謝賢和 鄭偉麗 林萬尊 陳婷

[摘要] 目的 探討X線修復(fù)交叉互補(bǔ)基因1（XRCC1）Arg399Gln多態(tài)性對非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）患者對鉑類藥物化療敏感性的影響。 方法 選取23例初治的NSCLC患者，采用鉑類為主的化療方案。在化療前，用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性分析（PCR-RFLP）檢測外周血XRCC1 Arg399Gln基因型多態(tài)性，比較其不同基因型對化療敏感性的影響。 結(jié)果 XRCC1 Arg399Gln 存在3個(gè)基因型，即Arg/Arg、Arg/Gln、Gln/Gln，其基因分布頻率分別為43.5%（10/23）、39.1%（9/23）、17.4%（4/23）；3種基因型的化療有效率分別為60.0%（6/10）、44.4%（4/9）、25.0%（1/4），其有效率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=1.445，P=0.648>0.05）。 結(jié)論 XRCC1 Arg399Gln 位點(diǎn)基因多態(tài)性與NSCLC對鉑類藥物的化療敏感性無明顯影響。

[關(guān)鍵詞] 非小細(xì)胞肺癌；XRCC1；基因多態(tài)性；化學(xué)治療

[中圖分類號(hào)] R734.2；R730.53 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-9701（2018）06-0001-03

[Abstract] Objective To investigate the influence of XRCC1 Arg399Gln polymorphism genotype on platinum-based chemotherapy sensitivity in non-small cell lung cancer. Methods A total of 23 NSCLC patients were recruited， and were treated with platinum-based chemotherapy. Polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism（PCR-RFLP） analysis was performed to detect XRCC1 Arg399Gln polymorphism genotype from peripheral-blood， and the impact of XRCC1 Arg399Gln polymorphism on platinum-based chemotherapy sensitivity were compared. Results XRCC1 Arg399Gln contained three genotypes，Arg/Arg， Arg/Gln， Gln/Gln， and frequency distribution was 43.5%（10/23）， 39.1%（9/23）， 17.4%（4/23）； the response rates of chemotherapy were 60.0%（6/10）， 44.4%（4/9）， 25.0%（1/4）. There was no significant difference in response rates of chemotherapy among these three genotypes（χ2=1.445， P=0.648>0.05）. Conclusion Polymorphism in the XRCC1 Arg399Gln appears no significant impact on the response of NSCLC to platinum-based chemotherapy sensitivity.

[Key world] Non-small cell lung cancer； XRCC1； Genetic polymorphism； Chemotherapy

原發(fā)性肺癌（以下簡稱“肺癌”）位于全國惡性腫瘤發(fā)病率及死亡率的首位[1]，80%～90%的肺癌病理類型為非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）[2]，早期肺癌常無臨床癥狀或癥狀不典型，容易導(dǎo)致漏診或誤診[3]，57%的初診患者已經(jīng)發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，不適合手術(shù)治療，因此化療是晚期NSCLC主要的治療手段[4]。在我國，聯(lián)合鉑類的兩藥化療方案是晚期NSCLC最常見的治療方案[5]。但不同的個(gè)體對鉑類藥物敏感性不同，導(dǎo)致療效和耐受性方面有較大的個(gè)體差異。研究表明，鉑類藥物通過DNA損傷誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞死亡，從而發(fā)揮抗腫瘤作用[6]。

X線修復(fù)交叉互補(bǔ)基因1（X-ray repair cross complementing gene 1，XRCC1）是DNA堿基切除修復(fù)（單鏈修復(fù)）系統(tǒng)（single-strand break，SSB）中的重要成分[7]，參與鉑類藥物引起的DNA損傷修復(fù)過程，與NSCLC患者鉑類藥物敏感性和療效相關(guān)，因此研究XRCC1基因?qū)︻A(yù)測NSCLC患者對鉑類藥物的敏感性可能具有較高的臨床價(jià)值[8]。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院2016年8月～2017年11月初治的NSCLC患者23例，均無手術(shù)治療機(jī)會(huì)。ⅢA期4例，ⅢB期3例，Ⅳ期16例。其中男18例，女5例；年齡39～77歲，中位年齡53歲；均為漢族人。參考UICC 國際 TNM 分期標(biāo)準(zhǔn)：其中腺癌16例，鱗癌6例，腺鱗癌1例。入選標(biāo)準(zhǔn)：病例的一般資料及化療方案見表 1。所有病例均經(jīng)病理檢查證實(shí)為NSCLC；CT證實(shí)有可測量腫瘤病灶；化療前患者血常規(guī)、肝腎功能均正常，心電圖無明顯異常；功能狀 態(tài)Karnofsky評分均>60分。

