王愛紅,刁 柯,龐秋霞*,成延萍,趙菊梅,魏曉麗

(1延安大學(xué)醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中心,延安 716000;2延安市腫瘤防治研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;3延安大學(xué)醫(yī)學(xué)院;*通訊作者,E-mail:qiuxia-pang@sohu.com)

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本收集

收集2014-01～2017-07延安市人民醫(yī)院及延安大學(xué)附屬醫(yī)院病理科臨床資料完整的子宮內(nèi)膜癌石蠟包埋組織36例,患者年齡21-79歲,平均(52.14±8.9)歲。其中病理分期:Ⅰ期10例,Ⅱ期14例,Ⅲ期8例,Ⅳ4例;組織學(xué)類型:腺癌29例,腺鱗癌7例;組織學(xué)分級:高分化15例,中分化13例,低分化8例。所有腫瘤患者術(shù)前均未接受過放療、化療或性激素治療,同時選取同期因其他原因行子宮切除的正常子宮內(nèi)膜組織15例作為對照組,年齡25-66歲,平均年齡(46.3±9.5)歲。作為陽性對照的2例乳腺癌石蠟包埋標(biāo)本,來自延安大學(xué)附屬醫(yī)院病理科,均為浸潤性導(dǎo)管癌Ⅲ級。

1.2 主要試劑

鼠抗人AIB1單克隆抗體[7]工作濃度1 ∶50;Bcl-2單克隆抗體工作濃度為1 ∶100,均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.3 免疫組化檢測

將組織切片經(jīng)二甲苯脫蠟,梯度乙醇脫水;在室溫下孵育10 min,電爐煮沸法修復(fù)抗原,以PBS沖洗,加3%BSA封閉,室溫條件下放置10 min;滴加相應(yīng)一抗,4 ℃冰箱孵育過夜,PBS沖洗;滴加第二抗原,室溫條件下孵育30 min,后用PBS沖洗;DAB顯色,沖洗,蘇木素對比染色,梯度酒精脫水、二甲苯透明、中性樹膠封片。

1.4 結(jié)果判定

細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒即判斷為陽性細(xì)胞,無顯色則為陰性結(jié)果。采用Sinicrope改良法以陽性信號所占的面積比例分級,<5%為(-),5%-25%為(+),25%-50%為(++),>50%為(+++)。

1.5 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 AIB1蛋白和Bcl-2蛋白在正常子宮內(nèi)膜及子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)

子宮內(nèi)膜癌患者和正常子宮內(nèi)膜組織患者的年齡差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。免疫組化結(jié)果顯示,AIB1、Bcl-2蛋白在子宮內(nèi)膜癌的表達(dá)明顯增加,可見細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)棕黃色顆粒明顯增多(見圖1、2)。15例正常子宮內(nèi)膜組織中,2例增生期子宮內(nèi)膜AIB1蛋白表達(dá)陽性,陽性率13.3%;36例子宮內(nèi)膜癌中,17例AIB1表達(dá)陽性,陽性率47.2%,二者之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=5.20,P<0.05)。子宮內(nèi)膜癌中Bcl-2蛋白的陽性表達(dá)率高于正常子宮內(nèi)膜組織,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=15.31,P<0.05,見表1)。

2.2 AIB1蛋白及Bcl-2蛋白表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌臨床病理因素的關(guān)系

臨床Ⅲ-Ⅳ期病例中AIB1的陽性表達(dá)率明顯高于Ⅰ-Ⅱ期病例,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=5.57,P<0.05)。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中AIB1的表達(dá)高于陰性組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=5.71,P<0.05)。未發(fā)現(xiàn)不同腫瘤直徑、組織學(xué)分級、病理類型、ER表達(dá)、PR表達(dá)間AIB1蛋白表達(dá)存在差異(均P>0.05)。腺癌組織Bcl-2蛋白的陽性率高于腺鱗癌組織,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),未發(fā)現(xiàn)其他臨床特征組別間的Bcl-2蛋白陽性率存在顯著性差異(均P>0.05)。

表1AIB1、Bcl-2在子宮內(nèi)膜癌及正常子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)例(%)

Table1ExpressionofAIB1andBcl-2innormalendometriumandendometrialcarcinomacases(%)

組別nAIB1陽性Bcl-2陽性子宮內(nèi)膜癌 3617(47.2)30(83.3)正常子宮內(nèi)膜152(13.3)4(26.7)

A. AIB1蛋白 B.Bcl-2蛋白圖1 AIB1和Bcl-2在子宮內(nèi)膜癌組織的陽性表達(dá)(SP法,×100)Figure 1 Positive expression of AIB1 and Bcl-2 in endometrial carcinoma tissues(SP,×100)

2.3 AIB1和Bcl-2相關(guān)性分析

經(jīng)Spearman等級相關(guān)分析,子宮內(nèi)膜癌中AIB1蛋白與Bcl-2蛋白的表達(dá)成正相關(guān)(r=0.303,P<0.05,見表3)。

