杜艷麗+向仲朝+楊文婉

甲醛是具有刺激性臭味的無(wú)色液體，極易溶于水，35—40%的水溶液稱福爾馬林，在醫(yī)學(xué)上用作殺菌、防腐和消毒。甲醛是一種原生質(zhì)毒物，能使細(xì)胞質(zhì)的蛋白質(zhì)發(fā)生不可逆凝固；甲醛還是一種可疑潛在性的致癌物質(zhì)。

近年來(lái)，不法商販常用甲醛溶液加工或浸泡毛血旺、黃喉、毛肚、海參、魷魚、鮮鴨腸等水發(fā)食品，以改變其感官性狀在市場(chǎng)上銷售，嚴(yán)重危害了人們的身心健康，已經(jīng)引起社會(huì)的廣泛關(guān)注。在我國(guó)，食品衛(wèi)生法明確規(guī)定，甲醛或含甲醛的化合物禁止作為食品添加劑使用，并且對(duì)部分包裝材料中甲醛的允許殘留量作了明確的規(guī)定，因此，甲醛的監(jiān)測(cè)是一項(xiàng)非常重要的工作。

甲醛的定量分析有乙酰丙酮法、苯肼法、酚試劑法、柱前紫外衍生、氣相色譜法、示波極譜法等。這些方法對(duì)品種繁多的水發(fā)食品的分析，各有千秋。本文采用2，4—二硝基苯肼衍生，二氯甲烷（或正己烷）振搖萃取，直接進(jìn)樣（必要時(shí)過(guò)濾，或脫水分離），用超高效液相色譜測(cè)定，具有簡(jiǎn)便、快速、靈敏、精密度好、準(zhǔn)確度高、抗干擾能力強(qiáng)的特點(diǎn)；可以排除比色法的假陽(yáng)性樣品。經(jīng)實(shí)際應(yīng)用，結(jié)果令人滿意。

實(shí)驗(yàn)部分

儀器及工作參數(shù)。Agilent 1290 Infinity II液相色譜儀；色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18 （4.6×250mm，5μm）； UV—可見(jiàn)紫外檢測(cè)器，在線脫氣；流動(dòng)相：甲醇+0.02mol/L乙酸銨（65+35）；檢測(cè)波長(zhǎng)365nm；柱溫：室溫；流速：1.0ml/min；進(jìn)樣量20ul。

試劑。0.1% 2，4—二硝基苯肼：稱0.10g 2，4—二硝基苯肼溶于24ml濃鹽酸中，加水定容至100ml。甲醛標(biāo)準(zhǔn)液：取甲醛36～38%（V/V）2.8ml，用水稀釋至1L，約為1.0mg/ml，標(biāo)定[3]。0.02mol/L乙酸銨：稱1.54g乙酸銨，加水溶解并稀釋至1000ml，經(jīng)濾膜（0.45um）過(guò)濾。甲醇（色譜級(jí)）。

樣品和標(biāo)準(zhǔn)的測(cè)定。稱樣品適量，加水浸泡或直接取水發(fā)食品浸泡液1.00ml。另取0.010mg/ml甲醛標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液 0，0.050，0.10，0.50，1.00ml以及0.10mg/ml甲醛標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液0.50，1.00ml，加水至1.00ml，配成甲醛標(biāo)準(zhǔn)系列（ug/ml）0，0.50，1.00，5.00，10.0，50.0，100，于樣品和標(biāo)準(zhǔn)液中加0.1%2，4—二硝基苯肼0.50ml，混勻，60o水浴20min，冷卻后，加2.00ml二氯甲烷振搖提取2min，取下層二氯甲烷，20ul進(jìn)樣分析。甲醛的保留時(shí)間（tR）約為5.5min。

結(jié)果分析及討論

檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇。衍生試劑2，4—二硝基苯肼的最大吸收波長(zhǎng)在260nm左右，經(jīng)實(shí)驗(yàn)，與甲醛反應(yīng)生成的2，4—二硝基苯腙的最大吸收波長(zhǎng)在365nm左右。對(duì)甲醛的紫外衍生測(cè)定，本文選用365nm波長(zhǎng)。

流動(dòng)相的選擇。用甲醇+水作流動(dòng)相，低濃度甲醛的色譜分離圖有拖尾現(xiàn)象。選用甲醇+0.02mol/L乙酸銨（65+35）作流動(dòng)相，從水發(fā)毛肚樣品的色譜分離圖（圖1）可以看出，色譜圖基線平直，色譜峰型對(duì)稱，未被衍生的2，4—二硝基苯肼與甲醛反應(yīng)生成的2，4—二硝基苯腙能完全分離?？瞻讓?duì)照（圖2），無(wú)2，4—二硝基苯腙形成。