1.2 樣本采集

所有病例均在化療前抽取2 mL外周血，置乙二胺四乙酸鈉抗凝管?；颊呷⊥庵苎獦?biāo)本前均簽署知情同意書，本研究方案獲得福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.3實(shí)驗(yàn)方法

使用EasyPure Blood Genomic DNA（北京全式金）試劑盒提取外周血DNA，DNA 置于-20℃低溫冰箱保存?zhèn)溆?。以聚合酶鏈反?yīng)-限制性片段長度多態(tài)性（PCR-RFLP）方法進(jìn)行XRCC1基因Arg399Gln多態(tài)位點(diǎn)分析[9]。引物為F：5-TGTCTCCCCTGTCTCGT-TCC—3；R：5-ACTTGTTCTCCCACCCCTGA-3，PCR反應(yīng)總體積50 μL，其中含有0.1～0.2 μg模板 DNA、0.2 μmol/L各引物、0.2 mmol/L dNTP、1.25～1.50 UTaq聚合酶（北京全式金）、5 μL 10×反應(yīng)緩沖液，用ddH2O2補(bǔ)至50 μL。PCR條件為：95℃預(yù)變性5 min，95℃ 30 s、56℃ 30 s、72℃ 30 s進(jìn)行35個(gè)循環(huán)，72℃延伸10 min。擴(kuò)增結(jié)束后PCR產(chǎn)物用MspI內(nèi)切酶（Biolabs）37℃消化30 min，2%瓊脂糖凝膠（Biowest）電泳，核酸染料（上海生工生物工程有限公司）染色確定XRCC1基因Arg399Gln多態(tài)性。隨機(jī)抽取30%樣本，雙盲法重復(fù)檢測加以驗(yàn)證，結(jié)果完全一致。

1.4 治療方案

所有患者均接受鉑類藥物為基礎(chǔ)的聯(lián)合方案化療。其中卡鉑（CBP）治療者5例，順鉑（DDP）治療者10例，奈達(dá)鉑（NDP）治療者8例?；煼桨赴ㄣK類藥物加多西他賽或紫杉類（PTX）藥物。[附注：卡鉑注射液，百時(shí)美施貴寶（中國）投資有限公司，進(jìn)口藥品注冊號(hào)：H20160423，規(guī)格：150 mg/15 mL/支；注射用奈達(dá)鉑，南京先聲東元制藥有限公司，國藥準(zhǔn)字：H2003 0884，規(guī)格：10 mg；順鉑注射液，江蘇豪森藥業(yè)集團(tuán)有限公司，國藥準(zhǔn)字：H20040813，規(guī)格：6 mL：30 mg；多西他賽，上海創(chuàng)諾制藥有限公司，國藥準(zhǔn)字：H20113165，規(guī)格：0.5 mL：20 mg]。

1.5 療效評定標(biāo)準(zhǔn)

參照WHO實(shí)體瘤近期客觀療效評定標(biāo)準(zhǔn)分為完全緩解（CR）、部分緩解（PR）、穩(wěn)定（SD）和進(jìn)展（PD）。完全緩解（CR）：全部可測量病灶完全消失持續(xù)4 周；部分緩解（PR）：病灶的最大直徑與最大垂直橫徑乘積總和減少>50%，持續(xù)至少4 周；穩(wěn)定（SD）：病灶最大直徑與最大垂直橫徑乘積總和減少<50%或增大<25%，持續(xù)至少 4 周且無新病灶出現(xiàn)；進(jìn)展（PD）：病灶的最大直徑與最大垂直橫徑乘積總和增大>25%，或出現(xiàn)新的病灶。以 CR+PR為有效。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS24.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)或Fisher確切概率法檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 基因型分布

XRCC1基因Arg399Gln擴(kuò)增后出現(xiàn)大小為463 bp產(chǎn)物片段，經(jīng)MspⅠ限制性內(nèi)切酶酶切后見463 bp、277 bp和186 bp三種長度片段，其中野生純合型（Arg/Arg）可見 277 bp和186 bp兩條帶，突變純合型（Gln/Gln）可見463 bp一條帶，雜合型（Arg/Gln）可見463 bp、277 bp、和186 bp三條帶，見圖1。

