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      新型微生物源天然食品防腐劑的抑菌效果分析

      2018-01-17 00:52:45李智高毛永楊田金蘭大理州食品檢驗檢測院
      食品安全導(dǎo)刊 2018年36期
      關(guān)鍵詞:三角瓶溶菌酶鏈球菌

      □ 李智高 毛永楊 蘇 濤 田金蘭 大理州食品檢驗檢測院

      隨著食品工業(yè)的不斷發(fā)展以及人們對健康問題的重視,食品安全受到越來越多的關(guān)注[1]。當(dāng)前,在食品安全性要求越來越高的背景下,天然食品防腐劑成為研究重點(diǎn)。在天然食品防腐劑中,乳酸鏈球菌肽、溶菌酶是比較常見的三類。根據(jù)相關(guān)的報道,乳酸鏈球菌肽、溶菌酶的抑菌效果十分好,本實驗擬在符合GB 2760-2014規(guī)定的情況下,研究乳酸鏈球菌肽、溶菌酶的抑菌效果,為其應(yīng)用范圍的擴(kuò)大提供參考資料。大腸桿菌和金黃色葡萄球菌是導(dǎo)致食品污染的常見微生物,因而選擇這兩種菌為供試菌種。

      1 材料與方法

      1.1 材料

      乳酸鏈球菌肽、溶菌酶均購自安徽省某化學(xué)試劑廠,而大腸桿菌和金黃色葡萄球菌由某學(xué)院生命科學(xué)系提供。

      1.2 實驗方法

      1.2.1 試劑制備

      進(jìn)行試劑制備時,分別制備質(zhì)量濃度為0、2、5、10、30、50 g/L的乳酸鏈球菌肽、溶菌酶溶液備用。

      1.2.2 培養(yǎng)基制備

      根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基制備,高壓蒸汽滅菌備用。

      1.2.3 菌懸液制備

      在制備過程中,在無菌條件下,將大腸桿菌和金黃色葡萄球菌分別接種在2個試管斜面上,放置在溫度為37 ℃的培養(yǎng)箱中進(jìn)行活化培養(yǎng),時間為24 h。將活化培養(yǎng)完成的大腸桿菌和金黃色葡萄球菌使用2 mL、0.85%氯化鈉溶液進(jìn)行洗脫,并將洗脫液分別倒入包含一定量液體培養(yǎng)基的三角瓶中,將恒溫振蕩器放置其中,并進(jìn)行2 h震蕩培養(yǎng),然后就可以獲得兩種細(xì)菌的混懸液。

      1.2.4 接種培養(yǎng)

      使用移液管取出9 mL培養(yǎng)基,然后將其倒入50 mL的三角瓶中,并在三角瓶中加入1 mL、質(zhì)量濃度為50 g/L的乳酸鏈球菌肽試液,均勻搖晃,將其搖勻。根據(jù)同樣的方法,分別添加質(zhì)量濃度為0(無菌水,為對照組)、2、5、10、30 g/L的乳酸鏈球菌肽試液,因而,乳酸鏈球菌肽的實際使用量分別是0.0、0.2、0.5、1.0、3.0、5.0 g/L。然后使用移液管在上述三角瓶中分別添加1.0 mL的制備好的菌懸液。每一個質(zhì)量濃度共做3組重復(fù),并使用細(xì)菌過濾膜對每一個瓶口進(jìn)行包裹。置恒溫振蕩器內(nèi)37 ℃進(jìn)行18 h的震蕩培養(yǎng)。另外取1.1 mL無菌水,將其加入到包含9 mL培養(yǎng)基的三角瓶中,將其用作調(diào)零。

      使用同樣的方法分別制備溶菌酶的質(zhì)量濃度為0.0、0.2、0.5、1.0、3.0、5.0 g/L的培養(yǎng)液,使用與上述相同的方法進(jìn)行接種培養(yǎng)。

      1.2.5 OD值測定

      在培養(yǎng)完成后,從每一個三角瓶中取出1 mL培養(yǎng)液,同時利用無菌水對其進(jìn)行10倍稀釋,然后使用分光光度計,在550 nm波長的位置對其吸光值進(jìn)行測定,每一個樣品都進(jìn)行3次測定[2]。

      1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

      將實驗中獲得的數(shù)據(jù)使用SPSS 19.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行分析。

      2 結(jié)果與分析

      與對照組相比,乳酸鏈球菌肽對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌的抑菌效果隨著質(zhì)量濃度的增加不斷增強(qiáng)。在乳酸鏈球菌肽的質(zhì)量濃度為0.2 g/L,乳酸鏈球菌肽對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌的抑菌效果已經(jīng)比較明顯,在乳酸鏈球菌肽的質(zhì)量濃度為3.0 g/L和5.0 g/L時,其OD值已經(jīng)接近或者為0。在溶菌酶質(zhì)量濃度為0.3 g/L時,與對照組相比,其對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌的抑菌效果已經(jīng)比較明顯,在溶菌酶質(zhì)量濃度為3.0 g/L和5.0 g/L時,其OD值已經(jīng)接近或者為0。

      從總體上看,乳酸鏈球菌肽、溶菌酶對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌的抑菌效果隨著其質(zhì)量濃度的增加而不斷增強(qiáng)。

      3 討論

      乳酸鏈球菌肽又可以稱為乳球菌肽,它是一種通過蛋白質(zhì)發(fā)酵而提取的。乳酸鏈球菌肽可以很好地抑制大腸桿菌、金黃色葡萄球菌等細(xì)菌的生長。通常情況下,它對革蘭氏陰性菌的作用不是十分明顯,但是在冷凍、加熱等特定條件下,會使革蘭氏陰性菌死亡,起到好的殺菌效果。溶菌酶是一種水解酶,多存在于哺乳動物的體液、乳汁以及禽類蛋白中,同時在微生物以及植物中也有。溶菌酶一種很好的抑菌蛋白,分為酵母菌細(xì)胞壁溶解酶、細(xì)菌細(xì)胞壁溶解酶以及霉菌細(xì)胞壁溶解酶。溶菌酶在枯草桿菌、革蘭氏陽性菌等細(xì)菌中的效果很好,其本身無毒害,安全性很高,放心使用。

      4 結(jié)語

      乳酸鏈球菌肽、溶菌酶均對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌有很好的抑制作用??紤]到乳酸鏈球菌肽、溶菌酶均安全無害,因而其最佳抑菌濃度可以為1.0 g/L ,此時其細(xì)菌殺滅相對比較好。

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