萃取液的選擇及保存時(shí)間。甲醛濃度較高時(shí)，用2，4—二硝基苯肼衍生后溶液中有棕色沉淀物生成，濃度越高，生成的沉淀物越多。實(shí)驗(yàn)證實(shí)，不經(jīng)萃取直接測(cè)定，色譜峰型不對(duì)稱，且靈敏度極低。本文選用2.0ml二氯甲烷一次萃取，即能滿足0～100mg/L甲醛衍生物的萃取。萃取液在室溫下放置72小時(shí)不影響結(jié)果測(cè)定。實(shí)驗(yàn)證實(shí)，如改用正己烷萃取，甲醛濃度偏高時(shí)，萃取不完全，線性范圍變窄。

衍生試劑的選擇及使用量的確定。衍生試劑可選擇硫酸阱或2，4—二硝基苯肼。硫酸阱形成的衍生物分子量小，出峰時(shí)間快，檢測(cè)的靈敏度低，抗干擾能力差； 2，4—二硝基苯肼的紫外衍生反應(yīng)，能迅速定量的進(jìn)行，只生成一種衍生物，即相應(yīng)的2，4—二硝基苯腙，并且，過(guò)量的衍生試劑不干擾甲醛的測(cè)定。衍生試劑的使用量，應(yīng)根據(jù)樣品中甲醛的含量決定。經(jīng)實(shí)驗(yàn)，浸泡液中甲醛在0～100mg/L范圍內(nèi)，只需加入0.1% 2，4—二硝基苯肼0.5ml即可，如果甲醛濃度≥100mg/L可以加入1.0ml以上。衍生試劑的用量隨甲醛濃度的增大而增加，甲醛濃度越高，剩下的衍生試劑越少。如果樣品中甲醛濃度過(guò)高，可以考慮增加衍生試劑的加入量或稀釋樣品提取液。

特殊樣品處理。實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，毛血旺、鴨腸、鵝腸等樣品，按方法操作，加二氯甲烷振搖后下層整體凝結(jié)成團(tuán)，二氯甲烷分層困難，遇到此種情況可先靜置一段時(shí)間，待上層分出大部分水后，用吸管除去，加適量無(wú)水Na2SO4，輕搖，即可分出澄清的二氯甲烷層，供進(jìn)樣測(cè)定用。二氯甲烷分層清楚的樣品，可直接吸取二氯甲烷層進(jìn)樣測(cè)定。

萃取次數(shù)問(wèn)題。經(jīng)實(shí)驗(yàn)確認(rèn)，按本法操作，樣品和標(biāo)準(zhǔn)一次萃取即可；這樣可省去多次萃取、分離、揮干等煩瑣步驟，從而減少工作強(qiáng)度，降低工作量。

線性范圍與最低檢出量。甲醛在0～100mg/L范圍內(nèi)，濃度C與峰面積（Area）呈直線相關(guān)關(guān)系，n=7，r=0.9992，a=150.1，b=244.1。方法最低檢出量，以Area=10，進(jìn)樣量20ul計(jì)為1.0ng，提取液的最低檢出濃度為0.050mg/L。

方法的精密度和準(zhǔn)確度。對(duì)樣品進(jìn)行了6次測(cè)定，濃度為0.56 mg/L，RSD=14%，濃度為1.1 mg/L，RSD=11%，濃度為4.56 mg/L，RSD=3.9%，濃度為10.4 mg/L，RSD=7.6%，濃度為55.6 mg/L，RSD=4.0%，濃度為100 mg/L，RSD=2.9%；對(duì)毛肚、黃喉、海參等樣品進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，加標(biāo)量1.5-85mg/L，回收量為1.4-90mg/L，回收率為93.3-110%，平均回收率為96.5-106%。

樣品的保存時(shí)間。樣品低溫保存7天，一般濃度無(wú)變化。樣品采集后，應(yīng)在3日內(nèi)測(cè)定完畢。

方法應(yīng)用

我們于2014年至2016年，對(duì)綿陽(yáng)市內(nèi)農(nóng)貿(mào)集市銷售的部分水發(fā)玉蘭片、香菇、黃喉、毛肚、章魚、海蟄絲、鮮鴨腸、鮮鵝腸、豬血等67個(gè)樣品的浸泡液進(jìn)行抽樣檢測(cè)，其中3個(gè)檢出甲醛，濃度為0.18-8.2mg/L。其中毛肚陽(yáng)性樣品1個(gè)，濃度8.2mg/L；香菇陽(yáng)性樣品1個(gè)，濃度為0.85mg/L；鮮鴨腸1個(gè)，濃度為0.47mg/L。同時(shí)與比色法作了對(duì)比實(shí)驗(yàn)分析，共排除比色法的假陽(yáng)性或弱陽(yáng)性樣品2個(gè)。endprint