2.2基因型分布及化療有效率的關(guān)系

23例NSCLC患者XRCC1 Arg399Gln基因分布頻率分別為Arg/Arg：43.5%（10/23）、Arg/Gln：39.1%（9/23）、Gln/Gln：17.4%（4/23）。攜帶XRCC1基因Arg399Gln Arg/Arg、Arg/Gln、Gln/Gln基因型的患者，客觀有效（CR+PR）率分別為60.0%（6/10）、44.4%（4/9）、25.0%（1/4）。XRCC1基因Arg399Gln Arg/Arg、Arg/Gln、Gln/Gln三種基因型鉑類化療有效率差異無顯著性（χ2=1.445，P=0.648>0.05），見表2。

3 討論

人體內(nèi)的 DNA修復(fù)系統(tǒng)主要包括堿基切除修復(fù)（BER）、核苷酸切除修復(fù)（NER）和錯(cuò)配修復(fù)（MMR）[10，11]，XRCC1是重要的DNA修復(fù)基因，通過與多聚ADP核糖聚合酶、DNA連接酶 Ⅲ及DNA聚合酶β等作用，來修復(fù)各種DNA損傷[12，13]?；虻亩鄳B(tài)性可能會(huì)影響XRCC1正常功能，降低 DNA修復(fù)能力[14]。

鉑類藥物是臨床治療NSCLC最常用的化療藥物之一。鉑類藥物進(jìn)入腫瘤細(xì)胞后，與其DNA雙鏈結(jié)合形成加合物，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞DNA發(fā)生鏈間或者鏈內(nèi)的交聯(lián)，引起DNA復(fù)制障礙，從而導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞凋亡[15]。當(dāng)DNA結(jié)合物形成時(shí)，部分的加合物會(huì)迅速被DNA修復(fù)系統(tǒng)所識(shí)別和清除。如果在腫瘤細(xì)胞凋亡前清除加合物，則腫瘤細(xì)胞就會(huì)存活。此為腫瘤細(xì)胞對鉑類藥物的耐藥機(jī)制。因此檢測XRCC1基因型多態(tài)性對預(yù)測化療敏感性具有一定的指導(dǎo)意義。

許崇安等[16]運(yùn)用PCR-RFLP的方法對130例晚期非小細(xì)胞肺癌的患者進(jìn)行了XRCC1與XRCC3多態(tài)性與鉑類化療關(guān)系的研究，結(jié)果顯示XRCC1基因Arg399位點(diǎn)Arg/Arg野生基因型患者的化療有效率明顯高于Arg/Gln、Gln/Gln兩種基因型患者。XRCC1與XRCC3的多態(tài)聯(lián)合可能與NSCLC鉑類化療敏感性有關(guān)。史美琪[17]也對112例晚期肺癌的患者進(jìn)行XRCC1單核苷酸多態(tài)性與鉑類化療關(guān)系進(jìn)行分析，結(jié)果顯示XRCC1基因Arg399位點(diǎn)Gln/Gln、Arg/Gln、Arg/Arg基因型攜帶者中，化療有效率分別為36.4%、52.8%和43.1%，三者之間的差異無顯著性。Liu等[18]也對199例晚期非小細(xì)胞肺癌進(jìn)行XRCC1多態(tài)性與鉑類化療關(guān)系的研究，但研究結(jié)果顯示XRCC1多態(tài)性與鉑類化療敏感性及患者生存時(shí)間無明顯的相關(guān)。另外，其他的研究者也進(jìn)行鼻咽癌[19]、卵巢癌[20]、結(jié)直腸癌[21]等多種腫瘤化療敏感性與該基因多態(tài)性的相關(guān)性研究，但結(jié)果不完全一致。所以目前XRCC1基因多態(tài)性與化療敏感性的關(guān)系仍需深入研究。

本研究發(fā)現(xiàn)XRCC1基因Arg399Gln基因表達(dá)中，攜帶Arg/Arg基因型患者化療有效率為60.0%，高于攜帶Gln等位基因者：Arg/Gln基因型患者為44.4%，Gln/Gln基因型患者為25.0%。但Arg399Gln Arg/Arg、Arg/Gln、Gln/Gln三種基因型與鉑類化療有效率差異無顯著性（χ2=1.445，P=0.648>0.05）。結(jié)果可能是由于肺癌的發(fā)生是多因素、多階段和多基因的過程，本研究僅對XRCC1基因Arg399位點(diǎn)進(jìn)行研究分析具有一定的局限性。在今后的研究中，需對其他基因進(jìn)行更深入的獨(dú)立與聯(lián)合分析。另外，本研究樣本量小，需要進(jìn)一步擴(kuò)大樣本做深入研究，為今后非小細(xì)胞肺癌鉑類化療提供證據(jù)，更好地指導(dǎo)臨床實(shí)踐。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 陳萬青，鄭榮壽，張思維，等. 2013年中國惡性腫瘤發(fā)病和死亡分析[J].中國腫瘤，2017，26（1）：1-7.

