張 朔

（遼寧省沈陽市第七人民醫(yī)院，遼寧 沈陽 110000）

高效液相色譜主要是以液體為流動相，應(yīng)該高壓輸液系統(tǒng)，將不同極性的單一溶劑或者不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定裝置的色譜柱，使成分在色譜柱中分離，在使用特定的檢測儀進(jìn)行檢測，進(jìn)而實現(xiàn)對實驗樣品的分析，現(xiàn)已成為化學(xué)、醫(yī)學(xué)以及工農(nóng)學(xué)領(lǐng)域中重要的分離分析技術(shù)[1-3]。本次研究旨在探討高效液相色譜法在醫(yī)學(xué)藥品檢驗中的效果和價值，具體內(nèi)容如下。

1 儀器與試劑

1.1 試劑和藥品：本次研究使用藥物和試劑主要包括：銀杏葉提取物（國藥準(zhǔn)字H20140768，德國威瑪舒培博士藥廠生產(chǎn)）、重蒸水、甲醇、磷酸和黃酮貳元槲皮素對照物。

1.2 儀器：試驗儀器選用Waters高效液相色譜儀 E2695，S400型積分儀，常規(guī)脫氣機(jī)以及YMC-Pack ODS-A色譜柱（粒徑：5 μm，孔徑：120 ?，尺寸：250 mm×10 mm），定量管為10 μL，檢測儀器為可編程序紫外檢測器。

1.3 樣品制備：取銀杏提取物0.2 g，置入40 mL甲醇中混合搖勻，待完全溶解后，加入1.5 mol/L的鹽酸溶液45 mL混合搖勻，將搖勻后的容易放置于溫度為37 ℃的水浴鍋中，加熱時間設(shè)置為100～120 min，待規(guī)定時間到后取出標(biāo)本進(jìn)行冷卻，完成之后將溶液置入50 mL容量瓶中，并使用甲醛進(jìn)行定容，以作備用。

1.4 方法：取0.2 g藥物樣品量，對照組實施薄層色譜法檢測，方法為：制備薄層板：取1份固定相和3份水在研缽中研磨混合，將表面氣泡去除后，倒入涂布器中，在玻板上進(jìn)行平穩(wěn)涂布，厚度設(shè)置為0.2～0.3 mm，涂布完成后，將玻板取下，放置于水平臺上于室溫晾干，置于存放有干燥劑的干燥箱中備用；點樣：采用半自動點樣儀進(jìn)行自動點樣，在室內(nèi)加入適量的展開劑，將事先點樣好的薄層板放入加入展開劑的展開室中，密封室蓋，待展開到10～15 cm時將薄層板取出晾干，按展開因素進(jìn)行檢測，按照試劑顯色法，通過顯色劑硫酸溶液對薄層板進(jìn)行顯色，根據(jù)比移值和事先準(zhǔn)備好的對照物，按同法所得的比移值做對比，用以鑒別藥品。觀察組使用高效液相色譜法，方法為：在使用檢測儀器前準(zhǔn)備好流動相：甲醇混入濃度為0.4%的磷酸溶液中，比例為55∶45，流速設(shè)置為1.0 mL/min，柱溫設(shè)置為25～27 ℃，進(jìn)樣體積為10 μL，波長設(shè)置為360 nm，參數(shù)設(shè)置完成之后，按照規(guī)定步驟對藥品進(jìn)行檢驗。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法：所得數(shù)據(jù)納入SPSS17.0軟件分析，計量資料以（±s）表示，t檢驗；計數(shù)資料用（%）表示，卡方檢驗，P＜0.05有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩組分離率、純度和精密度對比：對照組對槲皮素的分率率為89.71%、純度為90.12%，對山萘素的分離率為92.31%、純度為90.22%，異鼠李素的分離率為89.85%、純度為90.04%；觀察組對槲皮素的分率率為98.78%、純度為99.87%，對山萘素的分離率為98.76%、純度為99.98%，異鼠李素的分離率為98.88%、純度為99.99%，觀察組對槲皮素、山萘素和異鼠李素的分離率、純度均高于對照組（P＜0.05）。

2.2 兩組對山萘素回收率對比：對照組山萘素加入量為2.0 mg，檢測量為1.78 mg，產(chǎn)品回收率為89.00%；觀察組山萘素加入量為2.0 mg，檢測量為1.97 mg，產(chǎn)品回收率為98.50%，觀察組山萘素加入樣產(chǎn)品回收率高于對照組（P＜0.05）。

3 討 論

高效液相色譜法即高壓液相色譜或者高分力度液相色譜，是色譜法一個重要的分支，其原理主要是通過高壓輸液系統(tǒng)，將單一溶劑或者混合溶劑裝入固定相色譜柱中進(jìn)行分離，當(dāng)分離完成后，置入檢測器檢測，進(jìn)而實現(xiàn)樣品分析。由以上原理操作可以看出高效液相色譜法和經(jīng)典液相色譜法的原理基本想要，但高效液相色譜法使用了靈敏度高的檢測儀以及高壓輸液泵，相較于經(jīng)典方法來講，其準(zhǔn)確性更加高。

將高效液相色譜法應(yīng)用于藥品檢驗中主要有以下幾種特點：①高壓：高效液相色譜法流動相為液體，當(dāng)流動相經(jīng)過色譜柱的時候，阻力增大，為通過色譜柱必須增加載液壓力；②高速：高效液相色譜法具有分析速度快和載液流速快的特點，分析一個樣品的時間一般在15～30 min，甚至更短；③高效：分離效能高，合理使用固定相和流動相可以達(dá)到最佳分離效果；④靈敏度高：紫外檢測器可達(dá)0.01 ng，進(jìn)樣量在μL數(shù)量級。本次研究中發(fā)現(xiàn)，觀察組對槲皮素、山萘素和異鼠李素的分離率、純度均高于對照組（P＜0.05）。結(jié)合高效液相色譜法特點可以發(fā)現(xiàn)，高效液相色譜法應(yīng)用于藥品檢驗中可以提供準(zhǔn)確的檢驗結(jié)果，增加分離效果和回收率。

綜上所述，將高效液相色譜法應(yīng)用于藥品檢驗中，檢測快速，結(jié)果準(zhǔn)確，可以明顯提高分離效果和回收率，值得推廣。