 h，再進(jìn)行暗適應(yīng)12 h，循環(huán)光照2周后開始藥物喂養(yǎng)并繼續(xù)光照。大鼠可在光照箱內(nèi)自由活動、飲水?dāng)z食。

1.3 實驗用藥與給藥途徑

實驗用藥：養(yǎng)陰行血方顆粒（白芍6 g、石斛10 g、茺蔚子6 g、決明子10 g、赤芍6 g、女貞子6 g）；給藥途徑：按成人與大鼠日劑量比例配成為2 mL的混懸液，一次性灌胃。A組：生理鹽水2 ml/d；B組：生理鹽水2 ml/d；C組：養(yǎng)陰行血方混濁液2 ml/d。

1.4 觀察指標(biāo)與測試方法

連續(xù)循環(huán)光照2周造模后給藥，給藥并繼續(xù)循環(huán)光照2周后，取其視網(wǎng)膜進(jìn)行免疫組化檢查。按照試劑盒的說明嚴(yán)格檢測視網(wǎng)膜標(biāo)本中NF-kB、NOS、Caspase-3的表達(dá)。測試方法：各組取視網(wǎng)膜數(shù)量應(yīng)相等。取出視網(wǎng)膜并在其中加入冰細(xì)胞裂解液，研磨約3 min至不見組織碎塊，冰浴10 min，4℃，15000 r/min，離心10 min，收集上清液-70℃凍存待用。各組取等量上清液根據(jù)各試劑盒對應(yīng)的說明書進(jìn)行仔細(xì)觀察并記錄。

2 結(jié) 果

各組通過多個獨立樣本非參數(shù)檢驗得知，三組中NF-kB、NOS、Caspase-3各不相同，且含量由少到多依次為A組、C組、B組。見表1。

表1 各組NF-kB、NOS、Caspase-3（RQ值）比較（±s）

表1 各組NF-kB、NOS、Caspase-3（RQ值）比較（±s）

組別 NF-KB NOS Capase-3空白對照組（A） 0.263±0.04 0.298±0.03 0.423±0.04模型組（B） 0.631±0.11 0.724±0.09 0.936±0.13養(yǎng)陰行血方組（C） 0.386±0.06 0.459±0.05 0.575±0.06

3 討 論

NF-kB：是一個多功能核轉(zhuǎn)錄因子，直接參與機體對炎癥和免疫反應(yīng)的調(diào)控，并參與新生血管的形成，因此說明它具有廣泛的生物學(xué)活性。NF-kB在某些病理過程中起關(guān)鍵作用如炎癥性視網(wǎng)膜疾病、視網(wǎng)膜光損傷、視網(wǎng)膜新生血管形成等。NOS：L-精氨酸被NOS催化發(fā)生氧化反應(yīng)生成L-胍氨酸和一氧化氮（NO）。其中NO可通過多種途徑（如依賴與非依賴 cGMP途徑）發(fā)揮其復(fù)雜的生理學(xué)功能。視網(wǎng)膜氧化損傷的重要原因之一是視網(wǎng)膜內(nèi)一氧化氮合成酶（NOS）被過度光照后其活性持續(xù)異常升高；同時它的升高與感光細(xì)胞退行性變性的發(fā)生關(guān)系密切。Caspase-3：Caspase又叫同源半胱氨酸蛋白酶，它是哺乳動物細(xì)胞凋亡程序中一類關(guān)鍵的酶。它能在天冬氨酸殘基后特異性地裂解靶蛋白。其底物在它們瀑布式活化后被降解，同時一系列細(xì)胞骨架蛋白及細(xì)胞修復(fù)酶等也被裂解，最終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡；然而Caspase級聯(lián)反應(yīng)中最關(guān)鍵的、被稱為凋亡步兵的效應(yīng)蛋白酶就是Caspase-3。RPE細(xì)胞光損傷后Caspase-3的表達(dá)能在使用重組人促紅細(xì)胞生成素后明顯減少；因此認(rèn)為Caspase-3的表達(dá)被抑制可能是rhEPO抗光損傷誘導(dǎo)的RPE細(xì)胞凋亡作用機制之一。結(jié)果表明：視網(wǎng)膜光損傷后視網(wǎng)膜中NF-kB、NOS、Caspase-3表達(dá)增強，養(yǎng)陰行血方對視網(wǎng)膜的保護機制可能與抑制了視網(wǎng)膜中NF-kB、NOS、Caspase-3的表達(dá)密切相關(guān)。

[1]Xie Z,Wu X,Gong Y,et al.Intraperitoneal injection of Ginkgo biloba extract enhances antioxidation ability of retina and protects photoreceptors after light induced retinal damage in rats.Curr Eye Res.2007,32(5):471-479

[2]王以饒,等.強光對鯔魚視網(wǎng)膜的光化學(xué)損傷的初步研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),Journal ofAnhui Agri.Sci.2008,36(9):3682-3684,3693

[3]金 晶.NF-kb的研究進(jìn)展[J].國際醫(yī)藥衛(wèi)生導(dǎo)報,2000,10(12):64-65.

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ISSN.2095-8242.2017.063.12294.01

劉欣悅