3 討論

AIB1屬于p160家族,是一種多功能蛋白,已在乳腺癌、卵巢癌、宮頸癌等多種腫瘤中被檢測到,證實(shí)了它和腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移有關(guān)[8-11]。另有學(xué)者認(rèn)為AIB1是索拉非尼、藤黃酸等藥物抗腫瘤治療的重要靶標(biāo),和腫瘤激素治療的敏感性有關(guān)[12-15]。Balmer等[16]發(fā)現(xiàn)AIB1高表達(dá)使ER的作用增強(qiáng),導(dǎo)致子宮內(nèi)膜增生,促進(jìn)腫瘤的發(fā)生。此外,AIB1的表達(dá)量和子宮內(nèi)膜癌的預(yù)后不良相關(guān),有可能影響激素治療的敏感性。本研究結(jié)果顯示,子宮內(nèi)膜癌組織中AIB1表達(dá)高于對照子宮內(nèi)膜組織,且AIB1表達(dá)陽性率和與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期相關(guān),就印證了這一點(diǎn)。

表2子宮內(nèi)膜癌中AIB1蛋白和Bcl-2蛋白表達(dá)的臨床病理意義

Table2TherelationshipbetweentheexpressionofAIB1protein,Bcl-2proteinandclinicopathologicalfeaturesinendometrialcarcinoma

組別nAIB1Bcl-2陽性(例)陽性率(%)χ2P陽性(例)陽性率(%)χ2P 腫瘤直徑0.1110.946-1.000 <2 cm9444.4888.9 2-5 cm18950.01583.3 >5 cm9444.4777.7 病理類型0.0660.7974.2910.038 腺癌291448.32689.7 腺鱗癌7342.9457.1 臨床分期5.5720.0180.9000.343 Ⅰ-Ⅱ期24830.02187.5 Ⅲ-Ⅳ期12975.0975.0 組織學(xué)分級4.2610.119-1.000 Ⅰ級151066.71280.0 Ⅱ級13538.51184.6 Ⅲ級8225.0787.5 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移5.7070.0170.3600.549 無16425.01487.5 有201365.01675.0 ER表達(dá)3.1840.0741.6590.198 陰性281139.32382.1 陽性8675.0887.5 PR表達(dá)1.7120.191-0.643 陰性251040.02080.0 陽性11763.61090.9

表3AIB1與Bcl-2在子宮內(nèi)膜癌表達(dá)的相關(guān)性分析

Table3CorrelationbetweenAIB1andBcl-2expressioninendometrialcarcinoma

AIB1Bcl-2-++++++合計 -15161032 +12003 ++11316 +++021710 合計176101851

有研究認(rèn)為,AIB1通過ErbB和Wnt/β-catenin通路促進(jìn)癌癥細(xì)胞增殖、生存和浸潤[17]。對于雌激素敏感的腫瘤,如乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌、卵巢癌,ER途徑在癌變過程中發(fā)揮重要作用[18,19]。張麗芳等[20]研究發(fā)現(xiàn),子宮內(nèi)膜癌組織中AIB1蛋白陽性表達(dá)率顯著高于不典型增生內(nèi)膜和正常子宮內(nèi)膜組織,ER陽性子宮內(nèi)膜癌組織中AIB1蛋白表達(dá)明顯高于ER陰性組織,這與本研究的發(fā)現(xiàn)一致。

組織病理學(xué)研究發(fā)現(xiàn),Bcl-2在子宮內(nèi)膜非典型增生階段表達(dá)較高,而在腺癌階段表達(dá)率逐漸降低,表明在細(xì)胞異常增殖的早期即有Bcl-2基因機(jī)制的參與[21]。研究表明,玉米烯酮可通過Bcl-2家族和激酶依賴信號通路誘導(dǎo)子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞明顯凋亡[22]。還有學(xué)者證明子宮內(nèi)膜腺體表皮的孕激素受體和Bcl-2蛋白表達(dá)增高,形成促進(jìn)凋亡和抑制凋亡的平衡,是引起絕經(jīng)后子宮內(nèi)膜萎縮的重要原因[23]。另有學(xué)者證實(shí),沉默AIB1可以下調(diào)Bcl-2,Bcl-6和cyclin D3的表達(dá),抑制B細(xì)胞非霍金淋巴瘤的發(fā)展[24]。某種程度上說明了AIB1和Bcl-2的相關(guān)性。

本文發(fā)現(xiàn)了AIB1和Bcl-2在子宮內(nèi)膜組織中表達(dá)的相關(guān)性,兩者或許協(xié)同作用促使子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展,具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究。有學(xué)者報道腫瘤的抗孕激素治療的內(nèi)在機(jī)制是通過提高SMRT/AIB1平衡，進(jìn)一步調(diào)控CCND1(cyclin D1)和MYC啟動子的活性，選擇性抑制孕激素受體A過表達(dá)[25]。另有研究發(fā)現(xiàn),Bcl-2/Bax凋亡通路在雌激素誘導(dǎo)的子宮內(nèi)膜增生中發(fā)揮重要作用[26]。此外,AIB1作為雌激素受體共活化物,與子宮內(nèi)膜的不同生理周期有明顯的關(guān)系。下一步,我們將增加樣本量進(jìn)一步證實(shí)AIB1蛋白表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌療效、預(yù)后的關(guān)系,或開展相關(guān)的基礎(chǔ)研究,以期明確AIB1是否可作為子宮內(nèi)膜癌的潛在治療靶點(diǎn)[27]。

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