[2] 王中華，徐兵河，梁剛，等.DNA修復(fù)基因XRCC1單核苷酸多態(tài)性與晚期非小細(xì)胞肺癌鉑類藥物化療后生存期的關(guān)系[J].中國綜合臨床，2006，（1）：1-3.

[3] 常志強(qiáng). 12例肺癌誤診為肺膿腫臨床分析[J].空軍醫(yī)學(xué)雜志，2017，33（2）：139-140.

[4] 石遠(yuǎn)凱，孫燕，于金明，等.中國晚期原發(fā)性肺癌診治專家共識(shí)（2016年版）[J].中國肺癌雜志，2016，19（1）：1-15.

[5] Xue C，Hu Z，Jiang W，et al. National survey of the medical treatment status for non-small cell lung cancer（NSCLC）in China[J]. Lung Cancer，2012，77（2）：371-375.

[6] Kelland L.The resurgence of platinum-based cancer che-motherapy[J]. Nat Rev Cancer，2007，7（8）：573-584.

[7] Xu W，Chen Q，Wang Q et al.JWA reverses cisplatin resistance via the CK2-XRCC1 pathway in human gastric cancer cells[J].Cell Death Dis，2014，（5）：e1551.

[8] 劉東聲.非小細(xì)胞肺癌NP方案化療敏感性與DNA修復(fù)基因XRCC1多態(tài)性的關(guān)系研究[J]. 當(dāng)代醫(yī)藥論叢，2014，（15）：210-211.

[9] 王威，金如鋒，吳芬，等.多重PCR-RFLP檢測XRCC1基因兩位點(diǎn)多態(tài)性[J].中國工業(yè)醫(yī)學(xué)雜志，2008，21（1）：3-6.

[10] Schiller JH，Harrington D，Belani CP，et al.Comparison of four chemotherapy regimens for advanced non-small-cell lung cancer[J]. N Engl J Med，2002，346（2）：92-98.

[11] Xu W，Wang S，Chen Q，et al. TXNL1-XRCC1 pathway regulates cisplatin-induced cell death and contributes to resistance in human gastric cancer[J]. Cell Death Dis，2014， 5：e1055.

[12] 蔣祝昌. XRCC1與DNA修復(fù)[J].國外醫(yī)學(xué)（生物醫(yī)學(xué)工程分冊），2003，26（5）： 234-237.

[13] 査燕燕，張軍寧，南秀麗，等. NP方案聯(lián)合放療治療Ⅲ期NSCLC的近期療效與XRCC1基因Codon399單核苷酸多態(tài)性的相關(guān)性[J].實(shí)用癌癥雜志，2012，27（5）：472-474.

[14] 成莉，李琳，邢輝. XRCC1基因多態(tài)性與卵巢癌對鉑類藥物化療敏感性的相關(guān)性研究[J]. 臨床腫瘤學(xué)雜志，2014，19（4）：312-317.

[15] Guminski AD，Harnett PR，deFazio A.Scientists and clinicians test their metal-back to the future with platinum compounds[J].Lancet Oncol，2002，3（5）：312-318.

[16] 許崇安，王小杰，張曄，等. XRCC1和XRCC3單核苷酸多態(tài)性與晚期非小細(xì)胞肺癌鉑類藥物化療療效的相關(guān)性[J]. 中國肺癌雜志，2011，14（12）：912-917.

[17] 史美祺.DNA修復(fù)酶XRCC1基因多態(tài)性與晚期肺癌化療敏感性的關(guān)系研究[J].臨床腫瘤學(xué)雜志，2006，（8）：575-578.

[18] Liu L，Yuan P，Wu C，et al.Assessment of XPD Lys751Gln and XRCC1 T-77C polymorphisms in advanced non-small-cell lung cancer patients treated with platinum-based chemotherapy[J]. Lung Cancer，2011，73（1）：110-115.

[19] 劉龍靜. XRCC1單核苷酸多態(tài)性與鼻咽癌鉑類化療敏感性的相關(guān)性研究[D].廣西：廣西醫(yī)科大學(xué)，2014.

[20] Michalska MM，Samulak D，Romanowicz H，et al.Single nucleotide polymorphisms （SNPs） of hOGG1 and XRCC1 DNA repair genes and the risk of ovarian cancer in Polish women[J]. Tumour Biol，2015，36（12）：9457-963.

[21] 曾福仁.XRCC1基因多態(tài)性與結(jié)直腸癌易感性及其化療敏感性的關(guān)系[D].廣州：南方醫(yī)科大學(xué)，2014.

（收稿日期：2017-12-20）